Frequency of human herpesvirus 6 DNA detection in cerebrospinal fluid in immunocompetent children and its diagnostic value

Full Text

ОБОСНОВАНИЕ

Для диагностики нейроинфекции традиционно используют этиологическое исследование ликвора. Вирус герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6) — широко распространённый герпесвирус человека, вызывающий ряд заболеваний, преимущественно у детей [1]. ВГЧ-6 обладает нейротропными свойствами и вызывает до 30% фебрильных судорог, возникающих на фоне внезапной экзантемы или лихорадки без сыпи [2–5]. Также исследователи связывают ВГЧ-6 с височной эпилепсией [6], судорогами без лихорадки и другими заболеваниями нервной системы у детей и взрослых [7]. В литературе описаны и более редкие синдромы тяжёлого поражения центральной нервной системы (ЦНС) вследствие инфицирования ВГЧ-6. Среди них встречают случаи фатального острого некротизирующего энцефалита [8–10], энцефалопатии [11], аутоиммунного энцефалита, энцефалит Расмуссена [7, 12]. Хорошо изучен ВГЧ-6-энцефалит у иммунокомпрометированных пациентов, который развивается после трансплантации органов и тканей (лимбический энцефалит) [13].

Наименее изученным является ВГЧ-6-менингоэнцефалит у иммунокомпетентных пациентов. Подобное состояние может выступать как проявлением, так и осложнением первичной ВГЧ-6-инфекции [14, 15]. Согласно немногочисленным данным, возраст манифестации ВГЧ-6-менингоэнцефалита составляет от 2 мес. до 3 лет [16, 17], что соответствует пику выявления первичной инфекции. В ретроспективном исследовании в Италии [18] авторы изучили образцы спинномозговой жидкости (СМЖ) 304 детей с подозрением на вирусный энцефалит. У 8 пациентов (4,8%) был обнаружен ВГЧ-6, при этом половина из них была в возрасте до года жизни. В другом итальянском исследовании за 10-летний период выявили 4 случая ВГЧ-6-энцефалита при первичной инфекции [19]. Схожие данные, а именно 10 подтверждённых случаев (8,8%), получили в Иране на выборке из 114 детей в возрасте до 2 лет без признаков внезапной экзантемы и с подозрением на энцефалит. Большинство описанных случаев регистрировали осенью и зимой [17]. В национальном исследовании [16], в котором проанализировали данные большинства больниц Японии за двухлетний период (2003–2004 гг.), авторы выявили 86 случаев ВГЧ-6-энцефалита, связанного с внезапной экзантемой. При этом в 47% случаев отметили неврологические осложнения и зафиксировали два летальных исхода. Путём экстраполяции данных на популяцию исследователи получили частоту ВГЧ-6-энцефалита — 61,9 случаев заболеваний в год или 5,5 эпизодов на 100 000 случаев внезапной экзантемы. Отдалённые последствия перенесённого ВГЧ-6-энцефалита встречают у половины заболевших и проявляются они двигательными нарушениями, атаксией, умственной отсталостью, нарушением памяти [7]. В Российской Федерации существуют единичные описания поражения ЦНС при ВГЧ-6-инфекции [9, 14, 20]. Также недостаточно данных о частоте и диагностическом значении обнаружения ВГЧ-6 в ликворе у детей.

Таким образом, актуальность исследований распространённости, клинико-лабораторных проявлений и исходов менингоэнцефалита, вызванного ВГЧ-6, не вызывает сомнений.

ЦЕЛЬ

Оценить частоту назначения исследования спинномозговой жидкости (СМЖ) на ДНК ВГЧ-6 методом качественной полимеразной цепной реакции (ПЦР), определить сезонные закономерности и диагностическую значимость обнаружения ДНК ВГЧ-6 в СМЖ у иммунокомпетентных детей с подозрением на менингоэнцефалит, изучить частоту, сезонность и течение ВГЧ-6-менингоэнцефалита у иммунокомпетентных детей.

МЕТОДЫ

Дизайн исследования

Проведено ретроспективное одноцентровое выборочное исследование.

Критерии соответствия

Критерии включения. В исследование включили иммунокомпетентных детей в возрасте от 14 дней до 17 лет с подозрением на менингоэнцефалит, которые поступили в стационар в период с 2007 по 2018 гг., включая пациентов с сопутствующей неврологической патологией.

Критерии невключения. В исследование не включали иммунокомпрометированных пациентов (первичный иммунодефицит в анамнезе, ВИЧ-инфекция, иммуносупрессивная терапия после трансплантации).

Критерии исключения. Из финального анализа исключили 6 пациентов с выявленной ДНК ВГЧ-6 в ликворе, но без доступной медицинской документации.

Условия проведения

Исследование проведено на базе Детской городской клинической больницы №5 им. Н.Ф. Филатова, г. Санкт-Петербург.

Продолжительность исследования

Ретроспективный анализ данных выполнили в 2024 г.

Описание медицинского вмешательства

Всех пациентов с подозрением на нейроинфекцию осматривали педиатр-инфекционист и невролог. Специалисты собирали подробный анамнез жизни, анамнез заболевания и эпидемиологический анамнез. Проводили рутинные лабораторные обследования (клинический и биохимический анализ крови, общий анализ мочи). Из дальнейшего обследования исключали пациентов с подозрением на иммунодефицит (специальные лабораторные методы для исключения иммунодефицита не применяли).

Показанием для проведения люмбальной пункции служило подозрение на менингит или энцефалит, а также признаки внутриутробной инфекции с поражением ЦНС. Люмбальная пункция и анализ СМЖ проводили по стандартной методике.

Во всех случаях выполняли посев ликвора на питательную среду и проводили реакцию латекс-агглютинации для быстрого обнаружения антигенов менингококков, пневмококков и возбудителей гемофильной инфекции типа В. Также выполняли качественную ПЦР на РНК энтеровирусов, ДНК герпесвирусов человека 1, 2, 3, 4, 5, 6 типов и Streptococcus agalactiae.

Изменения в ликворе оценивали как признаки бактериального (гнойного) процесса при наличии цитоза более 1000 клеток в 3 мкл с преобладанием нейтрофилов. Признаками серозного менингита считали цитоз выше 30–90 клеток в 3 мкл (в зависимости от возраста пациента) с преобладанием лимфоцитов. К общим признакам воспалительного процесса в СМЖ также относили снижение концентрации глюкозы менее 2,8 ммоль/л и повышение концентрации белка выше 0,45 г/л.

Магнитно-резонансную томографию (МРТ) головного мозга не проводили по техническим причинам.

Основной исход исследования

Выявление частоты и сезонных закономерностей обнаружения ДНК ВГЧ-6 в ликворе у детей с подозрением на менингоэнцефалит.

Дополнительные исходы исследования

Определение частоты выявления и характер течения ВГЧ-6-менингоэнцефалита в исследуемой группе. Оценка возможности обнаружения ДНК ВГЧ-6 в СМЖ при первичной ВГЧ-6-инфекции.

Анализ в группах

В исследование вошли 15 детей с выявленной ДНК ВГЧ-6 в ликворе. Для анализа пациентов разделили на 2 группы:

• 1-я группа — пациенты с патологическими изменениями в СМЖ: наличие цитоза более 30–90 клеток в 3 мкл в зависимости от возраста, снижение концентрации глюкозы менее 2,8 ммоль/л, повышение концентрации белка выше 0,45 г/л;
• 2-я группа — пациенты без патологических изменений в СМЖ (с явлениями менингизма).

Методы регистрации исходов

Для выделения ДНК ВГЧ-6 из ликвора, амплификации и детекции маркёрного фрагмента ДНК ВГЧ-6 использовали реагенты фирмы «ДНК-технология» (Москва, Россия): «Проба НК», смесь для амплификации под парафином, Taq-полимеразу, минеральное масло, а также набор реагентов GenPak^® DNA PCR test (ООО «Лаборатория Изоген», Россия). Использовали амплификаторы «Терцик» («ДНК-технология», Россия), РТС-100 (MJ-Research Inc., США). Детекцию ПЦР-продукта ВГЧ-6 осуществляли по конечной точке, используя флуоресцентный детектор «Джин 1/4» («ДНК-технология», Россия).

Этическая экспертиза

Проведение исследования одобрено локальным этическим комитетом Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (протокол № 04/19 от 29.04.2019). Законные представители всех участников до включения в исследование добровольно подписали форму информированного согласия, утверждённую в составе протокола исследования этическим комитетом.

Статистический анализ

Запланированный размер выборки. Размер выборки предварительно не рассчитывали.

Статистические методы. Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием средств программы Microsoft Excel (США). Вычисляли значения медианы и межквартильного размаха. Различия между средними значениями в группах оценивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа. Статистически значимыми считали различия при p <0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Объекты исследования

В период с 2007 по 2018 г. методом качественной ПЦР обследовали ликвор на наличие ДНК ВГЧ-6 у 712 детей с подозрением на нейроинфекцию. Возраст пациентов варьировал от 14 дней жизни до 13 лет. Распределение пациентов по полу было равномерным.

Число выполненных ПЦР-тестов СМЖ увеличилось с 6 в 2007 г. до 96 исследований в 2013 г., когда зафиксировали максимальное количество анализов ликвора на ДНК ВГЧ-6 (рис. 1). Эта закономерность отражает растущую осведомлённость врачей о возможности развития ВГЧ-6-менингоэнцефалита и возможное недостаточное обследование пациентов в первые годы наблюдения.

 

Рис. 1. Число обследований ликвора в ДГКБ №5 на вирус герпеса человека 6 типа в период 2007–2018 гг.

 

Основные результаты исследования

Учитывая возможную сезонность ВГЧ-6-инфекции, мы проанализировали частоту поступления образцов в лабораторию по календарным месяцам. Число исследований распределялось равномерно в течение года с небольшим пиком в августе, сентябре и октябре (рис. 2). Однофакторный дисперсионный анализ не выявил статистически значимых различий в назначении ПЦР-обследования ликвора на ВГЧ-6 между разными месяцами и сезонами года.

 

Рис. 2. Общее число исследований и число пациентов с выявленной ДНК вируса герпеса человека 6 типа в спинномозговой жидкости в зависимости от месяца года.

 

Всего за 12 лет ДНК ВГЧ-6 обнаружили в 21 образце ликвора, что составило 2,9% от 712 исследований СМЖ. Количество положительных результатов различалось в зависимости от года наблюдения и варьировало от 0 до 5 случаев в год. Образцы ликвора поступали на исследование равномерно в течение года, однако все случаи выявления ВГЧ-6 в СМЖ задокументированы с апреля по ноябрь.

Для оценки диагностической значимости выявления ВГЧ-6 в СМЖ мы ретроспективно проанализировали медицинские данные 15 пациентов с обнаруженной ДНК ВГЧ-6 в ликворе. Из анализа были исключены 6 пациентов, так как их медицинская документация оказалась недоступной. Краткая клинико-лабораторная характеристика этих случаев приведена в табл. 1.

 

Таблица 1. Пациенты с выявленной ДНК вируса герпеса человека 6 типа в ликворе

Возраст, мес.	Пол	Симптомы	СМЖ				ДНК ВГЧ-6 в плазме	Другие возбудители в крови	Клинический анализ крови	Диагноз
			Цитоз, кл/3 мкл	Белок, г/л	Глюкоза, ммоль/л	Другие возбудители в СМЖ
23	м	Лихорадка, апатия, сыпь	3	0,08	4,2	Нет	н/о	Нет	Лейкопения	ВЭ
14	м	Лихорадка, повторные судороги, сыпь	1	0,05	3,8	Нет	н/о	Нет	Без особенностей	ВЭ + ФС
26	д	Лихорадка, повторные судороги, головная боль, рвота, РЗМ, СК, сыпь	3	0,2	3,3	Нет	пол	Нет	Лейкопения	ВЭ + ФС
7	м	Лихорадка, отказ от еды, раздражительность	6	0,2	3,0	Нет	пол	Нет	Лейкопения	Лихорадка без сыпи
15	д	Повторное повышение температуры, сонливость, сыпь	18 (НФ 5, ЛФ 13)	0,19	3,5	Нет	н/о	Менингококк B	Лейкопения	Менингококцемия + ВЭ
17	д	Повторное повышение температуры, сонливость, сыпь	3	0,12	3,8	Нет	отр	Нет	Лейкоцитоз лимфоцитоз	Болезнь Кавасаки + ВЭ
5	м	Лихорадка, длительные повторные судороги, потеря сознания	176 (НФ 90, ЛФ 86)	0,22	4,9	Нет	отр	Нет	Лейкоцитоз лимфоцитоз	ВГЧ-6-менингоэнцефалит + коклюш
8	д	Лихорадка, повторные судороги, апатия	16 (НФ 10, ЛФ 6)	1,2	2,9	Нет	пол	Нет	Без особенностей	ВГЧ-6-менингоэнцефалит
22	д	Лихорадка, апатия, рвота, галлюцинации, гримасы, подёргивания конечностей, сыпь	590 (НФ 550, ЛФ 40)	0,26	2,6	VZV	отр	VZV	Без особенностей	VZV-менингоэнцефалит
1	м	Лихорадка, повторные судороги, апатия, очаговые симптомы, сыпь	3	0,44	1	Нет	пол	VZV	Без особенностей	VZV-энцефалит
19	м	Лихорадка, рвота, РЗМ, СК	2780 (НФ 95%)	0,35	2,1	Нет	н/о	Нет	Без особенностей	Бактериальный менингит
12	д	Лихорадка, рвота, РЗМ, СК	23296 (НФ 98%)	1,4	0,5	ХИБ	н/о	Нет	Лейкоцитоз нейтрофилёз	ХИБ-менингит
92	м	Лихорадка, светобоязнь, СК	870 (НФ 263, ЛФ 607)	0,3	5,3	Энтеровирус	н/о	Энтеровирус	Без особенностей	Энтеровирусный менингит
62	д	Лихорадка, головная боль, рвота, РЗМ	542 (НФ 15, ЛФ 527)	0,44	2,5	Энтеровирус	отр	Нет	Без особенностей	Энтеровирусный менингит
11	д	Лихорадка, РЗМ, апатия, сыпь	80 (НФ 61, ЛФ 19)	1,6	4,1	Пневмококк	н/о	Нет	Лейкоцитоз нейтрофилёз	Гнойный средний отит

Примечание. Д — девочка, ВГЧ-6 — вирус герпеса человека 6 типа, ВЭ — внезапная экзантема, ЛФ — лимфоциты, м — мальчик, н/о — не определялось, НФ — нейтрофилы, отр — отрицательный, пол — положительный, РЗМ — ригидность затылочных мышц, СК — симптом Кернига, СМЖ — спинномозговая жидкость, ФС — фебрильные судороги, VZV — вирус Варицелла–Зостер.

 

Соотношение мальчиков и девочек было примерно равным (7 и 8 человек соответственно). Медиана возраста обследованных составила 14,7 мес. (межквартильный размах — 9,9–22,6 мес.). Таким образом, большинство детей (70%) были в возрасте 6–24 мес., что соответствует пику регистрации первичной ВГЧ-6-инфекции. Двое пациентов были младше 6 мес. (28 дней и 5 мес.), и только трое пациентов были старше 2 лет (рис. 3).

 

Рис. 3. Распределение по возрасту пациентов с выявленной ДНК вируса герпеса человека 6 типа в ликворе.

 

Анамнез жизни у большинства обследованных был не отягощён. Трое пациентов родились недоношенными (35–36 нед.), но с нормальной массой тела. Двое детей родились путём кесарева сечения, остальные — естественным путём. На момент поступления в стационар два младенца находились на грудном вскармливании. Один ребёнок в возрасте 5 мес. перенёс операцию по поводу врождённого гидронефроза почки.

У всех пациентов при поступлении регистрировали менингеальные симптомы (ригидность затылочных мышц, симптом Кернига) и/или проявления энцефалита (нарушение сознания, повторные судороги, очаговые неврологические симптомы), что послужило показанием для выполнения люмбальной пункции. Повторные и/или пролонгированные судороги наблюдали у 5 (33%) обследованных.

Клинический анализ крови выявил по 4 случая лейкопении и лейкоцитоза, у 7 пациентов анализ крови не показал отклонений.

Группа 1. При исследовании ликвора патологические изменения выявили у 8 из 15 (53%) пациентов (рис. 4). У двоих детей наблюдали типичные клинико-лабораторные признаки гнойного менингита (гемофильной и невыясненной этиологии соответственно). У четырёх больных была вирусная этиология поражения ЦНС: в двух случаях подтверждён энтеровирусный менингит, а у двоих детей — менингоэнцефалит, вызванный вирусом Варицелла–Зостер. Роль ВГЧ-6 у этих пациентов осталась невыясненной, учитывая отсутствие типичных клинических проявлений этой инфекции и невозможность исключить хромосомно-интегрированный ВГЧ-6 (хиВГЧ-6), поскольку не определяли вирусную нагрузку и не проводили дополнительное обследование в динамике.

 

Рис. 4. Окончательные диагнозы пациентов с выявленным вирусом герпеса человека 6 типа в ликворе.

 

Диагноз ВГЧ-6-менингоэнцефалита подтвердили только у двух больных без признаков других возбудителей в СМЖ. Оба случая выявлены летом. Это были мальчик и девочка в возрасте 5 и 8 мес. соответственно. У обоих пациентов отмечали лихорадку, вялость, нарушение сознания, судороги. Ни у одного из этих детей не было сыпи, специфичной для внезапной экзантемы.

У всех пациентов с ВГЧ-6-менингоэнцефалитом обнаружили изменения в СМЖ (см. табл. 1). Однако, клинические анализы крови этих пациентов были без особенностей. У пятимесячного пациента выявили IgG к ВГЧ-6, которые расценили как материнские. Заболевание у него развилось на фоне коклюша. Таким образом, в обоих случаях наблюдали первичную ВГЧ-6-инфекцию, которая протекала в виде менингоэнцефалита. Этиотропную противовирусную терапию не проводили. Все пациенты выздоровели и были выписаны, однако данные катамнеза об отдалённых неврологических осложнениях собрать не удалось.

Дополнительные результаты исследования

Группа 2. У 7 пациентов без воспалительных изменений в ликворе клинические проявления поражения ЦНС расценили как менингизм. У 5 человек была характерная пятнисто-папулёзная сыпь, что подтвердило диагноз внезапной экзантемы. У одного пациента диагностировали лихорадку без сыпи, вызванную ВГЧ-6. Однако, поскольку МРТ не выполняли, возможно, что в этой группе пациентов также были случаи недиагностированного ВГЧ-6-энцефалита. Также в этой группе был один случай гнойного отита без клинических признаков ВГЧ-6-инфекции.

ОБСУЖДЕНИЕ

Резюме основного результата исследования

Результаты нашего исследования подтверждают, что обнаружение ДНК ВГЧ-6 в ликворе у иммунокомпетентных детей встречается редко и в большинстве случаев (86%) не свидетельствует о ВГЧ-6-менингоэнцефалите. За 12 лет из 712 пациентов Детской городской клинической больницы №5 с подозрением на менингит и/или энцефалит диагноз ВГЧ-6-менингоэнцефалит подтвердили только у 2 детей раннего возраста (0,3%).

Обсуждение основного результата исследования

Из-за сложностей диагностики ВГЧ-6-инфекции существуют противоречивые данные о критериях постановки диагноза ВГЧ-6-менингоэнцефалита. Это может приводить как к гиподиагностике из-за отсутствия данных МРТ, так и гипердиагностике, когда обнаружение ДНК ВГЧ-6 в СМЖ считают подтверждением текущей нейроинфекции. Как продемонстрировали A.F. Kharbat и соавт. [21], назначение внутривенного ганцикловира на 21 день недоношенному младенцу с повторно выявленной ДНК ВГЧ-6 в СМЖ и крови оказалось ошибочным. Данное назначение привело к значительной нейтропении у пациента, но не к элиминации патогена, поскольку это был случай хиВГЧ-6.

Часто бывает сложно определить, является ли ВГЧ-6- менингоэнцефалит осложнением или самостоятельной тяжёлой формой первичной ВГЧ-6-инфекции. Наше исследование подтверждает, что при первичной ВГЧ-6-инфекции можно обнаружить ДНК ВГЧ-6 в неизменённом ликворе. Это необходимо учитывать при постановке диагноза и выборе тактики лечения. Кроме того, теоретически возможна и бессимптомная реактивация латентного вируса на фоне интеркуррентных заболеваний. Отдельную проблему представляет постоянное наличие ВГЧ-6 в ликворе у пациентов с хиВГЧ-6.

Ограничения исследования

К ограничениям данного исследования следует отнести отсутствие данных МРТ у больных. Также не проводили генотипирование ВГЧ-6 и не определяли вирусную нагрузку. Возможность наличия хиВГЧ-6 у пациентов также не исключили.

Кроме того, при планировании и проведении исследования размер выборки для достижения требуемой статистической мощности результатов не рассчитывали. В связи с этим полученная в ходе исследования выборка участников не может считаться в достаточной степени репрезентативной, что не позволяет экстраполировать полученные результаты и их интерпретацию на генеральную совокупность аналогичных пациентов за пределами исследования.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Вирусное поражение ЦНС часто встречается в практике педиатра. ПЦР-диагностика расширяет возможности этиологической расшифровки вирусных энцефалитов. Впервые нами установлена частота и диагностическое значение обнаружения ДНК ВГЧ-6 в ликворе у иммунокомпетентных детей в России. Показано, что ДНК ВГЧ-6 в ликворе встречается редко (2,8%). В большинстве случаев её наличие не свидетельствует о поражении ЦНС, но часто связано с текущей первичной ВГЧ-6-инфекцией, которая протекает в форме внезапной экзантемы или лихорадки без сыпи. За 12 лет наблюдения из 712 пациентов Детской городской клинической больницы №5 им. Н.Ф. Филатова (г. Санкт-Петербург) с подозрением на менингит и/или энцефалит врачи подтвердили ВГЧ-6-менингоэнцефалит только у 2 детей раннего возраста (0,3%). Ещё у двух пациентов зарегистрировали сочетанную инфекцию (ВГЧ-6 + вирус Варицелла–Зостер). Данные о частоте этого заболевания коррелируют с результатами исследований из других стран. Отмечена сезонность ВГЧ-6-энцефалита — все случаи произошли летом. Течение ВГЧ-6-энцефалита было доброкачественным, все пациенты полностью выздоровели и были выписаны из стационара через 2–4 нед. после поступления.

Необходимо разработать объективные диагностические критерии подтверждения ВГЧ-6-энцефалита у иммунокомпетентных больных. Частота, механизмы поражения, клинические проявления и терапевтические подходы при поражении ЦНС при первичной ВГЧ-6-инфекции требуют дальнейшего изучения. Это особенно важно с учётом рисков развития отдалённых неврологических осложнений.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Вклад авторов. М.А. Никольский — концепция и дизайн исследования, сбор и анализ литературных данных, анализ результатов исследования, написание и редактирование текста рукописи, подготовка графических материалов; Д.А. Лиознов — сбор и анализ литературных данных, подготовка и написание текста рукописи; Е.Ю. Горелик — курация пациентов, анализ данных из историй болезней, подготовка и написание текста рукописи; Т.В. Вишневская — курация пациентов, написание и редактирование текста рукописи.

Этическая экспертиза. Проведение исследования одобрено локальным этическим комитетом Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (протокол № 04/19 от 29.04.2019). Законные представители всех участников исследования до включения в исследование добровольно подписали форму информированного согласия, утверждённую в составе протокола исследования этическим комитетом.

Источники финансирования. Отсутствуют.

Раскрытие интересов. Авторы заявляют об отсутствии отношений, деятельности и интересов за последние три года, связанных с третьими лицами (коммерческими и некоммерческими), интересы которых могут быть затронуты содержанием статьи.

Оригинальность. При создании настоящей работы авторы не использовали ранее опубликованные сведения.

Доступ к данным. Редакционная политика в отношении совместного использования данных к настоящей работе не применима.

Генеративный искусственный интеллект. При создании настоящей статьи технологии генеративного искусственного интеллекта не использовали.

Рассмотрение и рецензирование. Настоящая работа подана в журнал в инициативном порядке и рассмотрена по обычной процедуре. В рецензировании участвовали два внешних рецензента журнала.

ADDITIONAL INFORMATION

Author contributions: M.A. Nikolskiy: conceptualization, formal analysis, writing—original draft, writing—review & editing, visualization; D.A. Lioznov: formal analysis, writing—original draft; E.Yu. Gorelik: investigation, writing—original draft; T.V. Vishnevskaya: investigation, writing—review & editing.

Ethics approval: The study was approved by the Local Ethics Committee of the I.P. Pavlov First Saint Petersburg State Medical University, Ministry of Health of the Russian Federation (Protocol No. 04/19 dated April 29, 2019). Legal representatives of all participants provided written informed consent prior to enrollment; the consent form was approved by the Ethics Committee as part of the study protocol.

Funding sources: No funding.

Disclosure of interests: The authors have no relationships, activities, or interests for the last three years related to for-profit or not-for-profit third parties whose interests may be affected by the content of the article.

Statement of originality: No previously published material (text, images, or data) was used in this work.

Data availability statement: The editorial policy regarding data sharing does not apply to this work.

Generative AI: No generative artificial intelligence technologies were used to prepare this article.

Provenance and peer review: This paper was submitted unsolicited and reviewed following the standard procedure. The peer review process involved two external reviewers.

About the authors

Mikhail A. Nikolskiy

Academician I.P. Pavlov First St. Petersburg State Medical University

Author for correspondence.
Email: nicolm@inbox.ru.ru
ORCID iD: 0000-0001-9766-2577
SPIN-code: 1599-1345

MD, Cand. Sci. (Medicine)

Russian Federation, 6/8 L’va Tolstogo st, Saint Petersburg, 197022

Dmitry A. Lioznov

Academician I.P. Pavlov First St. Petersburg State Medical University; Research Institute of Influenza

Email: dlioznov@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0003-3643-7354
SPIN-code: 3321-6532

MD, Dr. Sci. (Medicine), Professor

Russian Federation, 6/8 L’va Tolstogo st, Saint Petersburg, 197022; Saint Petersburg

Evgenii Yu. Gorelik

N.F. Filatov Children’s City Clinical Hospital № 5

Email: e.gorelik@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-3130-1717
SPIN-code: 4554-6920

MD, Cand. Sci. (Medicine)

Russian Federation, Saint Petersburg

Tatiana V. Vishnevskaya

N.F. Filatov Children’s City Clinical Hospital № 5

Email: vishnevskaya2111@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-0322-4013
Russian Federation, Saint Petersburg

References

Supplementary files