Comparative analysis of the tick-borne encephalitis virus (TBEV) infection of unfed adult ixodid ticks Ixodes pavlovsky Pomerantsev 1946 and Ixodes persulcatus Schulze in the area of sympatria of their natural habitats



Cite item

Full Text

Abstract

With the use of the ELISA method to detect an antigen, reverse transcription with quantitative real-time PCR with subtype-specific fluorescent probes, phylogenetic analysis of E and NS1 gene nucleotide sequences, bioassays with suckling mice, hemagglutination and neuroinvasiveness tests there was made a comparison of the tick-borne encephalitis virus (TBEV) infection of ixodid ticks Ixodes persulcatus P.Schulze and Ixodes pavlovskyi Pomerantsev 1946 in the area of sympatria of their natural habitats in the Novosibirsk region during growth period of their populations with the replacement ofprevailing species of monodominant type of the ixodid population structure. The ratio of 2 tick species didn’t depend on biotopes ofpine or birch forest but rather on the distance from the Novosibirsk Scientific Center: the lower anthropogenic pressure the smaller I.pavlovskyi proportion. The TBEV rate (including both pathogenic and apathogenic for laboratory mice virus), spectra of the TBEV3 main genetic types, neurovirulence and hemagglutination activity were similarfor both I.persulcatus and I.pavlovskyi. However, the proportion ofpathogenic for laboratory mice virus and the TBEV Far Eastern subtype, as well as viral loads of Siberian and European types for the TBEV from I.pavlovskyi were significantly higher than those from I.persulcatus.

Full Text

В природных очагах устойчивость паразитарной системы, включающей вирус клещевого энцефалита (ВКЭ), его беспозвоночных и позвоночных резерву- арных хозяев, обеспечивается полигостальностью, перестройками вирусного квазивида и разнообразием циклов трансмиссии. Наиболее эффективным способом является безвиремийная передача вируса между клещами в процессе питания на одном прокормителе [1]. Для этого необходимо совпадение сезонных циклов клещей и их прокормителей, способных обеспечить репликацию ВКЭ в особых им- мунокомпетентных клетках кожи [1-3]. Вследствие этого наиболее эпидемически значимыми переносчиками ВКЭ считают Ixodes persulcatus P. Schulze и Ixodes ricinus L. Среди 12 типов населения иксодовых клещей, объединенных в 3 группы: моно-, би- и полидо- минантную, в Западной Сибири ранее был описан монодоминантный тип с доминированием таежного клеща в сочетании с малочисленными видами, в том числе с близкородственным реликтовым видом иксодид из группы persulcatus - клещом Павловского Ixodes pavlovskyi Pomerantsev 1946 [4]. Однако в последние годы вблизи Томска [5] и Новосибирска [6] отмечено массовое появление (вплоть до абсолютного доминирования) клеща Павловского, ареал которого состоит из Алтайской и Дальневосточной разобщенных частей [7]. Различия клещей включают специализацию половозрелой фазы к хозяевам: таежный клещ прокармливается в основном на крупном рогатом скоте, крупных и средних диких млекопитающих, а клещ Павловского - на птицах, реже на зайцах и ежах [7]. Температура тела у птиц (42-44oC) выше, чем у млекопитающих, что может обусловливать селекцию температуроустойчивых мутантов ВКЭ. Высокое обилие клеща Павловского, отличающегося от таежного повышенной засухоустойчивостью и способного успешно существовать в неблагоприятных для таежного клеща городских и пригородных биотопах, может не только повышать устойчивость природных очагов клещевого энцефалит (КЭ), но и стать причиной изменений свойств природных популяций ВКЭ вследствие адаптации вируса к другому виду клещей. Сравнительные исследования вирусоносительства среди разных видов иксодовых клещей в природных очагах, претерпевающих изменения видового состава иксодид, немногочисленны [8, 9]. Цель данной работы - количественные и качественные характеристики ВКЭ у иксодовых клещей I. persulcatus и I. pavlovskyi в западно-сибирском ан- тропургическом очаге в период трансформации видового состава населения иксодид. Материалы и методы Сбор клещей. Учет численности и сбор клещей проводили с растительности на флаг в мае-июне 2011-1102 гг. на территории антропургического очага КЭ - лесопарка Новосибирского научного центра (ННЦ), расположенного в зоне симпатрии западносибирской части ареала таежного клеща и алтае- саянской части ареала клеща Павловского (54o49’ N, 83o05’ E). Ранее здесь отмечали абсолютное доминирование таежного клеща [10]. Видовую принадлежность определяли с помощью стереоскопического микроскопа по морфологическим признакам [7]. Для детекции ВКЭ пулы клещей по 10 экземпляров гомогенизировали в 1 мл физиологического раствора. Индивидуальную зараженность определяли посредством перерасчета [11]. Детекцию ВКЭ проводили в гомогенатах клещей посредством иммуноферментного анализа (ИФА) на антиген ВКЭ с использованием набора «ВектоВКЭ- антиген-стрип» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск), обратной транскрипции с последующей ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ) [12] и биопробы на мышах [13]. Вирусные нагрузки в клещах оценивали с использованием двух независимых методов [14]: 1) количественной ОТ-ПЦР-РВ с калибровочным графиком зависимости пороговых циклов (Ct) флуоресценции от количеств рекомбинантной плазмидной ДНК; 2) ИФА на антиген E ВКЭ с калибровочным графиком зависимости оптической плотности ВКЭ количеств антигена. Идентификацию изолятов ВКЭ осуществляли посредством молекулярного типирования в ОТ- ПЦР-РВ с генотипспецифичными флуоресцентными зондами [12] и филогенетического анализа нуклеотидных последовательностей фрагментов генов E и NS1 ВКЭ, реакции биологической нейтрализации на мышах [15], реакции гемагглютинации с реакцией торможения гемагглютинации [16]. Определение нуклеотидных последовательностей генов E и NS1 для изолятов РНК ВКЭ из гомогенатов клещей и мозга биопробных мышей проводили в Центре секвенирования ДНК ФГБУН ИХБФМ СО РАН (Новосибирск) с использованием автоматического анализатора ДНК модели ABI 310 (Applied Biosystems, США) и набора BigDye 3.1. Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей проводили при помощи программного обеспечения Mega 5.0 (http:// www.megasoftware.net/) с использованием четырех альтернативных алгоритмов при 1000 репликаций [17]. Нейровирулентность ВКЭ в клещах определяли заражением в мозг и под кожу мышей ICR массой 8-10 г десятикратными разведениями (4 особи на одно разведение) патогенных для мышей клещевых суспензий. Титры вируса рассчитывали в lg ЛД50 [18]. Статистическое сравнение выборочных средних и выборочных долей проводили по критерию Стью- дента [19]. Определение средних геометрических титров (СГТ) антигенов проводили вычислением антилогарифма от среднего арифметического десятичных логарифмов обратных значений титров в соответствии с указаниями [18]. Принят уровень значимости различий p < 0,05. Содержание, кормление, уход за животными и выведение их из эксперимента осуществляли в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Минздрава СССР от 12 августа 1977 г. № 755). Результаты и обсуждение Распределение иксодид по биотопам. Мониторинг антропургического очага КЭ на территории Таблица 1 Численность имаго иксодид в исследуемом антропургическом очаге Участок сбора клещей Суммарная численность иксодид (экз/флаго-км ± т) Доля клеща Павловского (% ± т) 2011 2012 2011 2012 № 1 - сосновый бор, от ННЦ не более 3 км 39,3 ± 3,7 31,9 ± 5,5 84,4 ±1,7 93,8 ± 1,5* № 2 - мелколиственный разреженный березовый лес с незначительной примесью осины и хорошо развитым травяным покровом, от ННЦ не более 3 км 55,7 ± 6,7 55,9 ± 8,9 84,6 ± 2,4 95,8 ± 0,8* № 3 - мелколиственный березово-осиновый лес, хорошо развитый кустарниковый ярус со смыканием крон, от ННЦ 5-6 км 38,0 ± 14,0 46,5 ± 7,4 58,3 ± 5,0** 82,0 ± 1,7* № 4 - пойма реки, разреженный сосновый бор с примесью березы, осины, хорошо развитым кустарником и густым травостоем, от ННЦ 12-15 км 52,0 ± 10,6 42,8 ± 21,7 12,5 ± 4,8** 16,7 ± 6,1 Всего... 45,0 ± 3,4 43,3 ± 4,2 60,5±1,7 80,9 ± 1,0* Примечание. (экз/флаго-км ± т) - численность клещей (экз/флаго-км) и статистическая погрешность (т) показателя; (% ± т) - % от общего количества иксодид, принятого за 100%, т - статистическая погрешность доли (%); * - величина доли клеща Павловского в 2012 г. значимо (р < 0,001) выше его доли в 2011 г. в том же участке; ** - величины доли клеща Павловского на участках № 3 и 4 значимо (р < 0,001) различаются и, кроме того, также (р < 0,001) отличаются от долей на участках № 1 и 2. Новосибирской области в 1980-2005 гг. показал циклические вариации численности клещей в диапазоне 4,4-18,6 экземпляра/флаго-км (экз/флаго- км), а с 2006 по 2012 г. - быстрый рост численности иксодид до 52,0 экз/флаго-км. При этом колебания плотности прокормителей клещей - мелких грызунов и насекомоядных оставались в пределах периодических флуктуаций, численность птиц [20] постепенно уменьшалась вследствие антропогенной дигрессии их населения. Сбор иксодовых клещей проводили в годы высокой численности клещей в мае-июне 2011-2012 гг. на четырех участках с разными рельефом, растительностью, удаленностью от ННЦ и, следовательно, антропогенным действием (табл. 1). Общая численность клещей в биотопах не была связана с удаленностью от ННЦ. Определение видовой принадлежности 3190 экз. клещей выявило 2 вида иксодид - таежный клещ и клещ Павловского с превалированием (р < 0,001) последнего. В среднем доля клеща Павловского возросла от 60,5 ± 1,3% в 2011 г. до 80,9 ± 1,0% в 2012 г. (р < 0,001). При этом по мере увеличения расстояния от ННЦ снижается доля клеща Павловского (см. табл. 1). Полученные данные свидетельствуют о продолжении экспансии клеща Павловского на территории Новосибирской области [21] в прямой зависимости от антропогенного воздействия. Зараженность клещей ВКЭ изучали посредством ИФА на антиген Е, ОТ-ПЦР-РВ, РГА и биопробы на мышах. Сравнительный анализ зараженности клещей ВКЭ на разных участках показал неравномерность распределения вирусофорных особей обоих видов по территории. В 2011 г. частоты обнаружений РНК ВКЭ в клещах варьировали по участкам от 1,5 ± 1,0 до 14,2 ± 3,8% у клеща Павловского и от 1,9 ± 1,9 до 6,7 ± 1,4% - у таежного клеща. По данным комплекса методов (с учетом патогенных и апа- тогенных для мышей изолятов) зараженность клещей Павловского и таежного составляла в среднем 4,0 ± 0,9 и 5,3 ± 1,0%, соответственно. Вместе с тем частота обнаружений патогенного для лабораторных мышей ВКЭ у клеща Павловского (2,1 ± 0,7%) была значимо выше (р < 0,01), чем у таежного (0,2 ± 0,2%). Данные биопробы (рис. 1) свидетельствовали о зависимости частоты изоляции патогенного ВКЭ как от лесорастительных условий участков, так и от вида переносчика. Количественные оценки. По данным количественной ОТ-ПЦР-РВ [14] диапазон Ct в суспензиях клеща Павловского составлял 15,3-41,4 (3 Э07-100 геном-эквивалентов в реакционной смеси), у таежного клеща - 26,4-49,5 • 104-100 геном-эквивалентов в реакционной смеси), что с учетом эффективности выделения РНК и ревертирования соответствовало более высоким вирусным нагрузкам для клеща Павловского - до 109 вирионов по сравнению с количеством вирионов до 106 у таежного клеща. £ о I----------------------- 1------------------ 1------------------ 1------------------ ту---------------- 1 1 (л=350) 2 (л=510) 3 (л=540) 4 (л=560) А (л=1960) Участки сбора клещей И I- persulcatus (п=830 экземпляров) ^ I. pavlovskyi (л=1130 экземпляров) Рис. 1. Зараженность патогенным ВКЭ имаго голодных иксодовых клещей, отловленных в очаге (усредненные данные за 2011-2012 гг). А - усредненный процент зараженности клещей на всей изученной территории; * - зараженность клеща Павловского патогенным ВКЭ достоверно (р < 0,05) выше зараженности таежного клеща. В скобках приведено количество (n) исследованных клещей. Таблица 2 Генетический состав ВКЭ и пороговые циклы в ОТ-ПЦР РВ в клещах среди образцов, содержащих РНК ВКЭ Дальневосточный тип Сибирский тип Европейский тип Вид клеща доля (%) изолятов (А ± т) пороговые циклы (Ct ± т) доля (%) изолятов (А± т) пороговые циклы (Ct ± т) доля (%) изолятов (А ± т) пороговые циклы (Ct ± т) Ixodes 61,1 ± 11,8* 33,3 ± 1,4 (26,5^1,4) 83,3 ± 9,0 31, 0 ± 1,5 (15,3-39,8)** 11,1 ± 7,6 24,8 ± 3,9 (20,9-28,6)** favlovskyi Ixodes 21,1 ± 9,6* 33,9 ± 2,9 (26,4-39,4) 78,9 ± 9,6 40,9 ± 2,0 3(26,9-49,5)** 15,8 ± 8,6 44,2 ± 1,9 (42,3-46,1)** persulcatus Примечание. А - % изолятов РНК ВКЭ; т - статистическая погрешность, % [19]; Ct - усредненная величина пороговых циклов ОТ-ПЦР; т - статистическая погрешность величины цикла; в скобках - диапазон варьирования пороговых циклов; * - % изолятов РНК ВКЭ дальневосточного типа от клеща Павловского выше, чем от таежного (р < 0,05); ** - усредненные величины пороговых циклов ОТ-ПЦР для изолятов РНК ВКЭ сибирского и европейского типов значимо (р < 0,001) ниже у клеща Павловского, чем у таежного. Дополнительно количественные оценки антигена Е ВКЭ в гомогенатах проводили посредством ифА [14]. Значения оптической плотности в непатогенных образцах клещей обоих видов не превышали 0,350, что соответствовало 0,9 нг/мл. С учетом молекулярной массы гликопротеина Е 60 кД это количество соответствовало приблизительно 1010 молекул белка Е или 5 • 107 вирионов в клещах с непатогенным ВКЭ. В патогенных образцах клеща Павловского диапазон содержания белка Е составлял до 25 нг/мл (до 109 вирионов в клеще), у таежного - до 3 нг/мл (до 108 вирионов). В среднем количество гликопротеина Е в патогенных пробах клеща Павловского (6,1 ± 1,7 нг/мл) значимо (р < 0,05) превышало таковое у таежного клеща (1,9 ± 0,65 нг/мл). Таким образом, количественные оценки вирусных нагрузок с использованием двух независимых методов, совпадали. Молекулярное типирование ВКЭ. Спектр трех основных генетических типов ВКЭ у двух видов клещей не различался (табл. 2). В образцах клещей при молекулярном типи- ровании посредством филогенетического анализа нуклеотидных последовательностей генов Е, NS1 и ОТ-ПЦР-РВ с генотипспецифичными флуоресцентными зондами выявлены РНК ВКЭ сибирского (Sib), дальневосточного (FE) и европейского (Eur) типов. При этом отмечено почти троекратное превышение доли изолятов РНК ВКЭ FE-типа у клеща Павловского по сравнению с таежным при близких усредненных значениях Ct. В отличие от FE-типа. РНК ВКЭ Sib и Eur типов у разных видов детек- Патогенные образцы (л=15) 110 100 90 £ 80 g 70 I 60 о. «о 50 60 п 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 40 30 20 10 0 а § ct Клещ Павловского Клещ Таежный Клещ Таежный Павловского клещ Павловского клещ Моноинфекция европейского типа Щ Моноинфекция дальневосточного типа Q Моноинфекция сибирского типа ^ Смесь дальневосточного и сибирского типов Апатогенные образцы (л=22) Таежный Клещ Таежный клещ Павловского клещ Сибирский тип Щ Дальневосточный тип Европейский тип Патогенные образцы Апатогенные образцы * Рис. 2. Распределение генетических типов (а) и пороговые циклы (б) ВКЭ у разных видов клещей среди образцов, содержащих РНК ВКЭ, в зависимости от патогенности. % рассчитывали относительно патогенных или апатогенных РНК ВКЭ-содержащих образцов каждого вида, принимаемых за 100%; * - (р < 0,001) усредненные пороговые циклы (Ct) Sib- и Eur-типов ВКЭ в апатогенных образцах таежного клеща значимо выше по сравнению с Ct ВКЭ тех же типов в апатогенных пробах клеща Павловского (б). тировали примерно с равной частотой, но судя по различиям средних значений Ct вирусные нагрузки ВКЭ Sib и Eur типов были выше у клеща Павловского по сравнению с таежным. Эти факторы могли обусловливать достоверно более высокую частоту обнаружения патогенного ВКЭ у клеща Павловского по сравнению с таежным (см. рис. 1). Анализ выявил особенности распределения генетических типов и концентраций РНК ВКЭ у клещей обоих видов в зависимости от содержания в образцах патогенного для мышей ВКЭ. Патогенные для мышей изоляты содержали РНК ВКЭ двух типов (Sib и FE) преимущественно в виде смешанной инфекции, апатогенные - моноинфекцию трех типов ВКЭ с преобладанием Sib-типа (рис. 2, а). Необходимо отметить отсутствие Eur-типа в патогенных образцах. Усредненные Ct Sib- и FE-типов ВКЭ в патогенных пробах обоих видов клещей значимых различий не имели, но в апатогенных образцах усредненные Ct Sib- и Eur-типов ВКЭ были значимо (р < 0,001, р < 0,05) меньше у клеща Павловского, чем у таежного (рис. 2, б). Следовательно, концентрации РНК ВКЭ Sib- и Eur-типов в апатогенных пробах клеща Павловского значимо превышали таковые у таежного клеща. Сравнительный анализ структуры гена Е штамма 2730 ВКЭ (номер доступа в GenBank JN993573), изолированного от клеща Павловского, показал соответствие подтипу Заусаев сибирского типа ВКЭ (уровень гомологии 97-99%), доминирующему в эндемичных областях России [14, 22, 23]. Нейровирулентность ВКЭ. При титровании на лабораторных мышах патогенного ВКЭ непосредственно из вирусофорных суспензий клещей Павловского и таежного значимых отличий нейровирулентности не выявлено: усредненный внутримозговой титр ВКЭ составил 4,23 ± 0,33 и 3,27 ± 0,56 lg LD50, подкожный - 2,5 ± 0,15 и 1,31 ± 0,73 lg LD50, индексы инвазивно- сти - 1,86 ± 0,31 и 1,94 ± 0,22 соответственно. Гемагглютинирующие свойства ВКЭ в суспензиях клещей обоих видов не были выявлены, несмотря на наличие антигена Е в ИФА, что могло быть обусловлено различной чувствительностью методов [12]. После инокуляции клещевых суспензий мышам в мозге заболевших КЭ особей титры гемагглютинирующего вируса варьировали в диапазоне от 1:2 до 1:1280 при титрах гликопротеина E в ИФА от 1 : 100 до 1 : 6400. СГТ гемагглютинина в мозге больных мышей ICR после исходного заражения суспензиями клещей Павловского составляла 1:118,9 (2,08 ± 0,28 lg), что значимо не превышает СГТ гемагглютини- рующего антигена у мышей после заражения суспензиями таежного клеща - 1:23,4 (1, 37 ± 0,8 lg), но тем не менее свидетельствует о тенденции повышенной гемагглютинирующей активности изолятов ВКЭ от клеща Павловского по сравнению с изолятами от таежного клеща. Зависимости между количеством гликопротеина E ВКЭ (ИФА) в суспензиях клещей и величинами титров гемагглютинирующего антигена (РГА) в мозге мышей, которым вводили эти суспензии, не отмечено. В западно-сибирском антропургическом очаге, расположенном в зоне симпатрии ареалов клеща Павловского и таежного, в период роста численности имаго иксодид показана смена доминирующего вида от I. persulcatus к I. favlovskyi, более устойчивому к антропогенному преобразованию среды вследствие способности переносить более высокие температуры при меньшем уровне увлажненности [7] . Процесс массового заселения территории исследуемого очага клещом Павловского не был связан с ростом численности мелких насекомоядных, грызунов или птиц, а обусловлен, вероятней всего, антропогенной трансформацией лесорастительных условий до пессимальных для таежного клеща, но достаточно благоприятных для обитания менее чувствительного к гидротермическим перепадам клеща Павловского. Из обширной вирусологической литературы и собственных данных [24] известно, что в местах обитаниях с оптимальными условиями для клещей их зараженность ВКЭ носит устойчивый характер и чаще удается изолировать патогенный для лабораторных мышей вирус. Вероятно, это обусловлено более успешным развитием ВКЭ в организме неистощенных клещей. Проведенное нами сравнительное изучение зараженности I. pavlovskyi и I. persulcatus ВКЭ количественных и качественных характеристик вируса в период трансформации видового состава населения иксодид, показало, что общая вирусофорность клещей, спектр основных генетических вариантов, нейровирулентность и гемагглютинирующая активность квазивида ВКЭ не имели значимых различий у двух видов. Вместе с тем доли клещей с патогенным для лабораторных мышей вирусом и дальневосточным типом ВКЭ, количества вирио- нов сибирского и европейского типов были значительно больше у клеща Павловского по сравнению с таежным, что, возможно, отражает и различный уровень оптимума условий для видов, и циркуляцию ВКЭ у прокормителей имаго клеща Павловского - птиц и, кроме того, может приводить к росту эпидемической опасности антропургических очагов КЭ. Выводы 1. На территории Новосибирской области в 2011-2012 гг. в период роста численности иксодо- вых клещей до 52 экз/флаго-км зарегистрирована смена доминирующего вида от I. persulcatus к I. pavlovskyi (до 96% вблизи Новосибирского научного центра). 2. Вирусофорность, детекция трех основных типов ВКЭ, гемагглютинирующая активность и ней- роинвазивность были сходными для изолятов вируса от обоих видов иксодовых клещей. 3. Доли патогенного для лабораторных мышей вируса и дальневосточного типа ВКЭ, количества вирионов сибирского и европейского типов были больше у клеща Павловского по сравнению с таежным клещом.
×

About the authors

G. S Chicherina

Institute of Systematics and Ecology of Animals of Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences

Email: chicherinagalina@bk.ru
11, Frunze Str., Novosibirsk, Russian Federation, 630091

O. V Morozova

D.I. Ivanovsky Institute of Virology

Email: omorozova2010@gmail.com
16, Gamalei Str., Russian Federation, Moscow, 123098

V. V Panov

Institute of Systematics and Ecology of Animals of Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences

11, Frunze Str., Novosibirsk, Russian Federation, 630091

V. N Romanenko

National Research Tomsk State University

Email: vnremont@mail.ru
36, Prospekt Lenina, Tomsk, Russian Federation, 634050

S. A Bakhvalov

Institute of Systematics and Ecology of Animals of Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences

Email: bahvalov60@list.ru
11, Frunze Str., Novosibirsk, Russian Federation, 630091

V. N Bakhvalova

Institute of Systematics and Ecology of Animals of Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences

Email: bvntbe@yandex.ru
11, Frunze Str., Novosibirsk, Russian Federation, 630091

References

  1. Labuda M., Randolph S.E. Survival strategy of tick-borne encephalitis virus: cellular basis and environmental determinants. Zbl. Bakteriol. Dec. 1999; 289 (5-7): 513-24.
  2. Korenberg E.I. Seasonal population dynamics of ixodes ticks and tick-borne encephalitis virus. Exp. Appl. Acarol. 2000; 24 (9): 665-81.
  3. Nuttall P.A., Labuda M. Dynamics of infection in tick vectors and at the tick-host interface. Adv. Virus Res. 2003; 60: 233-72.
  4. Богданов И.И. Иксодовые клещи Западной Сибири. Сообщение VII. Типы населения иксодовых клещей. Вестник Омского государственного педагогического университета. Естественные науки и экология. 2006. Available at: www. omsk.edu
  5. Романенко В.Н. Мониторинг видового состава и численности иксодовых клещей (Parasitiformes, Ixodidae) в антропургических биотопах. Вестник Томского государственного университета. 2009; 324: 376-9.
  6. Bakhvalova V.N., Panov V.V., Morozova O.V Tick-borne encephalitis virus quasispecies rearrangements in ticks and mammals. In: Ruzek D., ed. Flavivirus Encephalitis. ISBN: 978953-307-669-0, «InTech». 2011: 213-34. Available from: http://www.intechopen.com/articles/show/title/tick-borne-encephalitis-virus-quasispecies-rearrangements-in-ticks-and-mammals
  7. Филлипова Н.А., ред. Таежный клещ Ixodes persulcatus Schulze (Acarina, Ixodidae): морфология, систематика, экология, медицинское значение. Л.: Наука; 1985.
  8. Иванова Н.В. Роль мелких млекопитающих в очагах природных инфекций на антропогенно трансформированной территории юго-востока Западной Сибири: Дисс.. канд. биол. наук. Томск; 2009.
  9. Романенко В.Н., Кондратьева Л.М. Зараженность иксодовых клещей, снятых с людей, вирусом клещевого энцефалита на территории г. Томска и его окрестностей. Паразитология. 2011; 45 (1): 3-10.
  10. Добротворский А.К., Бахвалова В.Н., Харитонова Н.Н., Сапегина В.Ф. Динамика параметров паразитарной системы клещевого энцефалита в условиях северной лесостепи Приобья. Сибирский экологический журнал. 1994; 1 (4): 369-75.
  11. Беклемишев В.Н. К изучению зараженности клещей переносчиков энцефалита методом биопробы. Вопросы вирусологии. 1962; 2: 240-2.
  12. Морозова О.В., Бахвалова В.Н., Панов В.В. Сравнение методов детекции вируса клещевого энцефалита. В кн.: Фундаментальные науки - медицине: Сборник трудов научной конференции. Новосибирск: АРТА; 2008: 171-7.
  13. Bakhvalova V.N., Dobrotvorsky A.K., Panov V.V., Matveeva V.A., Tkachev S.E., Morozova O.V. Natural tick-borne encephalitis virus infection among wild small mammals in the southeastern part of western Siberia, Russia. Vector Borne Zoonotic Dis. 2006; 6 (1): 32-41.
  14. Морозова О.В., Гришечкин А.Е., Бахвалова В.Н., Исаева Е.И., Подчерняева Р.Я. Динамика репродукции вируса клещевого энцефалита в культурах клеток. Вопросы вирусологии. 2012; 2: 40-3.
  15. Дерябин П.Г., Лебедева Г.А., Логинова Н.В. Реакция нейтрализации тогавирусов на мышах и культурах клеток. В кн.: Гайдамович С.Я., ред. Арбовирусы (методы лабораторных и полевых исследований). М.: Наука; 1986: 120-6.
  16. Clarke D.H., Casals J. Techniques for hemagglutination and hemagglutination-inhibition with arthropod-borne viruses. Ат. J. Trop. Med. Hyg. 1958; 7 (5): 561-73.
  17. Tamura K., Peterson D., Peterson N., Stecher G., Nei M., Kumar S. MEGA5: Molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood, evolutionary distance, and maximum parsimony methods. Mol. Biol. Evolut. 2011; 28: 2731-9.
  18. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медгиз; 1962.
  19. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа; 1980.
  20. Цыбулин С.Н., Жимулев И.Ф., Панов В.В., Вартапетов Л.Г., Жуков В.С., Богомолова И.Н., Николаева О.Н. Животный мир. Позвоночные. (Динамика численности и пространственная неоднородность сообществ). В кн.: Жимулев И.Ф., ред. Динамика экосистем Новосибирского Академгородка. Новосибирск: Издательство СО РАН; 2013: 56-80
  21. Чичерина Г.С., Романенко В.Н., Панов В.В., Морозова О.В., Бахвалова В.Н. Антропогенная трансформация сообщества иксодовых клещей в западносибирском природном очаге клещевого энцефалита. В кн.: «Научные чтения памяти Н.Ф. Реймерса и Ф.Р Штильмарка. Антропогенная трансформация природной среды», г. Пермь, 6-9.12.2011. Пермь: Пермский государственный национальный исследовательский университет. 2011: 135-41.
  22. Карань Л.С., Маленко Г.В., Бочкова Н.Г., Левина Л.С., Колясникова Н.М., Гамова Е.Г. и др. Применение молекулярно-генетических методик для изучения структуры штаммов вируса клещевого энцефалита. Бюллетень Сибирского отделения РАМН. 2007; 4: 34-40.
  23. Погодина В.В., Карань Л.С., Колясникова Н.М., Левина Л.С., Маленко Г.В., Гамова Е.Г. и др. Эволюция клещевого энцефалита и проблема эволюции возбудителя. Вопросы вирусологии. 2007; 5: 16-21.
  24. Бахвалова В.Н. Эпизоотическое состояние природного очага клещевого энцефалита и особенности вирусной популяции в лесостепном Приобье (Западная Сибирь): Дисс.. канд. биол. наук. Новосибирск; 1994.

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download

Copyright (c) 2015 Eco-vector


СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: № 014448 от 08.02.1996. 
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ЭЛ № ФС 77 - 80652 от 15.03.2021 .


This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies