Сравнительный анализ зараженности голодных иксодовых клещей Ixodes pavlovsky pomerantsev 1946 и Ixodes persulcatus schulze вирусом клещевого энцефалита в зоне симпатрии их ареалов



Цитировать

Полный текст

Аннотация

С использованием методов иммуноферментного анализа на антиген, обратной транскрипции с последующей количественной ПЦР с генотипспецифичными флуоресцентными зондами в реальном времени, филогенетического анализа нуклеотидных последовательностей генов E и NS1, биопробы на мышах, реакции гемагглютинации, а также определения нейроинвазивности проведено сравнение инфекции вирусом клещевого энцефалита (ВКЭ) иксодовых клещей Ixodes persulcatus P. Schulze и Ixodes pavlovskyi Pomerantsev 1946 в зоне симпатрии их ареалов на территории Новосибирской области в период роста численности иксодовых клещей со сменой доминирующего вида при монодоминантном типе населения иксодид. Соотношение двух видов клещей зависело не от биотопов соснового или березового леса, а от удаленности от лесопарковой зоны Новосибирского научного центра: при уменьшении антропогенной нагрузки относительная доля клеща Павловского уменьшалась. Вирусофорность (с учетом патогенного и апатогенного для лабораторных мышей ВКЭ), спектры трех основных генетических типов ВКЭ, нейровирулентность и гемагглютинирующая активность ВКЭ у клещей таежного и Павловского были сходными. Отличия состояли в том, что доли патогенного для лабораторных мышей вируса и дальневосточного генетического типа ВКЭ, а также вирусные нагрузки сибирского и европейского типов ВКЭ у клеща Павловского существенно превышали таковые у таежного клеща.

Полный текст

В природных очагах устойчивость паразитарной системы, включающей вирус клещевого энцефалита (ВКЭ), его беспозвоночных и позвоночных резерву- арных хозяев, обеспечивается полигостальностью, перестройками вирусного квазивида и разнообразием циклов трансмиссии. Наиболее эффективным способом является безвиремийная передача вируса между клещами в процессе питания на одном прокормителе [1]. Для этого необходимо совпадение сезонных циклов клещей и их прокормителей, способных обеспечить репликацию ВКЭ в особых им- мунокомпетентных клетках кожи [1-3]. Вследствие этого наиболее эпидемически значимыми переносчиками ВКЭ считают Ixodes persulcatus P. Schulze и Ixodes ricinus L. Среди 12 типов населения иксодовых клещей, объединенных в 3 группы: моно-, би- и полидо- минантную, в Западной Сибири ранее был описан монодоминантный тип с доминированием таежного клеща в сочетании с малочисленными видами, в том числе с близкородственным реликтовым видом иксодид из группы persulcatus - клещом Павловского Ixodes pavlovskyi Pomerantsev 1946 [4]. Однако в последние годы вблизи Томска [5] и Новосибирска [6] отмечено массовое появление (вплоть до абсолютного доминирования) клеща Павловского, ареал которого состоит из Алтайской и Дальневосточной разобщенных частей [7]. Различия клещей включают специализацию половозрелой фазы к хозяевам: таежный клещ прокармливается в основном на крупном рогатом скоте, крупных и средних диких млекопитающих, а клещ Павловского - на птицах, реже на зайцах и ежах [7]. Температура тела у птиц (42-44oC) выше, чем у млекопитающих, что может обусловливать селекцию температуроустойчивых мутантов ВКЭ. Высокое обилие клеща Павловского, отличающегося от таежного повышенной засухоустойчивостью и способного успешно существовать в неблагоприятных для таежного клеща городских и пригородных биотопах, может не только повышать устойчивость природных очагов клещевого энцефалит (КЭ), но и стать причиной изменений свойств природных популяций ВКЭ вследствие адаптации вируса к другому виду клещей. Сравнительные исследования вирусоносительства среди разных видов иксодовых клещей в природных очагах, претерпевающих изменения видового состава иксодид, немногочисленны [8, 9]. Цель данной работы - количественные и качественные характеристики ВКЭ у иксодовых клещей I. persulcatus и I. pavlovskyi в западно-сибирском ан- тропургическом очаге в период трансформации видового состава населения иксодид. Материалы и методы Сбор клещей. Учет численности и сбор клещей проводили с растительности на флаг в мае-июне 2011-1102 гг. на территории антропургического очага КЭ - лесопарка Новосибирского научного центра (ННЦ), расположенного в зоне симпатрии западносибирской части ареала таежного клеща и алтае- саянской части ареала клеща Павловского (54o49’ N, 83o05’ E). Ранее здесь отмечали абсолютное доминирование таежного клеща [10]. Видовую принадлежность определяли с помощью стереоскопического микроскопа по морфологическим признакам [7]. Для детекции ВКЭ пулы клещей по 10 экземпляров гомогенизировали в 1 мл физиологического раствора. Индивидуальную зараженность определяли посредством перерасчета [11]. Детекцию ВКЭ проводили в гомогенатах клещей посредством иммуноферментного анализа (ИФА) на антиген ВКЭ с использованием набора «ВектоВКЭ- антиген-стрип» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск), обратной транскрипции с последующей ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ) [12] и биопробы на мышах [13]. Вирусные нагрузки в клещах оценивали с использованием двух независимых методов [14]: 1) количественной ОТ-ПЦР-РВ с калибровочным графиком зависимости пороговых циклов (Ct) флуоресценции от количеств рекомбинантной плазмидной ДНК; 2) ИФА на антиген E ВКЭ с калибровочным графиком зависимости оптической плотности ВКЭ количеств антигена. Идентификацию изолятов ВКЭ осуществляли посредством молекулярного типирования в ОТ- ПЦР-РВ с генотипспецифичными флуоресцентными зондами [12] и филогенетического анализа нуклеотидных последовательностей фрагментов генов E и NS1 ВКЭ, реакции биологической нейтрализации на мышах [15], реакции гемагглютинации с реакцией торможения гемагглютинации [16]. Определение нуклеотидных последовательностей генов E и NS1 для изолятов РНК ВКЭ из гомогенатов клещей и мозга биопробных мышей проводили в Центре секвенирования ДНК ФГБУН ИХБФМ СО РАН (Новосибирск) с использованием автоматического анализатора ДНК модели ABI 310 (Applied Biosystems, США) и набора BigDye 3.1. Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей проводили при помощи программного обеспечения Mega 5.0 (http:// www.megasoftware.net/) с использованием четырех альтернативных алгоритмов при 1000 репликаций [17]. Нейровирулентность ВКЭ в клещах определяли заражением в мозг и под кожу мышей ICR массой 8-10 г десятикратными разведениями (4 особи на одно разведение) патогенных для мышей клещевых суспензий. Титры вируса рассчитывали в lg ЛД50 [18]. Статистическое сравнение выборочных средних и выборочных долей проводили по критерию Стью- дента [19]. Определение средних геометрических титров (СГТ) антигенов проводили вычислением антилогарифма от среднего арифметического десятичных логарифмов обратных значений титров в соответствии с указаниями [18]. Принят уровень значимости различий p < 0,05. Содержание, кормление, уход за животными и выведение их из эксперимента осуществляли в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Минздрава СССР от 12 августа 1977 г. № 755). Результаты и обсуждение Распределение иксодид по биотопам. Мониторинг антропургического очага КЭ на территории Таблица 1 Численность имаго иксодид в исследуемом антропургическом очаге Участок сбора клещей Суммарная численность иксодид (экз/флаго-км ± т) Доля клеща Павловского (% ± т) 2011 2012 2011 2012 № 1 - сосновый бор, от ННЦ не более 3 км 39,3 ± 3,7 31,9 ± 5,5 84,4 ±1,7 93,8 ± 1,5* № 2 - мелколиственный разреженный березовый лес с незначительной примесью осины и хорошо развитым травяным покровом, от ННЦ не более 3 км 55,7 ± 6,7 55,9 ± 8,9 84,6 ± 2,4 95,8 ± 0,8* № 3 - мелколиственный березово-осиновый лес, хорошо развитый кустарниковый ярус со смыканием крон, от ННЦ 5-6 км 38,0 ± 14,0 46,5 ± 7,4 58,3 ± 5,0** 82,0 ± 1,7* № 4 - пойма реки, разреженный сосновый бор с примесью березы, осины, хорошо развитым кустарником и густым травостоем, от ННЦ 12-15 км 52,0 ± 10,6 42,8 ± 21,7 12,5 ± 4,8** 16,7 ± 6,1 Всего... 45,0 ± 3,4 43,3 ± 4,2 60,5±1,7 80,9 ± 1,0* Примечание. (экз/флаго-км ± т) - численность клещей (экз/флаго-км) и статистическая погрешность (т) показателя; (% ± т) - % от общего количества иксодид, принятого за 100%, т - статистическая погрешность доли (%); * - величина доли клеща Павловского в 2012 г. значимо (р < 0,001) выше его доли в 2011 г. в том же участке; ** - величины доли клеща Павловского на участках № 3 и 4 значимо (р < 0,001) различаются и, кроме того, также (р < 0,001) отличаются от долей на участках № 1 и 2. Новосибирской области в 1980-2005 гг. показал циклические вариации численности клещей в диапазоне 4,4-18,6 экземпляра/флаго-км (экз/флаго- км), а с 2006 по 2012 г. - быстрый рост численности иксодид до 52,0 экз/флаго-км. При этом колебания плотности прокормителей клещей - мелких грызунов и насекомоядных оставались в пределах периодических флуктуаций, численность птиц [20] постепенно уменьшалась вследствие антропогенной дигрессии их населения. Сбор иксодовых клещей проводили в годы высокой численности клещей в мае-июне 2011-2012 гг. на четырех участках с разными рельефом, растительностью, удаленностью от ННЦ и, следовательно, антропогенным действием (табл. 1). Общая численность клещей в биотопах не была связана с удаленностью от ННЦ. Определение видовой принадлежности 3190 экз. клещей выявило 2 вида иксодид - таежный клещ и клещ Павловского с превалированием (р < 0,001) последнего. В среднем доля клеща Павловского возросла от 60,5 ± 1,3% в 2011 г. до 80,9 ± 1,0% в 2012 г. (р < 0,001). При этом по мере увеличения расстояния от ННЦ снижается доля клеща Павловского (см. табл. 1). Полученные данные свидетельствуют о продолжении экспансии клеща Павловского на территории Новосибирской области [21] в прямой зависимости от антропогенного воздействия. Зараженность клещей ВКЭ изучали посредством ИФА на антиген Е, ОТ-ПЦР-РВ, РГА и биопробы на мышах. Сравнительный анализ зараженности клещей ВКЭ на разных участках показал неравномерность распределения вирусофорных особей обоих видов по территории. В 2011 г. частоты обнаружений РНК ВКЭ в клещах варьировали по участкам от 1,5 ± 1,0 до 14,2 ± 3,8% у клеща Павловского и от 1,9 ± 1,9 до 6,7 ± 1,4% - у таежного клеща. По данным комплекса методов (с учетом патогенных и апа- тогенных для мышей изолятов) зараженность клещей Павловского и таежного составляла в среднем 4,0 ± 0,9 и 5,3 ± 1,0%, соответственно. Вместе с тем частота обнаружений патогенного для лабораторных мышей ВКЭ у клеща Павловского (2,1 ± 0,7%) была значимо выше (р < 0,01), чем у таежного (0,2 ± 0,2%). Данные биопробы (рис. 1) свидетельствовали о зависимости частоты изоляции патогенного ВКЭ как от лесорастительных условий участков, так и от вида переносчика. Количественные оценки. По данным количественной ОТ-ПЦР-РВ [14] диапазон Ct в суспензиях клеща Павловского составлял 15,3-41,4 (3 Э07-100 геном-эквивалентов в реакционной смеси), у таежного клеща - 26,4-49,5 • 104-100 геном-эквивалентов в реакционной смеси), что с учетом эффективности выделения РНК и ревертирования соответствовало более высоким вирусным нагрузкам для клеща Павловского - до 109 вирионов по сравнению с количеством вирионов до 106 у таежного клеща. £ о I----------------------- 1------------------ 1------------------ 1------------------ ту---------------- 1 1 (л=350) 2 (л=510) 3 (л=540) 4 (л=560) А (л=1960) Участки сбора клещей И I- persulcatus (п=830 экземпляров) ^ I. pavlovskyi (л=1130 экземпляров) Рис. 1. Зараженность патогенным ВКЭ имаго голодных иксодовых клещей, отловленных в очаге (усредненные данные за 2011-2012 гг). А - усредненный процент зараженности клещей на всей изученной территории; * - зараженность клеща Павловского патогенным ВКЭ достоверно (р < 0,05) выше зараженности таежного клеща. В скобках приведено количество (n) исследованных клещей. Таблица 2 Генетический состав ВКЭ и пороговые циклы в ОТ-ПЦР РВ в клещах среди образцов, содержащих РНК ВКЭ Дальневосточный тип Сибирский тип Европейский тип Вид клеща доля (%) изолятов (А ± т) пороговые циклы (Ct ± т) доля (%) изолятов (А± т) пороговые циклы (Ct ± т) доля (%) изолятов (А ± т) пороговые циклы (Ct ± т) Ixodes 61,1 ± 11,8* 33,3 ± 1,4 (26,5^1,4) 83,3 ± 9,0 31, 0 ± 1,5 (15,3-39,8)** 11,1 ± 7,6 24,8 ± 3,9 (20,9-28,6)** favlovskyi Ixodes 21,1 ± 9,6* 33,9 ± 2,9 (26,4-39,4) 78,9 ± 9,6 40,9 ± 2,0 3(26,9-49,5)** 15,8 ± 8,6 44,2 ± 1,9 (42,3-46,1)** persulcatus Примечание. А - % изолятов РНК ВКЭ; т - статистическая погрешность, % [19]; Ct - усредненная величина пороговых циклов ОТ-ПЦР; т - статистическая погрешность величины цикла; в скобках - диапазон варьирования пороговых циклов; * - % изолятов РНК ВКЭ дальневосточного типа от клеща Павловского выше, чем от таежного (р < 0,05); ** - усредненные величины пороговых циклов ОТ-ПЦР для изолятов РНК ВКЭ сибирского и европейского типов значимо (р < 0,001) ниже у клеща Павловского, чем у таежного. Дополнительно количественные оценки антигена Е ВКЭ в гомогенатах проводили посредством ифА [14]. Значения оптической плотности в непатогенных образцах клещей обоих видов не превышали 0,350, что соответствовало 0,9 нг/мл. С учетом молекулярной массы гликопротеина Е 60 кД это количество соответствовало приблизительно 1010 молекул белка Е или 5 • 107 вирионов в клещах с непатогенным ВКЭ. В патогенных образцах клеща Павловского диапазон содержания белка Е составлял до 25 нг/мл (до 109 вирионов в клеще), у таежного - до 3 нг/мл (до 108 вирионов). В среднем количество гликопротеина Е в патогенных пробах клеща Павловского (6,1 ± 1,7 нг/мл) значимо (р < 0,05) превышало таковое у таежного клеща (1,9 ± 0,65 нг/мл). Таким образом, количественные оценки вирусных нагрузок с использованием двух независимых методов, совпадали. Молекулярное типирование ВКЭ. Спектр трех основных генетических типов ВКЭ у двух видов клещей не различался (табл. 2). В образцах клещей при молекулярном типи- ровании посредством филогенетического анализа нуклеотидных последовательностей генов Е, NS1 и ОТ-ПЦР-РВ с генотипспецифичными флуоресцентными зондами выявлены РНК ВКЭ сибирского (Sib), дальневосточного (FE) и европейского (Eur) типов. При этом отмечено почти троекратное превышение доли изолятов РНК ВКЭ FE-типа у клеща Павловского по сравнению с таежным при близких усредненных значениях Ct. В отличие от FE-типа. РНК ВКЭ Sib и Eur типов у разных видов детек- Патогенные образцы (л=15) 110 100 90 £ 80 g 70 I 60 о. «о 50 60 п 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 40 30 20 10 0 а § ct Клещ Павловского Клещ Таежный Клещ Таежный Павловского клещ Павловского клещ Моноинфекция европейского типа Щ Моноинфекция дальневосточного типа Q Моноинфекция сибирского типа ^ Смесь дальневосточного и сибирского типов Апатогенные образцы (л=22) Таежный Клещ Таежный клещ Павловского клещ Сибирский тип Щ Дальневосточный тип Европейский тип Патогенные образцы Апатогенные образцы * Рис. 2. Распределение генетических типов (а) и пороговые циклы (б) ВКЭ у разных видов клещей среди образцов, содержащих РНК ВКЭ, в зависимости от патогенности. % рассчитывали относительно патогенных или апатогенных РНК ВКЭ-содержащих образцов каждого вида, принимаемых за 100%; * - (р < 0,001) усредненные пороговые циклы (Ct) Sib- и Eur-типов ВКЭ в апатогенных образцах таежного клеща значимо выше по сравнению с Ct ВКЭ тех же типов в апатогенных пробах клеща Павловского (б). тировали примерно с равной частотой, но судя по различиям средних значений Ct вирусные нагрузки ВКЭ Sib и Eur типов были выше у клеща Павловского по сравнению с таежным. Эти факторы могли обусловливать достоверно более высокую частоту обнаружения патогенного ВКЭ у клеща Павловского по сравнению с таежным (см. рис. 1). Анализ выявил особенности распределения генетических типов и концентраций РНК ВКЭ у клещей обоих видов в зависимости от содержания в образцах патогенного для мышей ВКЭ. Патогенные для мышей изоляты содержали РНК ВКЭ двух типов (Sib и FE) преимущественно в виде смешанной инфекции, апатогенные - моноинфекцию трех типов ВКЭ с преобладанием Sib-типа (рис. 2, а). Необходимо отметить отсутствие Eur-типа в патогенных образцах. Усредненные Ct Sib- и FE-типов ВКЭ в патогенных пробах обоих видов клещей значимых различий не имели, но в апатогенных образцах усредненные Ct Sib- и Eur-типов ВКЭ были значимо (р < 0,001, р < 0,05) меньше у клеща Павловского, чем у таежного (рис. 2, б). Следовательно, концентрации РНК ВКЭ Sib- и Eur-типов в апатогенных пробах клеща Павловского значимо превышали таковые у таежного клеща. Сравнительный анализ структуры гена Е штамма 2730 ВКЭ (номер доступа в GenBank JN993573), изолированного от клеща Павловского, показал соответствие подтипу Заусаев сибирского типа ВКЭ (уровень гомологии 97-99%), доминирующему в эндемичных областях России [14, 22, 23]. Нейровирулентность ВКЭ. При титровании на лабораторных мышах патогенного ВКЭ непосредственно из вирусофорных суспензий клещей Павловского и таежного значимых отличий нейровирулентности не выявлено: усредненный внутримозговой титр ВКЭ составил 4,23 ± 0,33 и 3,27 ± 0,56 lg LD50, подкожный - 2,5 ± 0,15 и 1,31 ± 0,73 lg LD50, индексы инвазивно- сти - 1,86 ± 0,31 и 1,94 ± 0,22 соответственно. Гемагглютинирующие свойства ВКЭ в суспензиях клещей обоих видов не были выявлены, несмотря на наличие антигена Е в ИФА, что могло быть обусловлено различной чувствительностью методов [12]. После инокуляции клещевых суспензий мышам в мозге заболевших КЭ особей титры гемагглютинирующего вируса варьировали в диапазоне от 1:2 до 1:1280 при титрах гликопротеина E в ИФА от 1 : 100 до 1 : 6400. СГТ гемагглютинина в мозге больных мышей ICR после исходного заражения суспензиями клещей Павловского составляла 1:118,9 (2,08 ± 0,28 lg), что значимо не превышает СГТ гемагглютини- рующего антигена у мышей после заражения суспензиями таежного клеща - 1:23,4 (1, 37 ± 0,8 lg), но тем не менее свидетельствует о тенденции повышенной гемагглютинирующей активности изолятов ВКЭ от клеща Павловского по сравнению с изолятами от таежного клеща. Зависимости между количеством гликопротеина E ВКЭ (ИФА) в суспензиях клещей и величинами титров гемагглютинирующего антигена (РГА) в мозге мышей, которым вводили эти суспензии, не отмечено. В западно-сибирском антропургическом очаге, расположенном в зоне симпатрии ареалов клеща Павловского и таежного, в период роста численности имаго иксодид показана смена доминирующего вида от I. persulcatus к I. favlovskyi, более устойчивому к антропогенному преобразованию среды вследствие способности переносить более высокие температуры при меньшем уровне увлажненности [7] . Процесс массового заселения территории исследуемого очага клещом Павловского не был связан с ростом численности мелких насекомоядных, грызунов или птиц, а обусловлен, вероятней всего, антропогенной трансформацией лесорастительных условий до пессимальных для таежного клеща, но достаточно благоприятных для обитания менее чувствительного к гидротермическим перепадам клеща Павловского. Из обширной вирусологической литературы и собственных данных [24] известно, что в местах обитаниях с оптимальными условиями для клещей их зараженность ВКЭ носит устойчивый характер и чаще удается изолировать патогенный для лабораторных мышей вирус. Вероятно, это обусловлено более успешным развитием ВКЭ в организме неистощенных клещей. Проведенное нами сравнительное изучение зараженности I. pavlovskyi и I. persulcatus ВКЭ количественных и качественных характеристик вируса в период трансформации видового состава населения иксодид, показало, что общая вирусофорность клещей, спектр основных генетических вариантов, нейровирулентность и гемагглютинирующая активность квазивида ВКЭ не имели значимых различий у двух видов. Вместе с тем доли клещей с патогенным для лабораторных мышей вирусом и дальневосточным типом ВКЭ, количества вирио- нов сибирского и европейского типов были значительно больше у клеща Павловского по сравнению с таежным, что, возможно, отражает и различный уровень оптимума условий для видов, и циркуляцию ВКЭ у прокормителей имаго клеща Павловского - птиц и, кроме того, может приводить к росту эпидемической опасности антропургических очагов КЭ. Выводы 1. На территории Новосибирской области в 2011-2012 гг. в период роста численности иксодо- вых клещей до 52 экз/флаго-км зарегистрирована смена доминирующего вида от I. persulcatus к I. pavlovskyi (до 96% вблизи Новосибирского научного центра). 2. Вирусофорность, детекция трех основных типов ВКЭ, гемагглютинирующая активность и ней- роинвазивность были сходными для изолятов вируса от обоих видов иксодовых клещей. 3. Доли патогенного для лабораторных мышей вируса и дальневосточного типа ВКЭ, количества вирионов сибирского и европейского типов были больше у клеща Павловского по сравнению с таежным клещом.
×

Об авторах

Галина Сергеевна Чичерина

ФГБУН Институт систематики и экологии животных СО РАН

Email: chicherinagalina@bk.ru
мл. науч. сотр., лаб. патологии насекомых 630091, Новосибирск

Ольга Владимировна Морозова

ФГБУ НИИ вирусологии им. И. Ивановского Минздрава РФ

Email: omorozova2010@gmail.com
доктор биол. наук 123098, Москва

Виктор Васильевич Панов

ФГБУН Институт систематики и экологии животных СО РАН

канд. биол. наук, ст. науч. сотр. лаб. экологии сообществ позвоночных животных 630091, Новосибирск

Владимир Никифорович Романенко

ФГБОУ высшего профессионального образования «Национальный исследовательский Томский государственный университет»

Email: vnremont@mail.ru
доктор биол. наук, проф., зав. каф. зоологии беспозвоночных 643050, Томск

Станислав Андреевич Бахвалов

ФГБУН Институт систематики и экологии животных СО РАН

Email: bahvalov60@list.ru
доктор биол. наук, вед. науч.сотр. лаб. патологии насекомых 630091, Новосибирск

Валентина Николаевна Бахвалова

ФГБУН Институт систематики и экологии животных СО РАН

Email: bvntbe@yandex.ru
канд. биол. наук, ст. науч. сотр. лаб. патологии насекомых 630091, Новосибирск

Список литературы

  1. Labuda M., Randolph S.E. Survival strategy of tick-borne encephalitis virus: cellular basis and environmental determinants. Zbl. Bakteriol. Dec. 1999; 289 (5-7): 513-24.
  2. Korenberg E.I. Seasonal population dynamics of ixodes ticks and tick-borne encephalitis virus. Exp. Appl. Acarol. 2000; 24 (9): 665-81.
  3. Nuttall P.A., Labuda M. Dynamics of infection in tick vectors and at the tick-host interface. Adv. Virus Res. 2003; 60: 233-72.
  4. Богданов И.И. Иксодовые клещи Западной Сибири. Сообщение VII. Типы населения иксодовых клещей. Вестник Омского государственного педагогического университета. Естественные науки и экология. 2006. Available at: www. omsk.edu
  5. Романенко В.Н. Мониторинг видового состава и численности иксодовых клещей (Parasitiformes, Ixodidae) в антропургических биотопах. Вестник Томского государственного университета. 2009; 324: 376-9.
  6. Bakhvalova V.N., Panov V.V., Morozova O.V Tick-borne encephalitis virus quasispecies rearrangements in ticks and mammals. In: Ruzek D., ed. Flavivirus Encephalitis. ISBN: 978953-307-669-0, «InTech». 2011: 213-34. Available from: http://www.intechopen.com/articles/show/title/tick-borne-encephalitis-virus-quasispecies-rearrangements-in-ticks-and-mammals
  7. Филлипова Н.А., ред. Таежный клещ Ixodes persulcatus Schulze (Acarina, Ixodidae): морфология, систематика, экология, медицинское значение. Л.: Наука; 1985.
  8. Иванова Н.В. Роль мелких млекопитающих в очагах природных инфекций на антропогенно трансформированной территории юго-востока Западной Сибири: Дисс.. канд. биол. наук. Томск; 2009.
  9. Романенко В.Н., Кондратьева Л.М. Зараженность иксодовых клещей, снятых с людей, вирусом клещевого энцефалита на территории г. Томска и его окрестностей. Паразитология. 2011; 45 (1): 3-10.
  10. Добротворский А.К., Бахвалова В.Н., Харитонова Н.Н., Сапегина В.Ф. Динамика параметров паразитарной системы клещевого энцефалита в условиях северной лесостепи Приобья. Сибирский экологический журнал. 1994; 1 (4): 369-75.
  11. Беклемишев В.Н. К изучению зараженности клещей переносчиков энцефалита методом биопробы. Вопросы вирусологии. 1962; 2: 240-2.
  12. Морозова О.В., Бахвалова В.Н., Панов В.В. Сравнение методов детекции вируса клещевого энцефалита. В кн.: Фундаментальные науки - медицине: Сборник трудов научной конференции. Новосибирск: АРТА; 2008: 171-7.
  13. Bakhvalova V.N., Dobrotvorsky A.K., Panov V.V., Matveeva V.A., Tkachev S.E., Morozova O.V. Natural tick-borne encephalitis virus infection among wild small mammals in the southeastern part of western Siberia, Russia. Vector Borne Zoonotic Dis. 2006; 6 (1): 32-41.
  14. Морозова О.В., Гришечкин А.Е., Бахвалова В.Н., Исаева Е.И., Подчерняева Р.Я. Динамика репродукции вируса клещевого энцефалита в культурах клеток. Вопросы вирусологии. 2012; 2: 40-3.
  15. Дерябин П.Г., Лебедева Г.А., Логинова Н.В. Реакция нейтрализации тогавирусов на мышах и культурах клеток. В кн.: Гайдамович С.Я., ред. Арбовирусы (методы лабораторных и полевых исследований). М.: Наука; 1986: 120-6.
  16. Clarke D.H., Casals J. Techniques for hemagglutination and hemagglutination-inhibition with arthropod-borne viruses. Ат. J. Trop. Med. Hyg. 1958; 7 (5): 561-73.
  17. Tamura K., Peterson D., Peterson N., Stecher G., Nei M., Kumar S. MEGA5: Molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood, evolutionary distance, and maximum parsimony methods. Mol. Biol. Evolut. 2011; 28: 2731-9.
  18. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медгиз; 1962.
  19. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа; 1980.
  20. Цыбулин С.Н., Жимулев И.Ф., Панов В.В., Вартапетов Л.Г., Жуков В.С., Богомолова И.Н., Николаева О.Н. Животный мир. Позвоночные. (Динамика численности и пространственная неоднородность сообществ). В кн.: Жимулев И.Ф., ред. Динамика экосистем Новосибирского Академгородка. Новосибирск: Издательство СО РАН; 2013: 56-80
  21. Чичерина Г.С., Романенко В.Н., Панов В.В., Морозова О.В., Бахвалова В.Н. Антропогенная трансформация сообщества иксодовых клещей в западносибирском природном очаге клещевого энцефалита. В кн.: «Научные чтения памяти Н.Ф. Реймерса и Ф.Р Штильмарка. Антропогенная трансформация природной среды», г. Пермь, 6-9.12.2011. Пермь: Пермский государственный национальный исследовательский университет. 2011: 135-41.
  22. Карань Л.С., Маленко Г.В., Бочкова Н.Г., Левина Л.С., Колясникова Н.М., Гамова Е.Г. и др. Применение молекулярно-генетических методик для изучения структуры штаммов вируса клещевого энцефалита. Бюллетень Сибирского отделения РАМН. 2007; 4: 34-40.
  23. Погодина В.В., Карань Л.С., Колясникова Н.М., Левина Л.С., Маленко Г.В., Гамова Е.Г. и др. Эволюция клещевого энцефалита и проблема эволюции возбудителя. Вопросы вирусологии. 2007; 5: 16-21.
  24. Бахвалова В.Н. Эпизоотическое состояние природного очага клещевого энцефалита и особенности вирусной популяции в лесостепном Приобье (Западная Сибирь): Дисс.. канд. биол. наук. Новосибирск; 1994.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© ООО "Эко-вектор", 2015


СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: № 014448 от 08.02.1996. 
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ЭЛ № ФС 77 - 80652 от 15.03.2021 .


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах