Seasonal fluctuations of H.Pylori markers in patients with acute viral hepatitis

Full Text

Helicobacter pylori (Нр) является частью индиген-ной биоты желудка, эта грамотрицательная бактерия может посылать и принимать сигналы от клеточных компонентов в слизистой желудка, модулировать иммунный ответ и клеточные процессы хозяина, что позволяет хозяину и бактерии существовать в динамическом равновесии [1, 2]. Избирательная колонизация Нр эпителия желудка вызывает развитие хронического воспаления слизистой оболочки и признана безусловным фактором развития рака желудка и MALT-лимфомы [3, 4]. В последние годы появились новые данные о Нр, стратегии вирулентности этого микроба, активности важных бактериальных детерминант, непосредственно взаимодействующих с клетками и тканями хозяина и модулирующих разнообразные факторы хозяина, - ЛПС, секрети-руемых белках CagA и VacA, адгезинах и др. [2, 3, 5-12]. В частности, установлено присутствие Нр в ткани печени, желчного пузыря, желчных ходах и Для корреспонденции: Белая Ольга Федоровна, д-р мед. наук, проф., зав. лаб. по изучению токсических и септических состояний НИИ Молекулярной медицины ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова, ofbelaya@mail.ru однонаправленное влияние этого микроба и вирусов гепатита при острых и хронических вирусных гепатитах и злокачественной трансформации [3, 7, 8, 10]. Как известно, интоксикационный синдром при многих инфекционных и неинфекционных заболеваниях обусловлен липополисахаридами грамо-трицательной флоры и другими сходными с ними по действию патогенассоциированными молекулами (PAMPs), он отягощает течение и вирусных инфекционных заболеваний, например вирусных гепатитов [13]. В ранее проведенных исследованиях мы установили значительное присутствие ЛПС/О-антигена Нр при интоксикации, наблюдаемой при острых вирусных гепатитах (ОВГ) с холестатиче-ским синдромом, в том числе снижение формирования специфических иммунных комплексов в крови, состоящих из IgG-антител и ЛПС/О-антигенов сопутствующей патогенной флоры кишечника [14]. Эспериментально показано, что даже хроническая низкодозовая стимуляция ЛПС Нр может прими-ровать нейтрофилы в слизистой желудка, стимулированной другими медиаторами, к избыточному выбросу вредных веществ [15]. Наряду с ЛПС/О- 17 ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ, № 2, 2014 антигеном Нр представляется интересным и необходимым изучение присутствия других факторов патогенности - вакуолизирующего цитотоксина VacA и онкопротеина CagA у больных ОВГ. Целью работы являлось изучение сезонных особенностей выявления ЛПС/О-антигена, VacA и высокомолекулярных белков - ВМБ (включающих CagA) в кале и в циркулирующих иммунных комплексах (ЦИК) сыворотки крови у больных ОВГ. Материалы и методы Всего было обследовано 90 больных ОВГ желтушной формы разной этиологии (HBV - 37; HCV - 6; HAV - 17; миксты - 30 (HDV + HCV -- 11; HBV + HCV - 18; HAV + HBV - 1). Из них у 30 человек выявлен холестатический синдром (далее - холестаз). В качестве контрольной группы обследовано 42 практически здоровых донора крови. Больные были обследованы многократно (3-6 раз) на протяжении острого периода и в периоде ранней реконвалесценции, от больных исследовали пробы кала и ЦИК, выделенных из сыворотки крови. В биосредах пациентов были тестированы ЛПС/О-антигены S. sonnei, S. flexneri 1-5, S. newcastle; Salmonella В, С1, С2, D, Е-серогрупп; Y. pseudotuberculosis I, III, Y. enterocolitica O3, 09, O7,8, O4,33, O6,30; E. coli O157; Campylobacter (C. jejuni, C. coli, C. lari); Hp, а также присутствие комплекса ВМБ (в том числе CagA) и маркера VacA Hp (антительные диагностикумы для постановки реакции коагглютинации на стеклах и планшетах были любезно изготовлены в НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи Минздрава России) [16-18]. Примененная реакция коагглютинации (РКА) основана на способности белка А золотистого стафилококка соединяться с Fc-фрагментом иммуноглобулинов IgG124. Полученный антительный диагностикум свободными Fab-фрагментами иммуноглобулинов соединяется со специфическими антигенами, что проявляется феноменом агглютинации стафилококков. Реакция видна невооруженным глазом, легко учитывается. Для выявления в качестве маркеров различных возбудителей термостабильных ЛПС/О-антигенов использовали РКА на стекле, для выявления маркеров (антигенов) ВМБ и VacA Hp - РКА на иммунологических планшетах. Подготовка проб и постановка реакции подробно описаны ранее [8]. Статистическая обработка данных проведена по программе Biostatistica для IBM PC с расчетом параметрических и непараметрических критериев Стьюдента и %2. Результаты и обсуждение По частоте выявления в копрофильтратах ЛПС/ О-антигены Hp занимали 1-е место (57,7% от общего числа 81,4% лиц, у которых были выявлены антигены сальмонелл , йерсиний, шигелл), при этом у больных ОВГ с холестазом положительные реакции на ЛПС/О-антиген Нр выявлены досто верно чаще, чем в группе больных без холестаза (р < 0,01). У доноров крови О-антигены разных возбудителей выявлены в копрофильтратах лишь у 16,6% обследованных (из них ЛПС/О-антигены Hp в 9,2%, что достоверно отличается от частоты их выявления у больных ОВГ (р < 0,01). В ЦИК сыворотки крови ЛПС/О-антиген Hp выявлен всего в 16,7%, при этом в группе больных с хо-лестазом - в 32%, без холестаза - достоверно ниже, в 7,1% случаев (р < 0,05). Эти данные свидетельствуют о том, что в целом наблюдается невысокое «включение» ЛПС/О-антигена Hp в специфические иммунные комплексы, и только при высокой антигенной нагрузке в кале (у больных ОВГ с холестазом) они выявляются в составе ЦИК у трети больных. С целью изучения частоты обнаружения других факторов - VaeA-цитотоксина и комплекса ВМБ-маркеров островка патогенности, включая CagA (имеющих большое значение в патогенезе хелико-бактерной инфекции), было обследовано 39 больных ОВГ различной этиологии. Из этого числа больных маркер VacA в составе ЦИК сыворотки крови выявлен у 49,5% , ВМБ - достоверно чаще, у 72,7% (p < 0,05). Частота выявления маркера ВМБ у больных ОВГ с синдромом холестаза и без него в составе ЦИК была также выше (80,5 и 68% соответственно), чем VacA (61 и 43% соответственно) (p < 0,05). В течение календарного года средняя частота выявления О-антигена была достоверно выше у больных, перенесших заболевание в январе-апреле (в 72,5% проб кала) в сравнении с перенесшими заболевание ОВГ в мае-августе (52,5% ; р = 0,023). В составе ЦИК сыворотки крови также более частое выявление О-антигена отмечено в январе-апреле (в среднем 43,8%), а мае-августе - реже (в среднем 9,5%; р < 0,001). Маркер VacA Нр найден в составе ЦИК сыворотки крови в январе-апреле в 40,9% проб, в мае-августе в 26% (р < 0,05), это соотношение сохранялось и в отдельных группах больных с холестатическим синдромом и без него. В ходе желтушного периода у больных ОВГ, наблюдавшихся нами в январе-апреле, на 1-й неделе желтухи уровень маркера VacA составлял 0,25 ± 0,05 (lg 10 обратного титра антигена), затем достоверно повышался к периоду разгара желтухи до 0,50 ± 0,07 (р1 = 0,006) и далее, в период стихания желтухи, -до 0,53 ± 0,075 (до уровня, достоверно более высокого, чем на 1-й неделе желтухи (р1 < 0,05). У больных, перенесших ОВГ в мае-августе , уровень VacA-антигена в ЦИК на 1-й неделе желтухи составлял 0,27 ± 0,095, затем незначительно повышался до 0,40 ± 0,11, а затем снижался до 0,15 ± 0,087, становясь достоверно ниже уровня у больных предыдущей группы (р = 0,017). В отличие от маркера VacA в ЦИК маркеры ВМБ у больных ОВГ встречались с одинаковой частотой в январе-апреле и мае-августе. Но при этом уровень ВМБ в составе ЦИК был выше, чем VacA, и у боль 18 ных ОВГ в январе-апреле отмечалось его достоверное нарастание к периоду разгара желтухи в сравнении с 1-й неделей желтухи ( р1 < 0,002), в то время как при заболевании в мае-августе его уровень на протяжении желтушного периода был достаточно монотонным. Полученные данные о более высокой частоте выявления ЛПС/О-антигена в кале и ЦИК и маркера Va-cA Hp в ЦИК у больных, перенесших ОВГ в январе-апреле, по сравнению с перенесшими его в мае-августе могут свидетельствовать о более интенсивной жизнедеятельности Нр в зимне-весенние месяцы года, а именно - его размножении в организме и продукции важного токсина. Вероятно, это связано с ослаблением клеточного иммунитета на фоне вирусного поражения печени у больных ОВГ, протекающего на фоне сопутствующего инфицирования Нр. Нам не удалось проследить сезонность в выявлении маркеров Нр в контрольной группе здоровых доноров крови, однако в целом тенденции выявления маркеров Нр у больных ОВГ соответствовали сезонным колебаниям О-антигена у практически здорового населения, по данным литературы [19]. Полученные данные соответствуют существующим представлениям о типичных сезонных обострениях язвенной болезни и отражают, видимо, возможные сезонные колебания фонового состояния общего иммунитета. Заключение В результате проведенного исследования установлено, что частота выявления ЛПС/О-антигена, а также частота выявления и уровни маркера VacA Hp у больных ОВГ различаются в желтушном периоде заболевания в зависимости от сезона года, в котором протекает заболевание, их показатели выше в зимне-весенние месяцы года (январь-апрель) по сравнению с летним периодом (май-август). Частота выявления ЛПС/О-антигена и маркера VacA Hp у больных ОВГ значительно превышает таковую у практически здоровых лиц (доноров крови). Мы считаем, что эти данные необходимо учитывать при оценке результатов диагностики хеликобактерной инфекции и результатов эрадикационной терапии.

About the authors

O. F. Belaia

State budget Educational Institution of Higher Professional Education I.M. Setchenov First Moscow State Medical University of Health Ministry

S. N. Zuevskaya

State budget Educational Institution of Higher Professional Education I.M. Setchenov First Moscow State Medical University of Health Ministry

O. A. Paevskaya

State budget Educational Institution of Higher Professional Education I.M. Setchenov First Moscow State Medical University of Health Ministry

YU. V. Yudina

State budget Educational Institution of Higher Professional Education I.M. Setchenov First Moscow State Medical University of Health Ministry

E. V. Volchkova

State budget Educational Institution of Higher Professional Education I.M. Setchenov First Moscow State Medical University of Health Ministry

S. G. Pak

State budget Educational Institution of Higher Professional Education I.M. Setchenov First Moscow State Medical University of Health Ministry

References

Supplementary files