THE LEVEL OF SPONTANEOUS AND INDUCED Γ-INTERFERON IN FLU AND RESPIRATORY-SYNСITIAL INFECTIONS

Full Text

Актуальность проблемы В организме человека существуют около 20 видов интерферонов. Для удобства изучения интерфероны разделили на 3 группы по их молекулярному действию в зависимости от того, на какие рецепторы воздействует и какие механизмы запускает данный интерферон [1]. В основу классификации положены типы клеток, которые выделяют интерфероны: интерфе-рон-α - ИФН-α (лейкоцитарный, вырабатываемый лейкоцитами); интерферон-β (фибробластный, продуцируемый клетками соединительной ткани фибробластами); интерферон-γ - ИФН-γ (иммунный - вырабатывается лимфоцитами, макрофагами и природными киллерами) [2]. ИФН-α -интерферон, который синтезируется в культуре лейкоцитов, индуцированной вирусом; основные функции: противовирусная активность и активация естественных киллеров. ИФН-γ преимущественно продуцируется иммунологически стимулированной культурой лимфоцитов (Т-лимфоциты); главная функция - иммунорегуляция. Недавно открытый третий тип интерферон-λ является основным в ответе на интраназальное заражение вирусом. Интерфероны всех типов участвуют в многочисленных иммунных взаимодействиях при вирусных инфекциях, играя при этом ключевую роль [3]. Они способствуют как индукции, так и регуляции ответов врожденного и адаптивного противовирусных механизмов, активизируя многочисленные внутренние противовирусные факторы, влияя на активность макрофагов, NK-клеток, дендритных клеток и Т-лимфоцитов путей усиления презентации антигена, клеточной пролиферации и дифференциации, экспрессии профилей, приводя в конечном счете к усилению противовирусных эффекторных функций [4]. В 1986 г. академиком Ф.Н. Елиговым был предложен термин «интерфероновый» статус как интегральный критерий функционального состояния системы интерферона [5]. Роль γ-интерферона в регуляции факторов врожденного иммунного ответа является ключевой в реализации иммунной защиты организма человека от острых вирусных инфекций, таких как грипп и другие ОРВИ. Еще одним очень важным биологическим свойством γ-интерферона является наличие не только опосредованного, но и прямого неспецифического противовирусного действия. Известно, что некоторые вирусы гриппа способны к ингибированию как продукции, так и защитного действия интерферона первого типа [11, 12]. Сбой в системе интерферона, сниженный интерфероногенез свидетельствуют о неблагополучии функционирования организма, хронизации процесса, прогрессировании вирусной инфекции. В отечественных научных исследованиях на протяжении нескольких последних десятков лет показано, что такие состояния с полным или частичным выпадением различных звеньев системы интерферона (α- или γ-интерферона) являются прочной и/или следствием острых и хронически рецидивирующих вирусных инфекций [6-8]. Под влиянием вирусов может происходить повреждение системы интерферонов. Так, J. Schlender и соавт. показали, что респираторно-синцитиальный вирус ингибирует медиированную через Toll-подобные рецепторы 7, 9 продукцию α-интерферона и β-интерферона человеческими плазмоцитоидными дендритными клетками. Исследования И.В. Нестерова и соавт. (2002, 2003, 2005) свидетельствуют о том, что пациенты, страдающие повторными острыми респираторными инфекциями, как дети, так и взрослые, имеют разнообразные нарушения функционирования иммунной системы по типу вторичных иммунодефицитов (ИДС), чаще комбинированного характера, при этом ведущими дефектами являются нарушения в системе интерферона [11]. К настоящему времени хорошо изучены возрастные особенности интерфероновой системы у детей. Установлено, что у детей в возрасте от одного месяца до 3 лет способность к продукции интерферона снижена в 9 раз по сравнению со взрослыми пациентами. У некоторых детей в возрасте от 7 до 18 лет сохраняется незрелость системы интерферона [12]. Известно, что большинство цитокинов в норме отсутствует в сыворотке крови в определяемых количествах у здорового человека. В то же время способность клеток к выработке цитокинов при индукции позволяет составить представление о готовности иммунокомпетентных клеток к полноценному ответу, о наличии дефектов синтеза растворимых факторов, определяющих ход иммунного ответа, активность защиты от инфекций, интенсивность развития воспалительного процесса [13]. В норме у пациентов уровни сывороточного и спонтанного интерферона характеризуются низкими значениями, а индуцированного интерферона - высокими. Многочисленные факты указывают на наличие тесной взаимосвязи между уровнем продукции цитокинов и клиническими характеристиками инфекционного процесса [14]. В доступной литературе и электронных ресурсах отсутствуют сведения об особенностях циркуляции уровня спонтанного и индуцированного γ-интерферона при гриппе и ОРВИ. В этой связи изучение противовирусных эффектов γ-интерферона представляют большой интерес в плане обоснования лечения и профилактики острых респираторных вирусных заболеваний. Цель исследования - изучение изменения уровней спонтанного и индуцированного γ-интерфе-рона при гриппе и респираторно-синцитиальной инфекции в зависимости от этиологии заболевания, возраста пациентов и гендерных факторов. Материалы и методы В исследование включены 64 пациента, проходивших лечение в инфекционном отделении медико-санитарной части (МСЧ) Федерального медико-биологического агентства России г. Заречный Пензенской области в период 2014-2016 гг. Этиология ОРВИ и гриппа была верифицирована путем выявлением РНК и ДНК вирусов в носоглоточном секрете с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени. Забор материала производили в течение первых суток пребывания больного в стационаре. Мазок брали из обоих носовых ходов сухим ватным тампоном с последующим помещением его в пробирку с 0,5-1 мл среды. Для верификации возбудителей ОРВИ в клиническом материале использовали метод ПЦР с гибридизационно-флюоресцентной детекцией набором реагентов «АмплиСенсОРВИ-скрин-FL». Реакцию амплификации проводили при помощи прибора для ПЦР в режиме реального времени ДТ-96 («ДНК-технология», Россия). Исследование проводилось на базе ФГБУЗ ЦГиЭ № 59 ФМБА России. Из числа 64 пациентов больных гриппом А было 17 (27%) человек, 14 (22%) больных гриппом В, в 18 (28%) случаях диагностирована респираторно-синтициальная инфекция (РС-инфекция), в 15 (23%) случаях возбудитель не верифицирован (рис. 1); 43 из 64 пациентов - дети до 14 лет, из них 17 девочек и 26 мальчиков (рис. 2). Больным проводилось комплексное объективное и лабораторно-инструментальное обследование, в том числе общеклинические исследования крови, мочи и рентгенография органов грудной клетки. Кроме того, у данных пациентов был исследован уровень спонтанного и индуцированного γ-интерферона методом иммуноферментного анализа с применением набора реагентов «гамма-Интерферон-ИФА-Бест» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск). Исследование проводилось в ЦНИЛ ПИУВ филиал ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России, Пенза. Учитывая, что референтные значения нормальных показателей для спонтанного γ-интерферона соответствуют 0-30 пг/мл, а для индуцированного - 50-780 пг/мл, забор крови проводили дважды - при поступлении и на 7-10-й день после начала лечения [16]. Лечение пациентов проводилось противовирусными препаратами в соответствии со стандартами медицинской помощи и клиническими рекомендациями. Статистический анализ проводили с помощью программы Statistica 10 Rus (StatSoft Inc. США). Исходные качественные и количественные показатели сравнивали с использованием t-критерия Стьюдента и критерия наименьшей значимой разности (НЗР) Фишера; для определения показателя достоверности р при сравнении признаков в малых группах больных применяли методику В.С. Геннеса. Результаты и обсуждение Методом ПЦР были верифицированы возбудители гриппа А, преимущественно А (Н3N2) и В, РС-вирусной инфекции у 64 пациентов, примерно в равных пропорциях, в 23% случаев возбудитель верифицирован не был (см. рис. 1). В группе обследуемых преобладали дети: 43 ребенка в возрасте от 3 мес до 14 лет, что составило 67% выборки, против 21 (33%) взрослых. Статистически значимых различий по полу среди пациентов не было. Отмечалось незначительное преобладание пациентов мужского пола среди группы с верифицированным диагнозом грипп А. Из табл. 1 видно, что не выявлено достоверных различий в показателях уровней спонтанного γ-интерферона до и после лечения и индуцированного γ-интерферона до и после лечения, но обнаружена достоверная разница (p ˂ 0,001) между показателями спонтанного и индуцированного γ-интерферонов. Однако уровень индуцированного γ-интер-ферона, определенный до лечения, значительно колебался в зависимости от нозологии вирусной инфекции. Так, при гриппе он был достоверно (р < 0,01) выше, чем при респираторно-син-цитиальной инфекции (вне зависимости от типа вируса гриппа). В то же время при гриппе В значения индуцированного γ-интерферона были достоверно (р < 0,03) выше, чем при гриппе А (табл. 2). Статистически значимых различий в уровне средних показателей спонтанного и индуцированного γ-интерферона (как до лечения, так и после лечения) среди пациентов мужского и женского пола выявлено не было (табл. 3). При исследовании спонтанного и индуцированного γ-интерферона у пациентов разных возрастных групп, обнаружено, что у пациентов старше 6 лет уровень индуцированного γ-интерферона был достоверно выше, чем у детей дошкольного возраста (табл. 4, 5). Заключение Результаты представленного исследования свидетельствуют о том, что противовирусная защита с участием γ-интерферона у больных гриппом и РС-инфекцией обеспечивалась преимущественно индуцированным γ-интерфероном, показатели которого значительно превышали уровни спонтанного γ-интерферона. Так, уровень спонтанного γ-интерферона у больных гриппом (А или В) и РС-инфекцией был низким, не зависел от этиологии и периода болезни, возраста пациентов и гендерных факторов. В то же время показатели индуцированного γ-интерферона зависели от этиологии заболевания, возраста пациентов и не зависели от гендерных факторов. Уровень индуцированного γ-интерферона до лечения был выше в 3,27 раза при гриппе В и в 2,32 раза при гриппе А, чем при РС-инфекции (p < 0,05). Уровень индуцированного γ-интерферона у больных гриппом и РС-инфекцией до и после лечения был достоверно выше (в 1,75 раза) у детей школьного возраста и взрослых, чем у дошкольников. Полученные в ходе исследования данные свидетельствуют также о необходимости дальнейшего изучения спонтанного и индуцированного γ-интерферона при гриппе и ОРВИ, в том числе для обоснования подходов к противовирусной терапии и целесообразности иммунокоррекции.

About the authors

Irina P. Baranova

Penza Advanced Training Institute for Doctors, branch of the Russian Medical Academy for continuing professional education

Email: irinapetrovna.baranova@yandex.ru
MD, PhD, DSci., Professor, Merited doctor of the Russian Federation, head of the Department of infectious diseases of the Penza Advanced Training Institute for Doctors, branch of the Russian Medical Academy for continuing professional education, 8А, Stasova str., Penza, 440066, Russian Federation 8А, Stasova str., Penza, 440066, Russian Federation

I. A Malova

Medical Sanitary unit No. 59 of the Federal Medical-Biological Agency

Email: infekz@msch59.ru
8, Sportivnaya str., settlement of Zarechny, 442960, Russian Federation

References

Supplementary files