Prevalence rate and prognostic value of the IL-28 gene polymorphism in hepatitis C patients in the Krasnodar territory

Full Text

Гепатит С входит в число социально значимых заболеваний и оказывается одной из основных причин хронической болезни печени. По оценкам ВОЗ, в мире 170 млн людей (3% населения) инфицированы вирусом гепатита С (ВГС) [1]. На территории Краснодарского края выявлено значительное разнообразие циркулирующих генотипов вируса гепатита С: 1а, 1в, 2, 3 а. В популяции больных превалируют генотипы 1в (48%) и 3 а (38%) [2, 3], что в целом отражает пейзаж инфекции европейской части России. Таблица 1 Исходные данные пациентов, получавших лечение гепатита С по двойной и тройной схеме Число Пол и возраст Генотип СС + ТТ, % Схема лечения больных мужчины средний возраст женщины средний возраст АЛТ, ед/л AST, ед/л ВН, МЕ/мл ИФН/рибавирин ИФН альфа^ - 95% ИФН альфа^ - 5% 20 12 37,08±3,19 8 49,88±4,34 102,5±18,98 68,95±11,92 4,3 • 105±1,4 • 105 75 ПЭГ-ИФН/рибавирин ПЭГ-ИФН-альфа2а - 38,2% ПЭГ-ИФН-альфа^ - 39,7% ЦеПЭГ-ИФН-альфа2b - 22,1% 68 41 42,41±1,58 27 39,54±2,41 102,32±8,39 69,59±6,03 9,2 • 105±3,6 • 105 44 ПЭГ-ИФН/рибавирин/инги- 16 11 40,82±3,66 5 32,5±5,07 115,69±16,03 76,94±10,36 8,2 • 105±2,1 • 105 0 битор протеазы Телапревир - 31,3% Боцапревир - 12,5% Симепревир - 56,3% ORIGINAL INVESTIGATIONS В противовирусной терапии (ПВТ) пациентов с хроническим гепатитом С (ХГС) важен учет предикторов эффективности лечения, особенно при 1 генотипе HCV, учитывая его большую устойчивость к терапии интерфероном и рибавирином. В последние годы появился прогностически значимый маркер результативности ПВТ у больных ХГС с генотипом 1 - генотип по полиморфизму единичных нуклеотидов (ПЕН) гена IL-28B в ло- кусе rs12979860 и локусе rs8099917. В основе полиморфизма гена IL-28B, который в известной степени определяет чувствительность иммунной системы к стимуляции интерфероном (ИФН), лежат две однонуклеотидные замены в 19-й хромосоме: замена цитозина на тимин (С > Т) в локусе rs12979860 и замена тимина на гуанин (Т > G) в локусе rs8099917 [4]. Исходя из комбинации аллелей, возможны три генотипических варианта полиморфизма гена IL-28B по локусу rs12979860: СС, СТ и ТТ. Аллель rs12979860 С является мажорным, т. е. встречается чаще, а аллель rs12979860 Т - минорным, встречается реже. Возможные генотипы ПЕН этого же гена по локусу rs8099917 - ТТ, Gr и GG. Аллель Т - мажорный (генотип ТТ может определять спонтанное разрешение инфекции), аллель G - минорный аллель риска низкого ответа на ПВТ пегилированным ИФН (ПЕГ-ИФН) с ри- бавирином. В настоящее время генотип СС (полиморфизм rs12979860) ассоциируется с высокой частотой спонтанного клиренса HCV при остром гепатите С [5], положительным ответом на ПВТ при двойной терапии ПЕГ-ИНФ/рибавирин. Показана также положительная прогностическая значимость вышеуказанного генотипа и генотипа ТТ (полиморфизм rs8099917) при тройной терапии с включением ингибиторов протеазы 1-го поколения у первичных больных ХГС с генотипом 1 [6]. Изучение распространения генетических вариантов полиморфизма гена IL-28B в различных регионах страны актуально, также как сопоставление их с результатами разных схем терапии. Цель настоящего исследования - изучение распространения генотипов полиморфизма гена Il-28b по локусам rs12979860 и rs8099917 среди больных хроническим гепатитом С в Краснодарском крае для прогноза эффективности различных схем противовирусной терапии. Материалы и методы Проведено определение полиморфизма единичных нуклеотидов (ПЕН) в локусах rs8099917 и rs12979860 гена IL-28B у 833 пациентов с ХГС генотипом 1 в возрасте от 18 до 73 лет, обследованных в течение 2014-2015 гг. в микробиологической лаборатории ГБУЗ СКИБ; из них у 260 при различных генотипических вариантах гена IL-28B определена вирусная нагрузка (ВН). Для генотипирования IL-28B применен метод аллель- специфической ПЦР на тест-системе АмплиСенс Геноскрин IL-28B-FL и в амплификаторе ROTOR- GENE Q в режиме реального времени. С учетом наличия нескольких маркеров, расположенных в регуляторной области гена IL-28B и определяющих характер его работы, исследование маркера rs12979860 проведено в комплексе с маркером rs 8099917. Сочетания генотипических вариантов ПЕН IL- 28В сопоставлены с частотой достижения РВО и УВО при двухкомпонентной противовирусной терапии ИФН/рибавирин (20 человек) и ПЕГ-ИФН/ рибавирин (68 человек), а также тройной терапии: ПЕГ-ИФН/рибавирин/ингибиторы протеазы 1-го и 2-го поколения (16 человек). Исходные характеристики больных представлены в табл. 1. Стандартные ИФН (ИФН альфа-2Ь и ИФН альфа^) назначались в дозе 5 млн ЕД первые 10 дней ежедневно, затем через день в/м, ПЕГ- ИФН альфа-2а (Пегасис) - 180 мкг/нед, ПЕГ-ИФН альфа-2в (Пегинтрон) и ЦеПЕГ-ИФН альфа-2в (Альгерон) - 1,5 мкг/кг/нед п/к, рибавирин - 13,615 мг/кг ежедневно внутрь в 2 приема. Длительность терапии составила 48 нед. При использовании тройной схемы лечения боцапревир назначался по 800 мг 3 раза в день вместе с ПЕГ-ИФН/ рибавирином в течение 44 нед после 4-недельного вводного периода приема только ПЕГ-ИФН/риба- вирином; телапревир - по 750 мг 3 раза в день в сочетании с ПЕГ-ИФН/рибавирином в течение 12 нед с продолжением терапии без телапревира до 48 нед; симепревир - по 150 мг/сут в сочетании с ПЕГ-ИФН/рибавирином в течение 12 нед с последующим продолжением ПВТ без симепревира до 24 нед. Оценивалась частота быстрого (через 4 нед терапии), раннего (через 12 нед) и устойчивого (через 24 нед после прекращения ПВТ) вирусологического ответа (БВО, РВО, УВО соответственно). Поскольку у части больных на момент оценки терапия продолжалась, процент УВО оценивали по отношению к числу закончивших терапию пациентов. Результаты и обсуждение При исследовании вариантов генотипов ло- куса rs12979860 гена IL-28B протективные гомозиготы по аллелю С (СС) выявлены у 27,7% обследованных (231 человек), встречаемость неблагоприятного аллеля риска Т в гомозиготах ТТ составила 13,9%, а аллеля риска Т в гетерозиготах СТ - 58,3% (табл. 2). В общей сложности однонуклеотидная замена (ПЕН) на минорный Т по локусу rs12979860 отмечена у 72,3% пациентов, что определяет такую же частоту потенциального риска неблагоприятного ответа на ПВТ интерфе- ронами с рибавирином у больных ХГС. Таблица 2 Исходные данные пациентов, получавших лечение гепатита С по двойной и тройной схеме ПЕН Генотип Больные ХГС число % rs 12979860 CC 231 27,7 СТ 486 58,3 TT 116 13,9 rs 8099917 TT 445 53,4 GT 343 41,2 GG 45 5,4 27,1 26,3 ш В В 1 1 н 1 ш 40 30 20 10 0 32 8,5 5,4 0,6 оригинальные исследования Сочетание генетических полиморфизмов IL28B Рис. 1. Частота встречаемости различных сочетаний генетических полиморфизмов ГЬ-28В по локусам rs 12979860 и rs 8099917 среди пациентов с гепатитом С (n =833) на территории Краснодарского края. Анализ однонуклеотидной замены (ПЕН) в гене ГЬ-28В rs8099917 выявил гомозиготы по про- тективному аллелю ТТ у 53,4% пациентов, однонуклеотидная замена Т на минорный G отмечена у 388 человек, что составило 46,6%, генотип риска GТ определен у 41,2% обследованных, неблагоприятные гомозиготы GG - у 5,4% (см. табл. 2). При комплексном одновременном исследовании генотипических вариантов ГЬ-28В сочетание благоприятных протективных аллелей СС по ло- кусу rs12979860 и ТТ по локусу rs 8099917 (СС + ТТ) зарегистрировано у 27,1% больных, на этом же уровне (26,3%) наблюдалось сочетание протек- тивного аллеля ТТ rs8099917 и менее благоприятного аллеля риска Т в гетерозиготах СТ rs12979860 (СТ + ТТ). Наиболее частым, отмеченным у 267 (32%) больных ХГС, оказалось неблагоприятное сочетание минорного аллеля Т в гетерозиготах СТ rs12979860 с аллелем риска G в гетерозиготах G1 rs 8099917 (СТ + G^. Распределение остальных комбинаций минорных аллелей в гомо- и гетерозиготах (ТТ + GX ТТ + GG и СС + G^ составило по 8,5; 5,4 и 0,6% соответственно (рис. 1). Сопоставление количественной вирусной нагрузки, определенной у 260 человек, выявило достоверно более высокую (р < 0,05) вирусную нагрузку у пациентов с протективными аллелями СС + ТТ по сравнению с группой больных с неблагоприятными гомозиготами ТТ + GG (табл. 3). Существенной разницы между сочетанием протективных генотипов СС + ТТ и большинством остальных, менее благоприятных в плане прогноза, ПВТ генотипов не установлено. В группе пациентов, получавших терапию стандартными ИФН с рибавирином, сочетание протективных аллелей СС + ТТ отмечено у 15 (75%). Устойчивый вирусологический ответ (УВО) во всей группе достигнут у 83,3% завершивших терапию, в группе с протективными аллелями СС + ТТ - у 84,6% с получением раннего ВО у всех больных (рис. 2). В общей группе леченых ПЭГ-ИФН/рибавири- ном с преобладанием (56%) потенциально неблагоприятных генотипов полиморфизма ГГ-28В, быстрый, ранний и УВО отмечены у 53,2; 86,9 и 66% соответственно, против 65,4; 100 и 89,4% в группе лиц с протективными аллелями СС + ТТ и 52,8; 75 и 50% - у лиц с отсутствием аллелей СС + ТТ (рис. 3) . При сочетании гетерозигот СТ + GТ частота УВО снижена до 33,3%, при комбинации гетерозигот по rs12979860 с протективным аллелем ТТ по локусу rs8099917 (СТ + ТТ) УВО отмечен у 50% закончивших терапию (рис. 4). Тройная терапия ПЕГ-ИФН/рибавирин в соче- 100 100 Таблица 3 Вирусная нагрузка HCV при различных сочетаниях генотипов IL-28B у пациентов с гепатитом С Сочетание генотипов IL-28B по локусам Число больных Вирусная нагрузка, МЕ/мл rs 12979860 rs 8099917 СС TT 63 7,2 ■ 105±1,2 ■ 105* CT TT 69 1,4 ■ 106±5,5 ■ 105 TT TT 10 4,6 ■ 105±2,3 ■ 105 CT GT 72 5,5 ■ 105±1,4 ■ 105 TT GT 31 7,2 ■ 105±2,9 ■ 105 TT GG 15 2,9 ■ 105±1,2 ■ 105 Примечание. * -р > 0,05 между сочетаниями генотипов СС + ТТ и ТТ + GG. 100-, 806040200- . . (СС+ТТ)+(не СС+ТТ) сс+тт Ш бво Ц рво ш уво Рис. 2. Частота быстрого (БВО), раннего (РВО) и устойчивого (УВО) вирусологического ответа при терапии пациентов с гепатитом С стандартными ИФН с рибавирином (генотип СС + ТТ у 75% больных). ORIGINAL INVESTIGATIONS (СС+ТТ)+(не CC+TT) CC+TT не CC+TT Щ БВО Щ РВО Ц УВО Рис. 3. Частота быстрого (БВО), раннего (РВО) и устойчивого (УВО) вирусологического ответа при терапии ПЕГ-ИФН с рибавирином у пациентов с гепатитом С при разных аллельных вариантах rs12979860 и rs8099917 гена IL-28B (генотип СС + ТТ у 44%). тании с ингибиторами протеазы 1-го и 2-го поколения при отсутствии благоприятных аллелей гена IL-28B позволила добиться РВО у всех больных, УВО - у 85,7% пациентов (отсутствие УВО у двух пациентов с генотипами IL-28B СТ + GX) (рис. 5). Таким образом, на территории Краснодарского края у больных ХГС с генотипом 1 преобладает потенциально неблагоприятный по прогнозу двойной ПВТ гетерозиготный вариант ПЕН rs12979860 IL-28B СТ. Выявляемость протективного аллеля СС у пациентов с ХГС существенно (в 2,1 раза) реже. Это согласуется с данными авторов, изучавших распространенность генотипов IL-28B у больных ХГС на территориях с преобладанием европеоидной расы [7, 8]. Преобладание гетерозиготного варианта СТ связывают с большей вероятностью спонтанной элиминации ВГС в когорте лиц с генотипом СС в данном ПЕН [8]. В локусе rs8099917 доминирует благоприятный генотип ТТ, незначительно превышающий частоту гетерозиготного варианта частота встречаемости неблагоприятных гомозигот по обеим локусам гена IL-28B незначительна. Частота сочетаний различных полиморфизмов (протективных СС + ТТ, ме- % (TT+GT)+(TT+TT)+ CT+TT CT+GT (TT+GG) Щ БВО Щ РВО и УВО Рис. 4. Частота быстрого (БВО), раннего (РВО) и устойчивого (УВО) вирусологического ответа у пациентов с гепатитом С при терапии ПЕГ-ИФН с рибавирином и наличии неблагоприятных генотипических вариантов IL-28B. % 100-, 806040200- Рис. 5. Частота быстрого (БВО), раннего (РВО) и устойчивого (УВО) вирусологического ответа у пациентов с гепатитом С при тройной терапии и наличии неблагоприятных генотипических вариантов гена IL-28B (генотип СС + ТТ - 0%). нее благоприятных СТ + ТТ, наиболее прогностически негативных СТ + GX) по двум локусам гена IL-28B примерно одинакова - от 26,3 до 32%. Изучение распределения генотипов ПЕН гена IL-28B и их сочетаний у пациентов с ХГС на территории края позволило рационально оценить потребность данной когорты в различных, в том числе дорогостоящих безинтерфероновых, схемах ПВТ. Анализ эффективности ПВТ с учетом генотипических вариантов по двум исследуемым локусам rs12979860 и rs8099917 у больных ХГС показал протективную значимость сочетания генотипов СС + ТТ с достижением РВО у 100% и УВО у 8984,9% пациентов. Эти результаты двойной схемы ПВТ у больных с сочетанием протективных аллелей при применении комбинации не только ПЕГ- ИФН, но и стандартных ИФН с рибавирином, могут конкурировать с эффективностью более дорогостоящих схем тройной и безинтерфероновой терапии. Сочетание неблагоприятных аллелей гена IL-28B существенно (до 50%) снижает эффективность ПВТ ПЕГ-ИФН/рибавирином; наиболее высокий удельный вес в этом процессе занимает сочетание гетерозигот СТ + ОТ, где УВО не превысил 33,3%. Тройная терапия ПЕГ-ИФН/рибавирином/ ингибиторы протеазы 1-го и 2-го поколения нивелирует значимость сочетания неблагоприятных генотипов ПЕН гена IL-28B, позволяя добиться РВО у всех больных, УВО у 85,7% пациентов. Рациональный подход к терапии лиц с ХГС позволяет избежать дополнительных финансовых затрат на тройную и безинтерфероновую терапию у пациентов с сочетанием протективных аллелей СС + ТТ по rs12979860 и rs8099917 гена IL-28B и изначально планировать ее при сочетании генотипов не-СС + ТТ и особенно гетерозигот СТ + GX Выводы 1. На территории Краснодарского края у больных ХГС генотипом 1 существенно реже (27,7% против 58,3%) встречаются протективные гомозиготы по аллелю С (СС) по сравнению с аллелем риска Т в гетерозиготах СТ по локусу rs12979860 оригинальные исследования ПЕН гена ГЬ-28В. В локусе rs8099917 гена ГЬ-28В гомозиготы по протективному аллелю ТТ выявляют у 53,4%, генотип риска GТ - у 41,2% обследованных пациентов. У лиц с протективными аллелями СС + ТТ отмечают достоверно более высокую вирусную нагрузку по сравнению с группой больных с неблагоприятными гомозиготами ТТ + GG. 2. Комплексное одновременное исследование генотипических вариантов ГЬ-28В по двум локусам rs12979860 и rs8099917 позволяет определить частоту встречаемости их благоприятных и потенциально неблагоприятных для исхода ПВТ сочетаний, что повышает диагностическую и прогностическую ценность метода. 3. В выборе схем терапии больных ХГС генотипом 1 целесообразен дифференцированный подход с учетом благоприятных и неблагоприятных сочетаний генотипических вариантов гена ГЬ-28В по rs12979860 и rs8099917. У пациентов с наличием по указанным локусам протективных аллелей СС + ТТ двойная терапия комбинацией пегилиро- ванных, а также стандартных ИФН с рибавирином высокоэффективна и может быть предпочтительной; при сочетании неблагоприятных гетерозигот (особенно СТ + ОТ) гена ГЬ-28В целесообразно применение тройной терапии ПЕГ-ИФН/рибави- рином/ингибиторы протеазы 1-го и 2-го поколения либо схем с безинтерфероновыми противовирусными препаратами. Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки. Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

About the authors

T. M Morenets

Kuban State Medical University

204, Sedina str., Krasnodar, 350063, Russian Federation

T. A Knizhnik

Specialized Clinical Hospital of Infectious Diseases

204, Sedina str., Krasnodar, 350015, Russian Federation

G. A Eremina

Specialized Clinical Hospital of Infectious Diseases

204, Sedina str., Krasnodar, 350015, Russian Federation

V. N Gorodin

Kuban State Medical University; Specialized Clinical Hospital of Infectious Diseases

204, Sedina str., Krasnodar, 350063, Russian Federation

Marina G. Avdeeva

Kuban State Medical University

Email: avdeevam@mail.ru
MD, PhD, DSci., professor, head of the Department of infectious diseases and phthisiopulmonology, Kuban State Medical University 204, Sedina str., Krasnodar, 350063, Russian Federation

References

Supplementary files