Распространенность и прогностическое значение полиморфизма гена IL-28B у пациентов с гепатитом C в Краснодарском крае

Полный текст

Гепатит С входит в число социально значимых заболеваний и оказывается одной из основных причин хронической болезни печени. По оценкам ВОЗ, в мире 170 млн людей (3% населения) инфицированы вирусом гепатита С (ВГС) [1]. На территории Краснодарского края выявлено значительное разнообразие циркулирующих генотипов вируса гепатита С: 1а, 1в, 2, 3 а. В популяции больных превалируют генотипы 1в (48%) и 3 а (38%) [2, 3], что в целом отражает пейзаж инфекции европейской части России. Таблица 1 Исходные данные пациентов, получавших лечение гепатита С по двойной и тройной схеме Число Пол и возраст Генотип СС + ТТ, % Схема лечения больных мужчины средний возраст женщины средний возраст АЛТ, ед/л AST, ед/л ВН, МЕ/мл ИФН/рибавирин ИФН альфа^ - 95% ИФН альфа^ - 5% 20 12 37,08±3,19 8 49,88±4,34 102,5±18,98 68,95±11,92 4,3 • 105±1,4 • 105 75 ПЭГ-ИФН/рибавирин ПЭГ-ИФН-альфа2а - 38,2% ПЭГ-ИФН-альфа^ - 39,7% ЦеПЭГ-ИФН-альфа2b - 22,1% 68 41 42,41±1,58 27 39,54±2,41 102,32±8,39 69,59±6,03 9,2 • 105±3,6 • 105 44 ПЭГ-ИФН/рибавирин/инги- 16 11 40,82±3,66 5 32,5±5,07 115,69±16,03 76,94±10,36 8,2 • 105±2,1 • 105 0 битор протеазы Телапревир - 31,3% Боцапревир - 12,5% Симепревир - 56,3% ORIGINAL INVESTIGATIONS В противовирусной терапии (ПВТ) пациентов с хроническим гепатитом С (ХГС) важен учет предикторов эффективности лечения, особенно при 1 генотипе HCV, учитывая его большую устойчивость к терапии интерфероном и рибавирином. В последние годы появился прогностически значимый маркер результативности ПВТ у больных ХГС с генотипом 1 - генотип по полиморфизму единичных нуклеотидов (ПЕН) гена IL-28B в ло- кусе rs12979860 и локусе rs8099917. В основе полиморфизма гена IL-28B, который в известной степени определяет чувствительность иммунной системы к стимуляции интерфероном (ИФН), лежат две однонуклеотидные замены в 19-й хромосоме: замена цитозина на тимин (С > Т) в локусе rs12979860 и замена тимина на гуанин (Т > G) в локусе rs8099917 [4]. Исходя из комбинации аллелей, возможны три генотипических варианта полиморфизма гена IL-28B по локусу rs12979860: СС, СТ и ТТ. Аллель rs12979860 С является мажорным, т. е. встречается чаще, а аллель rs12979860 Т - минорным, встречается реже. Возможные генотипы ПЕН этого же гена по локусу rs8099917 - ТТ, Gr и GG. Аллель Т - мажорный (генотип ТТ может определять спонтанное разрешение инфекции), аллель G - минорный аллель риска низкого ответа на ПВТ пегилированным ИФН (ПЕГ-ИФН) с ри- бавирином. В настоящее время генотип СС (полиморфизм rs12979860) ассоциируется с высокой частотой спонтанного клиренса HCV при остром гепатите С [5], положительным ответом на ПВТ при двойной терапии ПЕГ-ИНФ/рибавирин. Показана также положительная прогностическая значимость вышеуказанного генотипа и генотипа ТТ (полиморфизм rs8099917) при тройной терапии с включением ингибиторов протеазы 1-го поколения у первичных больных ХГС с генотипом 1 [6]. Изучение распространения генетических вариантов полиморфизма гена IL-28B в различных регионах страны актуально, также как сопоставление их с результатами разных схем терапии. Цель настоящего исследования - изучение распространения генотипов полиморфизма гена Il-28b по локусам rs12979860 и rs8099917 среди больных хроническим гепатитом С в Краснодарском крае для прогноза эффективности различных схем противовирусной терапии. Материалы и методы Проведено определение полиморфизма единичных нуклеотидов (ПЕН) в локусах rs8099917 и rs12979860 гена IL-28B у 833 пациентов с ХГС генотипом 1 в возрасте от 18 до 73 лет, обследованных в течение 2014-2015 гг. в микробиологической лаборатории ГБУЗ СКИБ; из них у 260 при различных генотипических вариантах гена IL-28B определена вирусная нагрузка (ВН). Для генотипирования IL-28B применен метод аллель- специфической ПЦР на тест-системе АмплиСенс Геноскрин IL-28B-FL и в амплификаторе ROTOR- GENE Q в режиме реального времени. С учетом наличия нескольких маркеров, расположенных в регуляторной области гена IL-28B и определяющих характер его работы, исследование маркера rs12979860 проведено в комплексе с маркером rs 8099917. Сочетания генотипических вариантов ПЕН IL- 28В сопоставлены с частотой достижения РВО и УВО при двухкомпонентной противовирусной терапии ИФН/рибавирин (20 человек) и ПЕГ-ИФН/ рибавирин (68 человек), а также тройной терапии: ПЕГ-ИФН/рибавирин/ингибиторы протеазы 1-го и 2-го поколения (16 человек). Исходные характеристики больных представлены в табл. 1. Стандартные ИФН (ИФН альфа-2Ь и ИФН альфа^) назначались в дозе 5 млн ЕД первые 10 дней ежедневно, затем через день в/м, ПЕГ- ИФН альфа-2а (Пегасис) - 180 мкг/нед, ПЕГ-ИФН альфа-2в (Пегинтрон) и ЦеПЕГ-ИФН альфа-2в (Альгерон) - 1,5 мкг/кг/нед п/к, рибавирин - 13,615 мг/кг ежедневно внутрь в 2 приема. Длительность терапии составила 48 нед. При использовании тройной схемы лечения боцапревир назначался по 800 мг 3 раза в день вместе с ПЕГ-ИФН/ рибавирином в течение 44 нед после 4-недельного вводного периода приема только ПЕГ-ИФН/риба- вирином; телапревир - по 750 мг 3 раза в день в сочетании с ПЕГ-ИФН/рибавирином в течение 12 нед с продолжением терапии без телапревира до 48 нед; симепревир - по 150 мг/сут в сочетании с ПЕГ-ИФН/рибавирином в течение 12 нед с последующим продолжением ПВТ без симепревира до 24 нед. Оценивалась частота быстрого (через 4 нед терапии), раннего (через 12 нед) и устойчивого (через 24 нед после прекращения ПВТ) вирусологического ответа (БВО, РВО, УВО соответственно). Поскольку у части больных на момент оценки терапия продолжалась, процент УВО оценивали по отношению к числу закончивших терапию пациентов. Результаты и обсуждение При исследовании вариантов генотипов ло- куса rs12979860 гена IL-28B протективные гомозиготы по аллелю С (СС) выявлены у 27,7% обследованных (231 человек), встречаемость неблагоприятного аллеля риска Т в гомозиготах ТТ составила 13,9%, а аллеля риска Т в гетерозиготах СТ - 58,3% (табл. 2). В общей сложности однонуклеотидная замена (ПЕН) на минорный Т по локусу rs12979860 отмечена у 72,3% пациентов, что определяет такую же частоту потенциального риска неблагоприятного ответа на ПВТ интерфе- ронами с рибавирином у больных ХГС. Таблица 2 Исходные данные пациентов, получавших лечение гепатита С по двойной и тройной схеме ПЕН Генотип Больные ХГС число % rs 12979860 CC 231 27,7 СТ 486 58,3 TT 116 13,9 rs 8099917 TT 445 53,4 GT 343 41,2 GG 45 5,4 27,1 26,3 ш В В 1 1 н 1 ш 40 30 20 10 0 32 8,5 5,4 0,6 оригинальные исследования Сочетание генетических полиморфизмов IL28B Рис. 1. Частота встречаемости различных сочетаний генетических полиморфизмов ГЬ-28В по локусам rs 12979860 и rs 8099917 среди пациентов с гепатитом С (n =833) на территории Краснодарского края. Анализ однонуклеотидной замены (ПЕН) в гене ГЬ-28В rs8099917 выявил гомозиготы по про- тективному аллелю ТТ у 53,4% пациентов, однонуклеотидная замена Т на минорный G отмечена у 388 человек, что составило 46,6%, генотип риска GТ определен у 41,2% обследованных, неблагоприятные гомозиготы GG - у 5,4% (см. табл. 2). При комплексном одновременном исследовании генотипических вариантов ГЬ-28В сочетание благоприятных протективных аллелей СС по ло- кусу rs12979860 и ТТ по локусу rs 8099917 (СС + ТТ) зарегистрировано у 27,1% больных, на этом же уровне (26,3%) наблюдалось сочетание протек- тивного аллеля ТТ rs8099917 и менее благоприятного аллеля риска Т в гетерозиготах СТ rs12979860 (СТ + ТТ). Наиболее частым, отмеченным у 267 (32%) больных ХГС, оказалось неблагоприятное сочетание минорного аллеля Т в гетерозиготах СТ rs12979860 с аллелем риска G в гетерозиготах G1 rs 8099917 (СТ + G^. Распределение остальных комбинаций минорных аллелей в гомо- и гетерозиготах (ТТ + GX ТТ + GG и СС + G^ составило по 8,5; 5,4 и 0,6% соответственно (рис. 1). Сопоставление количественной вирусной нагрузки, определенной у 260 человек, выявило достоверно более высокую (р < 0,05) вирусную нагрузку у пациентов с протективными аллелями СС + ТТ по сравнению с группой больных с неблагоприятными гомозиготами ТТ + GG (табл. 3). Существенной разницы между сочетанием протективных генотипов СС + ТТ и большинством остальных, менее благоприятных в плане прогноза, ПВТ генотипов не установлено. В группе пациентов, получавших терапию стандартными ИФН с рибавирином, сочетание протективных аллелей СС + ТТ отмечено у 15 (75%). Устойчивый вирусологический ответ (УВО) во всей группе достигнут у 83,3% завершивших терапию, в группе с протективными аллелями СС + ТТ - у 84,6% с получением раннего ВО у всех больных (рис. 2). В общей группе леченых ПЭГ-ИФН/рибавири- ном с преобладанием (56%) потенциально неблагоприятных генотипов полиморфизма ГГ-28В, быстрый, ранний и УВО отмечены у 53,2; 86,9 и 66% соответственно, против 65,4; 100 и 89,4% в группе лиц с протективными аллелями СС + ТТ и 52,8; 75 и 50% - у лиц с отсутствием аллелей СС + ТТ (рис. 3) . При сочетании гетерозигот СТ + GТ частота УВО снижена до 33,3%, при комбинации гетерозигот по rs12979860 с протективным аллелем ТТ по локусу rs8099917 (СТ + ТТ) УВО отмечен у 50% закончивших терапию (рис. 4). Тройная терапия ПЕГ-ИФН/рибавирин в соче- 100 100 Таблица 3 Вирусная нагрузка HCV при различных сочетаниях генотипов IL-28B у пациентов с гепатитом С Сочетание генотипов IL-28B по локусам Число больных Вирусная нагрузка, МЕ/мл rs 12979860 rs 8099917 СС TT 63 7,2 ■ 105±1,2 ■ 105* CT TT 69 1,4 ■ 106±5,5 ■ 105 TT TT 10 4,6 ■ 105±2,3 ■ 105 CT GT 72 5,5 ■ 105±1,4 ■ 105 TT GT 31 7,2 ■ 105±2,9 ■ 105 TT GG 15 2,9 ■ 105±1,2 ■ 105 Примечание. * -р > 0,05 между сочетаниями генотипов СС + ТТ и ТТ + GG. 100-, 806040200- . . (СС+ТТ)+(не СС+ТТ) сс+тт Ш бво Ц рво ш уво Рис. 2. Частота быстрого (БВО), раннего (РВО) и устойчивого (УВО) вирусологического ответа при терапии пациентов с гепатитом С стандартными ИФН с рибавирином (генотип СС + ТТ у 75% больных). ORIGINAL INVESTIGATIONS (СС+ТТ)+(не CC+TT) CC+TT не CC+TT Щ БВО Щ РВО Ц УВО Рис. 3. Частота быстрого (БВО), раннего (РВО) и устойчивого (УВО) вирусологического ответа при терапии ПЕГ-ИФН с рибавирином у пациентов с гепатитом С при разных аллельных вариантах rs12979860 и rs8099917 гена IL-28B (генотип СС + ТТ у 44%). тании с ингибиторами протеазы 1-го и 2-го поколения при отсутствии благоприятных аллелей гена IL-28B позволила добиться РВО у всех больных, УВО - у 85,7% пациентов (отсутствие УВО у двух пациентов с генотипами IL-28B СТ + GX) (рис. 5). Таким образом, на территории Краснодарского края у больных ХГС с генотипом 1 преобладает потенциально неблагоприятный по прогнозу двойной ПВТ гетерозиготный вариант ПЕН rs12979860 IL-28B СТ. Выявляемость протективного аллеля СС у пациентов с ХГС существенно (в 2,1 раза) реже. Это согласуется с данными авторов, изучавших распространенность генотипов IL-28B у больных ХГС на территориях с преобладанием европеоидной расы [7, 8]. Преобладание гетерозиготного варианта СТ связывают с большей вероятностью спонтанной элиминации ВГС в когорте лиц с генотипом СС в данном ПЕН [8]. В локусе rs8099917 доминирует благоприятный генотип ТТ, незначительно превышающий частоту гетерозиготного варианта частота встречаемости неблагоприятных гомозигот по обеим локусам гена IL-28B незначительна. Частота сочетаний различных полиморфизмов (протективных СС + ТТ, ме- % (TT+GT)+(TT+TT)+ CT+TT CT+GT (TT+GG) Щ БВО Щ РВО и УВО Рис. 4. Частота быстрого (БВО), раннего (РВО) и устойчивого (УВО) вирусологического ответа у пациентов с гепатитом С при терапии ПЕГ-ИФН с рибавирином и наличии неблагоприятных генотипических вариантов IL-28B. % 100-, 806040200- Рис. 5. Частота быстрого (БВО), раннего (РВО) и устойчивого (УВО) вирусологического ответа у пациентов с гепатитом С при тройной терапии и наличии неблагоприятных генотипических вариантов гена IL-28B (генотип СС + ТТ - 0%). нее благоприятных СТ + ТТ, наиболее прогностически негативных СТ + GX) по двум локусам гена IL-28B примерно одинакова - от 26,3 до 32%. Изучение распределения генотипов ПЕН гена IL-28B и их сочетаний у пациентов с ХГС на территории края позволило рационально оценить потребность данной когорты в различных, в том числе дорогостоящих безинтерфероновых, схемах ПВТ. Анализ эффективности ПВТ с учетом генотипических вариантов по двум исследуемым локусам rs12979860 и rs8099917 у больных ХГС показал протективную значимость сочетания генотипов СС + ТТ с достижением РВО у 100% и УВО у 8984,9% пациентов. Эти результаты двойной схемы ПВТ у больных с сочетанием протективных аллелей при применении комбинации не только ПЕГ- ИФН, но и стандартных ИФН с рибавирином, могут конкурировать с эффективностью более дорогостоящих схем тройной и безинтерфероновой терапии. Сочетание неблагоприятных аллелей гена IL-28B существенно (до 50%) снижает эффективность ПВТ ПЕГ-ИФН/рибавирином; наиболее высокий удельный вес в этом процессе занимает сочетание гетерозигот СТ + ОТ, где УВО не превысил 33,3%. Тройная терапия ПЕГ-ИФН/рибавирином/ ингибиторы протеазы 1-го и 2-го поколения нивелирует значимость сочетания неблагоприятных генотипов ПЕН гена IL-28B, позволяя добиться РВО у всех больных, УВО у 85,7% пациентов. Рациональный подход к терапии лиц с ХГС позволяет избежать дополнительных финансовых затрат на тройную и безинтерфероновую терапию у пациентов с сочетанием протективных аллелей СС + ТТ по rs12979860 и rs8099917 гена IL-28B и изначально планировать ее при сочетании генотипов не-СС + ТТ и особенно гетерозигот СТ + GX Выводы 1. На территории Краснодарского края у больных ХГС генотипом 1 существенно реже (27,7% против 58,3%) встречаются протективные гомозиготы по аллелю С (СС) по сравнению с аллелем риска Т в гетерозиготах СТ по локусу rs12979860 оригинальные исследования ПЕН гена ГЬ-28В. В локусе rs8099917 гена ГЬ-28В гомозиготы по протективному аллелю ТТ выявляют у 53,4%, генотип риска GТ - у 41,2% обследованных пациентов. У лиц с протективными аллелями СС + ТТ отмечают достоверно более высокую вирусную нагрузку по сравнению с группой больных с неблагоприятными гомозиготами ТТ + GG. 2. Комплексное одновременное исследование генотипических вариантов ГЬ-28В по двум локусам rs12979860 и rs8099917 позволяет определить частоту встречаемости их благоприятных и потенциально неблагоприятных для исхода ПВТ сочетаний, что повышает диагностическую и прогностическую ценность метода. 3. В выборе схем терапии больных ХГС генотипом 1 целесообразен дифференцированный подход с учетом благоприятных и неблагоприятных сочетаний генотипических вариантов гена ГЬ-28В по rs12979860 и rs8099917. У пациентов с наличием по указанным локусам протективных аллелей СС + ТТ двойная терапия комбинацией пегилиро- ванных, а также стандартных ИФН с рибавирином высокоэффективна и может быть предпочтительной; при сочетании неблагоприятных гетерозигот (особенно СТ + ОТ) гена ГЬ-28В целесообразно применение тройной терапии ПЕГ-ИФН/рибави- рином/ингибиторы протеазы 1-го и 2-го поколения либо схем с безинтерфероновыми противовирусными препаратами. Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки. Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Об авторах

Татьяна Михайловна Моренец

ФГБОУ ВО «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

доцент каф. инфекционных болезней и эпидемиологии ФПК и ППС ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России, канд. мед. наук 350015, Россия, г. Краснодар, ул. Седина, 204

Татьяна Александровна Книжник

ГБУЗ «Специализированная клиническая инфекционная больница» Министерства здравоохранения Краснодарского края

врач-бактериолог микробиологической лаб. ГБУЗ СКИБ МЗ КК 350015, Россия, г. Краснодар

Галина Анатольевна Еремина

ГБУЗ «Специализированная клиническая инфекционная больница» Министерства здравоохранения Краснодарского края

зав. микробиологической лаб. ГБУЗ СКИБ МЗ КК 350015, Россия, г. Краснодар

Владимир Николаевич Городин

ФГБОУ ВО «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации; ГБУЗ «Специализированная клиническая инфекционная больница» Министерства здравоохранения Краснодарского края

доктор мед. наук, зав. каф. инфекционных болезней и эпидемиологии ФПК и ППС ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России, главный врач ГБУЗ СКИБ МЗ КК 350015, Россия, г. Краснодар, ул. Седина, 204

Марина Геннадьевна Авдеева

ФГБОУ ВО «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Email: avdeevam@mail.ru
доктор мед. наук, проф., зав. каф. инфекционных болезней и фтизиопульмонологии ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России 350015, Россия, г. Краснодар, ул. Седина, 204

Список литературы

Дополнительные файлы