NEW ANTIVIRAL DRUG TRIAZAVIRIN. RESULTS OF PHASE 1 CLINICAL TRIAL

Full Text

Создание новых лекарственных средств, эффективных в отношении инфекций вирусной этиологии, является одной из наиболее актуальных задач современной медицины. Это продиктовано полиэ-тиологичностью и контагиозностью вирусных инфекций, высокой изменчивостью вирусов и появлением новых особо опасных агентов. Так, новый высокопатогенный вирус гриппа птиц H5N1 вызвал беспрецедентную смертность (до 60%) среди заболевших в странах Юго-Восточной Азии [11, 12]. Пандемия гриппа А/ШШ/2009 также стала достаточно серьезной проблемой вследствие отсутствия выбора средств противовирусной терапии, инъекционных лекарственных форм для лечения тяжелых форм заболевания, ограничения использования препаратов по причине появления резистентных штаммов [13, 14]. Перечисленные проблемы противовирусной терапии диктуют необходимость разработки и практического внедрения новых эффективных средств профилактики и лечения вирусных заболеваний. Скрининг, проведенный среди соединений азолоазинов, структурных аналогов пуринов, позволил выявить ряд наиболее перспективных соединений с высокой противовирусной активностью, в ряду которых особое место занимает триазавирин. Триазавирин представляет собой натриевую соль 7-метилтио-3-нитро-4-оксо-1,4-дигидро[1, 2, 4]триазоло[5,1-С] [1, 2, 4]-триазин-1-ид дигидрата и по результатам доклинических исследований в системах in vitro и in vivo обладает высокой противовирусной активностью в отношении штаммов вируса гриппа, в том числе «птичьего» и «свиного» происхождения, вирусов клещевого энцефалита [1, 2, 10]. Триазавирин относится к V классу «практически нетоксичных» лекарственных средств по классификации Hodge [8]. Полученные результаты доклинического исследования триаза-вирина явились основанием проведения клинического исследования I фазы для оценки переносимости, безопасности и фармакокинетики препарата и отработки режима дозирования. Материалы и методы Клиническое исследование проводилось в ФГБУ «НИИ гриппа» Минздравсоцразвития России (Санкт-Петербург) в соответствии с этическими нормами, определенными Правилами проведения качественных клинических испытаний в РФ и Хельсинской декларацией [3-7, 9]. Пациенты В исследование были включены здоровые добровольцы обоего пола в возрасте от 18 до 45 лет, подписавшие информированное согласие. Основными критериями исключения являлись: беременность или грудное вскармливание, наличие острых и хронических заболеваний, сопутствующая терапия, недавнее участие в каком-либо клиническом исследовании. Дизайн исследования В исследовании приняли участие 30 здоровых добровольцев, рандомизированных в 3 равные группы. В ходе испытания лабораторно-инструментальные исследования (осмотр, общий анализ крови, биохимический анализ крови, общий анализ мочи, ЭКГ в 12 стандартных отведениях, АД, ЧСС) проводились на 3, 8, 12, 19 и 23-й дни. Исследование включало 3 этапа: изучение фармакокинетики и переносимости при однократном приеме триазавирина; при многократном режиме дозирования (субъекты принимали препарат ежедневно однократно в течение 7 дней); при многократном режиме дозирования с увеличением кратности приема и суточной дозы препарата. В целом было проанализировано 9 схем приема триазавирина с эскалацией суточных доз от 250 до 1500 мг. «Период отмывания» составил в среднем 72 ч (четыре фазы по-лувыведения по данным доклинических испытаний). Забор образцов крови для фармакокинетического анализа В день госпитализации после общего врачебного осмотра, регистрации ЭКГ и АД волонтеры принимали препарат. Забор крови проводили в следующие 21 ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ, № 5, 2013 Рис. 1. Фармакокинетика триазавирина при однократном приеме внутрь в возрастающих дозах (сыворотка крови). часы относительно приема: 0; 0,5; 1; 1,5; 3; 6; 9; 12; 24; 48; 72. сбор мочи проводили у добровольцев 1-й группы, получавших 250 мг (1 капсула) триазавирина, в следующие интервалы времени: 0-2; 2-5; 5-7; 7-12;12-24;24-48 ч. Препарат Препарат «Триазавирин» выпущен ООО «Завод Медсинтез» в капсулах по 250 мг. Изучение безопасности и переносимости Основными показателями безопасности и переносимости являлись - частота возникновения и тип нежелательных явлений, их тяжесть и связь с приемом препарата, динамика лабораторных и инструментальных показателей. Изучение фармакокинетических параметров триазавирин определяли в плазме крови и моче методом высокоэффективной жидкостной хроматографии обратной фазы. Использовалась хроматографическая система BioLogicDuoFlow Pathfinder 20, колонка Synergi MAX RP C12, подвижная фаза - линейный градиент ацетонитрила 0-100% в 20 мМ Na-ацетатном буфере, pH 8,6. Нижний порог достоверного количественного определения составлял 100 нг/мл. Детекцию вещества осуществляли проточным УФ-детектором (поглощение на длинах волн 260, 280 и 360 нм). Калибровочная кривая была линейна в интервале от 0,1 до 200 мкг/мл. В ходе исследования оценивались следующие фармакокинетические параметры - максимальная концентрация (Cmax), время достижения максимальной концентрации (Tmax), константа элиминации (kel), период полувыведения (T1/2), площадь под кривой концентраций за время наблюдения (AUC0-t), площадь под кривой концентраций, экстраполированная до бесконечного времени (AUC0-œ), минимальная концентрация (Cmin), фактор кумуляции (f), фракция, выводимая в неизменном виде (fe), почечный клиренс (CLR).Оценка фармакокинетических параметров проводилась модельно-независимым способом. Рис. 2. Кривая концентраций триазавирина в 1-й группе после однократного приема 250 мг препарата (сыворотка крови). Статистический анализ статистическая обработка полученных данных была выполнена с использованием непараметрических и параметрических методов. При анализе фармакокинетических параметров для оценки непрерывных величин применялась описательная статистика. Для оценки различий Cmax и AUCt после одно- и многократного введения препарата применялся метод ANOVA, при этом величины были трансформированы в логарифмические. Анализ выполнен с помощью программного обеспечения Statistica и GraphPad Prizm для персонального компьютера. Принимаемый уровень вероятности для отвержения нулевой гипотезы об отсутствии существования различий в группах и между группами соответствует _р<0,05. Результаты и обсуждение Проведена оценка переносимости, безопасности и фармакокинетики триазавирина в дозах, покрывающих интервал 5-20 мг/кг, соответственно 2501500 мг. Режим дозирования препарата составил 1, 2 и 3 раза в сутки. Рис. 3. Кривая концентраций триазавирина во 2-й группе после однократного приема 500 мг препарата (сыворотка крови). 22 Рис. 4. Расчетный клиренс в 1-й группе после однократного приема 250 мг триазавирина при условном разделении на группы предположительно с различной скоростью метаболизма. Безопасность Все группы пациентов, получавших триазавирин в нарастающих дозировках (максимальная разовая доза 1000 мг, максимальная суточная доза 1500 мг, максимальная курсовая доза 10 500 мг), завершили исследование без неблагоприятных побочных реакций (НПр), связанных с приемом препарата. Все зафиксированные в процессе исследования НПр можно разделить на группы: гастроинтестинальные (n = 1), респираторные (n = 3), неврологические (n = 4), кожные (n = 1), лабораторные (n = 5), другие (n = 4). НПр носили транзиторный характер, не требовали проведения дополнительной терапии и нормализовались на фоне приема препарата. среди клинических НПр были отмечены: головная боль, катаральные явления, кожный зуд, тошнота, околоушная атерома, гельминтоз. среди НПр со стороны лабораторных показателей необходимо отметить следующие: транзиторное повышение трансаминаз (n = 3), уровня билирубина (n = 1), однократное повышение количества лейкоцитов и эпителиальных клеток в моче (n = 1). В результате проведенных расчетов статистической значимости числа НПр ни в одной из групп выявлено не было. отслеживание НПр и динамическое наблюдение за изменениями лабораторных и инструментальных показателей не позволило выявить определенных закономерностей и достоверной статистической связи с приемом триазавирина. колебания величин лабораторных показателей не выходили за пределы физиологических норм ни в одной из 9 испытанных схем применения препарата. НПр наблюдались в разные временные периоды (схемы приема) и не во всех группах, что позволяет сделать заключение об отсутствии связи с приемом препарата. Все зафикрис. 5. кривые концентраций триазавирина в 1-й группе после приема 250 мг препарата однократно; 1 раз в сутки в течение 7 дней и 2 раза в сутки в течение 7 дней (сыворотка крови). сированные НПр не требовали проведения дополнительной терапии и изменения схем приема препарата. Фармакокинетические параметры при однократном приеме препарата При анализе фармакокинетических параметров было показано, что максимальные концентрации (cmax) пропорционально увеличивались в зависимости от дозы. Cmax были достижимы в среднем через 1 ч после приема дозы, варьируя от 0,5 до 1,5 ч. фармакокинетические кривые, построенные по средним величинам в каждой группе, представлены на рис. 1. На этом рисунке видно, что фаза элиминации носит нелинейный, двухфазный характер. На начальном этапе выведение препарата происходит с более высокой скоростью, затем замедляется. Наиболее отчетливо это было выражено в 1-й группе (250 мг). как видно на рис. 2, в каждой точке кривой, отражающей концентрации при однократном приеме триазавирина в дозе 250 мг (1-я группа), существует большой индивидуальный разброс. При этом у большинства добровольцев 1-й группы (см. рис. 2) изменения концентраций соответствовали форме, при которой пик концентрации наблюдался через 1,5 ч после приема, затем наблюдалась фаза быстрого убывания концентрации (к 3 ч наблюдения) и затем фаза медленного убывания. Аналогичная картина наблюдалась и в 3-й группе, принимавшей препарат по 1000 мг однократно. Эти группы (1-я и 3-я) были условно разделены на подгруппы и при раздельном анализе этих искусственно выделенных подгрупп (группа «замедленно фармакокинетика триазавирина в режимах приема 250 мг 1 раз в сутки однократно, 250 мг 1 раз в сутки, 7 дней; по 250 мг 2 раза в день 7 дней Группа пациентов Параметры cmax, мкг/мл Tmax, ч KeI T1/2, ч AUC 0-t, мкг/чмл AUC 0-беск, мкг/чмл Fc 250 мг 1 раз 4,2 ± 1,2 1,5 (1,0—1,5) 1,4 [0, 2-2, 1] 0,5 [0, 4-3, 6] 8,8 [6, 0-25, 0] 9,2 [5, 8-25, 4] 1,1 250 мг 1 раз, 7 дней 4,4 ± 1,1 1 (1,0—1,5) 0,4 [0, 2-0, 8] 1,4 [0, 8-5, 0] 12,0 [8, 2-31, 0] 13,2 [8, 5-31, 0] 1,1 По 250 мг 2 раза, 7 дней 4,8 ± 1,3 1,5 (1,0-3) 0,5 [0, 1-0, 9] 1,0 [0, 7-5, 0] 12,4 [8, 6-37, 0] 12,8 [9, 0-37, 4] 1,03 23 ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ, № 5, 2013 Рис. 6. Средние фармакокинетические кривые добровольцев 1-й группы с условно обычным и условно медленным типом метаболизма триазавирина при приеме препарата (250 мг) однократно 1 раз в сутки (левый график), 1 раз в сутки в течение 7 дней (средний график), и 2 раза в сутки в течение 7 дней (правый график). го» метаболизма и группа «обычного» метаболизма) были получены следующие показатели основных фармакокинетических параметров. Существенно отличающимся параметром являлась площадь под кривой концентраций, указывающая на различия в этих подгруппах характера убывания концентраций в первой фазе - в промежутке 1,5-3 ч. Период полувыведения также был несколько длиннее во 2-й подгруппе. Среди добровольцев 2-й группы, принимавших 500 мг препарата однократно, также наблюдалась индивидуальная вариабельность концентраций (рис. 3). Однако данная группа представляется более однородной и характер убывания может быть представлен как моноэкспоненциальный. Оценка клиренса по данным 1-й группы (250 мг однократно) Как следует из полученных данных, с мочой в неизменном виде выводилось от 15 до 45% препарата. В среднем 30%. Большая часть (20%) всей выводимой в неизменном виде фракции препарата обнаруживалась в моче уже спустя 5 ч после приема. Рассчитанный клиренс различался между индивидами и в среднем составил 246 [107; 441] мл/мин (указаны медиана и межквартильный промежуток). Клиренс значимо различался у добровольцев с предположительно различной скоростью метаболизма (рис. 4) и составлял 320 [194; 516] мл/мин в подгруппе условно «обычного» и 107 [59; 196] мл/мин в подгруппе условно «замедленного» метаболизма. Фармакокинетические параметры при многократном и длительном приеме При анализе фармакокинетических параметров, полученных при различных схемах приема триаза-вирина, было показано, что триазавирин обладал незначительной способностью к кумуляции при многократном приеме. При увеличении кратности приема фаза элиминации становилась более сглаженной, элиминация в первой фазе замедлялась в большей степени. Общие вычисленные параметры для 1-й группы представлены в таблице и на рис. 5. В 1-й группе при многократном длительном приеме препарата, так же как и при однократном приеме, индивидуальные данные существенно различались у добровольцев; в связи с чем также были выделены две более однородные подгруппы с предполагаемой различной скоростью метаболизма триазавирина. Различия между подгруппами сохранялись при режиме приема препарата 1 раз в сутки и имели тенденцию нивелироваться при многократном приеме в режиме 2 раза в сутки. Наглядно это проиллюстрировано на рис. 6. При анализе фармакокинетических параметров у добровольцев 3-й группы, принимавших триазавирин в дозе 1000 мг однократно, а затем по 750 мг 2 раза в сутки в течение 7 дней, было выявлено, что с увеличением суточной дозы и кратности приема наблюдалась тенденция к более позднему нарастанию концентраций (тенденция к увеличению Tmax). Период полувыведения при этом увеличивался незначимо. Так же, как в 1-й группе, очевидно, что при увеличении кратности приема нивелировалась индивидуальная вариабельность значений площади под кривой концентраций. Полученные в ходе исследования данные свидетельствуют о нелинейном характере фармакокинетики триазавирина с быстрой первой и медленной второй фазой элиминации. Было показано, что с увеличением дозы триазавирина пропорционально увеличивается максимальная концентрация, а также несколько сокращается время ее достижения, что может указывать на возрастание биодоступности. Также имеется тенденция к увеличению периода полувыведения и площади под кривой концентраций. Характер кривой убывания концентраций существенно различался у участников Рис. 7. Фармакокинетические кривые триазавирина в режимах многократного длительного приема в дозах 250 и 750 мг. 24 исследования. Представленные индивидуальные различия фармакокинетических кривых могут свидетельствовать о полиморфном метаболизме триазави-рина, что обусловливает различия в биодоступности и характере первой фазы элиминации препарата, в ходе которой выводится большая часть абсорбированной дозы. Уменьшение выраженности индивидуальных различий и очевидное увеличение биодоступности при увеличении дозы препарата может быть связано с насыщением метаболизирующих систем, что нуждается в дальнейшем изучении. При длительном приеме триазавирина фармакокинетические параметры изменялись незначимо. Ожидаемое несколько замедленное выведение препарата свидетельствует о том, что длительный прием не вызывает существенной кумуляции. Анализ различных режимов приема триазавирина свидетельствует, что только величина дозы влияет на максимально достижимые концентрации препарата в плазме крови, в то время как более длительному удержанию концентрации способствует регулярный прием и большая кратность дозирования. различия заключались в скорости первой фазы элиминации, за счет чего изменялась площадь под кривой концентрации препарата в плазме крови до 3,5 раза. Указанные различия в группах исчезали при увеличении кратности приема препарата. Для отработки различных режимов дозирования триазавирина для дальнейшего клинического использования было проведено непосредственное сравнение режимов многократного длительного приема в дозах разной величины - 250 и 750 мг (рис. 7). Было показано, что фармакокинетические кривые практически не различались у пациентов двух групп и максимальные концентрации были незначительно выше при троекратном увеличении дозы препарата и в обоих случаях были в несколько раз выше эффективных концентраций. Заключение В ходе проведенного исследования установлена безопасность и хорошая переносимость триазавири-на. Изучение фармакокинетики препарата показало, что после приема внутрь триазавирин быстро всасывается в желудочно-кишечном тракте. Максимальные концентрации достигаются в среднем через 1-1,5 ч и возрастают пропорционально принятой дозе. Период полувыведения в среднем составляет 1,0—1,5 ч. Фармакокинетика триазавирина носит нелинейный двухфазный характер. Анализ различных режимов приема триазавирина свидетельствует, что только величина дозы влияет на максимально достижимые концентрации препарата в плазме крови, в то время как более длительному удержанию концентрации способствует регулярный прием и большая кратность дозирования. Исходя из полученных данных, наиболее предпочтительным режимом, обеспечивающим достижение стабильных фармакодинамически эффективных концентраций препарата в крови, является режим приема по 250 мг 2 раза в сутки. результаты прове денного клинического исследования первой фазы по протоколу «оценка безопасности, переносимости и фармакокинетики препарата «Триазавирин» при применении у добровольцев» позволили рекомендовать данный препарат к испытанию второй фазы по оценке безопасности и эффективности.

About the authors

E. G Deeva

Research Institute of Influenza

Email: edeeva@hotmail.com
15/17, prof. Popov Str., Saint-Petersburg, Russian Federation, 197376

leg Ivanovich Kiselev

Research Institute of Influenza

Email: office@influenza.spb.ru
15/17, prof. Popov Str., Saint-Petersburg, Russian Federation, 197376

Tatjana Ilinichna Melnikova

Research Institute of Influenza

Email: melnicov12@mail.ru
15/17, prof. Popov Str., Saint-Petersburg, Russian Federation, 197376

Aram Arutjunovich Shaldzhan

Research Institute of Influenza

15/17, prof. Popov Str., Saint-Petersburg, Russian Federation, 197376

Petr Alexeevich Nekrasov

Research Institute of Influenza

15/17, prof. Popov Str., Saint-Petersburg, Russian Federation, 197376

Alexey Sergeevich Kiselev

The St.Petersburg V.M. Bekhterev Psychoneurological Research Institute

3, Bekhterev Str., Saint-Petersburg, Russian Federation, 192019

Ksenia Alexandrovna Zagorodnikova

North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov

41, Kirochnaya street, Saint Petersburg, Russian Federation, 191015

Valeriy Nikolaevich Charushin

Institute of organic synthesis of the Urals Branch of Russian Academy of Sciences named after I. Ya. Postovsky

22/20 , S. Kovalevskoy/Akademicheskaya Str., Ekaterinburg, Russian Federation, GSP-J47, 620990

Vladimir Leonidovich Rusinov

Ural Federal University named after the first President of Russia B.N. Yeltsin

J9, Mira Str., Ekaterinburg, Russian Federation, 620002

Evgeniy Narcissovich Ulomsky

Ural Federal University named after the first President of Russia B.N. Yeltsin

J9, Mira Str., Ekaterinburg, Russian Federation, 620002

Oleg Nikolaevich Chupakhin

Institute of organic synthesis of the Urals Branch of Russian Academy of Sciences named after I. Ya. Postovsky

22/20 , S. Kovalevskoy/Akademicheskaya Str., Ekaterinburg, Russian Federation, GSP-J47, 620990

References

Supplementary files