FEATURES OF AUTOROSETTE FORMATION IN PERIPHERAL BLOOD IN PATIENTS WITH HIV INFECTION

Full Text

Установлено, что под влиянием острых и при обострении хронических заболеваний, проводимой лекарственной терапии, при воздействии на организм различных токсичных веществ в периферической крови нарастает интенсивность ауторозеткообразо-вания [2, 3]. При этом не только увеличивается число ауторозеток, но и изменяется их характер, в частности в них усиливается лизис эритроцитов. Следует Для корреспонденции: Коричкина Любовь Никитична, доцент каф. госпитальной терапии и профессиональных болезней ТГМА, e-mail:lnkor@yandex.ru отметить, что наиболее часто ауторозетки в крови образуют нейтрофилы, реже - моноциты, еще реже эозинофилы и базофилы. Не исключено, что при ВИЧ-инфекции также имеется нарушение межклеточных взаимодействий в крови между лейкоцитами и аутологичными эритроцитами. В настоящее время тяжесть ВИЧ-инфекции и стадия болезни в основном оцениваются по наличию и частоте возникновения различных клинических проявлений заболевания, появлению оппортунистической патологии. Известно, что в процессе болезни резко уменьшается количество клеток СD4, а высо 25 ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ, № 2, 2012 кий показатель числа копий РНК вируса считается наиболее ранним признаком прогрессирования заболевания и неблагоприятного прогноза [1, 7, 8]. При этом больные ВИЧ-инфекцией, как правило, получают достаточно интенсивную антиретровирусную терапию [5, 6]. В результате многочисленных исследований иммунного статуса у больных ВИЧ-инфекцией выявлено взаимодействие ВИЧ и иммунокомпетентных клеток, детально изучены рецепторный аппарат лимфоцитов, клеток моноцитомакрофагальной системы, а также влияние цитокинов на регуляторную функцию иммунной системы. Проведено исследование генетического профиля по ДНК-локусам, ассоциированным с индивидуальной восприимчивостью к ВИЧ/СПИДу [4]. Под воздействием специфической терапии у больных ВИЧ-инфекцией отмечено восстановление функциональной активности клеток иммунной системы при отсутствии восстановления числа клеток СD4 [9]. Однако при указанной патологии эндогенное ауторозеткообразование в периферической крови ранее не изучалось. Поставлена цель - изучить интенсивность и характер эндогенного ауторозеткообразования в периферической крови у больных ВИЧ-инфекцией до и на фоне проводимой терапии. Материалы и методы В амбулаторных условиях обследовано 108 больных ВИЧ-инфекцией (63 мужчины, 45 женщин, средний возраст 31,4 ± 7,0 года). У 44 (40,7%) больных диагностирована стадия 3 заболевания, у 64 (59,3%) - 4 (клиническая классификация ВИЧ-инфекции, приказ Минздравсоцразвития РФ от 17.03.06 № 166). Диагноз ВИЧ-инфекции верифицирован методом иммуноблоттинга. Мониторинг за эффективностью лечения проводили клинически, а также с использованием метода количественной полимеразной цепной реакции числа копий РНК вируса в 1 мл плазмы и оценки количества клеток СD4. У всех больных диагностирован гепатит С, в 53% случаев - туберкулез легких, туберкулезный плеврит или туберкулезный лимфаденит, в 45% диагностирваны кандидоз пищевода, трахеи, ци-томегаловирусная и герпетическая инфекция органов, в 25% - дерматомикоз и другие менее значимые болезни. Больные получали показанную противовирусную (нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы, ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы, ингибиторы протеазы) и другую лекарственную терапию. Начинали лечение при количестве клеток СD4 -200 и ниже (рекомендации ФНМЦ СПИДа, 2006). Для изучения ауторозеткообразования у всех больных проводили забор капиллярной крови по стандартной методике. В окрашенных мазках крови (по Романовскому-Гимзе) подсчитывали общее число лейкоцитов, лимфоцитов, количество ауторозеток и ауторозеток с лизисом, число розеткообразующих клеток (на 200 лейкоцитов с перерасчетом на 100). За ауторозетку принимали клеточную ассоциацию, состоящую из нейтрофила, моноцита, эозинофила и тромбоцитов с тремя и более плотно прикрепленными к их поверхности аутологичными эритроцитами (рис. 1, 2). Подсчитывали ауторозетки с лизисом эритроцитов (рис. 2). Контрольную группу (КГ) составили 100 здоровых лиц (50 мужчин, 50 женщин, средний возраст 47,5 ± 1,3 года). Статистическую обработку данных проводили с помощью программы Microsoft Exсel-2003 и Вiostat. Данные представлены в виде M (средняя) ± SD (стандартное отклонение). В зависимости от нормальности распределения (критерий Шапиро-Уилка) при сравнении показателей использовали параметрические (t-критерий Стьюдента) и непараметрические (критерий Вилкоксона) методы. Связь показателей изучали при помощи корреляционного анализа по критерию Спирмена. Результаты и обсуждение У обследованных КГ в периферической крови содержание лейкоцитов, эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов, СОЭ были в физиологических пределах. Ауторозетки (см. таблицу) регистрировались в единичных случаях, в половине (53%) из них наблюдался лизис эритроцитов. Рис. 1. Мазок периферической крови. В центре видна нейтрофильная ауторозетка без лизиса. Окраска по Романовскому-Гимзе. Ув. 7 χ 90. Рис. 2. Мазок периферической крови. В центре видна тромбоцитарная ауторозетка с экзоцитарным лизисом эритроцитов (указан стрелкой). Окраска по Романовскому-Гимзе. Ув. 7χ 90. 26 Преобладали ауторозетки, образованные нейтро-филами (81%), реже - моноцитами (19%). У больных ВИЧ-инфекцией до лечения (см. таблицу) по отношению к лицам КГ число ауторозеток (абс.) было больше в 26 раз, с лизисом - в 43,7 раза, нейтрофильных и моноцитарных - в 6 раз (все p = 0,001). Доля ауторозеток с лизисом составила 88,5% (p = 0,001). В большом количестве регистрировались тромбоцитарные ауторозетки (76,5%) и значительно реже - нейтрофильные (18,8%; p = 0,001) и моноци-тарные (4,7%; p = 0,06), хотя количество последних как в абсолютных, так и в относительных величинах (на 100 клеток) было значительно больше, чем в КГ. По сравнению с КГ при ВИЧ-инфекции общепринятые показатели крови не изменились, кроме снижения количества эритроцитов (3,9 · 109/л против 4,6 · 109/л в КГ; p = 0,001) и повышения СОЭ (10,7 мм/ч против 7 мм/ч в КГ; p = 0,001). Наиболее высокий уровень ауторозеткообразова-ния в крови был выявлен у больных при осложнении заболевания туберкулезом легких и дерматомикозом. В этих случаях количество ауторозеток достигало 27-30,4 (на 100 л.) и преимущественно отмечались тромбоцитарные ауторозетки (75-85%), в них наблюдался экзоцитарный лизис эритроцитов. На фоне проводимой лекарственной терапии наблюдалось значительное улучшение состояния больных. При этом уменьшилось как общее число ауторозеток и ауторозеток с лизисом эритроцитов (в 1,4 раза; p = 0,001), так и число тромбоцитарных ауторозеток (в 2 раза; p = 0,001). Напротив, увеличилось Характер и число ауторозеток (· 109/л на 100 лейкоцитов) в периферической крови у больных ВИЧ-инфекцией на фоне проводимой противовирусной и антибактериальной терапии (M ± SD) Ауторозетки КГ (n = 100) Больные ВИЧ-инфекцией (n = 108) до лечения(n = 31) на фоне лечения (n = 98) Общее число, абс.: 0,036 ± 1,7 0,94 ± 0,43* 0,68 ± 0,31*# на 100 л. 0,75 ± 0,21 19,1 ± 3,7* 14,0 ± 6,3*# С лизисом, абс.: 0,019 ± 3,1 0,83 ± 0,32* 0,59 ± 0,23*# на 100 л. 0,39 ± 1,1 16,9 ± 4,31* 12,0 ± 5,4*# % от числа АР 53 88,5 85,7 Нейтрофильные, абс.: 0,03 ± 0,01 0,18 ± 0,07* 0,26 ± 0,01*# на 100 л. 0,6 ± 0,1 3,6 ± 1,7* 5,3 ± 2,0*# % от числа АР 18,8 37,9 Эозинофильные, абс.: - - 0,003 ± 0,001 на 100 л. 0,07 ± 0,03 % от числа АР 0,6 Моноцитарные, абс.: 0,007 ± 0,002 0,044 ± 0,01* 0,06 ± 0,021*# на 100 л. 0,15 ± 0,02 0,9 ± 0,2* 1,25 ± 0,2*# % от числа АР 19 4,7 9,0 Тромбоцитарные, абс.: - 0,72 ± 0,31 0,36 ± 0,15*# на 100 л. 14,6 ± 2,9 7,4 ± 3,3*# % от числа АР 76,5 52,8 Примечание. * - статистически значимое различие между КГ и больными ВИЧ-инфекцией до и на фоне лечения; # - статистически значимое различие между больными ВИЧ-инфекции до и на фоне лечения; л. - лейкоциты, АР - ауторозетки. количество нейтрофильных ауторозеток (в 1,5 раза; p = 0,001) и число моноцитарных (в 1,38 раза; p = 0,017). После курса лекарственной терапии обнаружены ауторозетки, образованные эозинофилами (0,6% от общего числа ауторозеток), что было нами выявлено и при другой патологии [3]. У больных ВИЧ-инфекцией была обнаружена прямая корреляционная связь между числом ауторозеток и количеством лейкоцитов (r = 0,98), показателем СОЭ (r = 0,36), числом тромбоцитов (r = 0,42). При этом наблюдалась слабая отрицательная корреляционная связь между числом ауторозеток и количеством лимфоцитов (r = -0,26), концентрацией гемоглобина (r = -0,22) и очень слабая корреляция выявлена с числом эритроцитов (r = -0,04). Кроме того, между числом ауторозеток и количеством копий РНК вируса отмечена статистически значимая прямая корреляционная связь (r = 0,43), а между числом тромбоцитов и количеством копий РНК вируса - отрицательная (r = -0,54). Полученные результаты показали, что у практически здоровых людей в периферической крови регистрируются единичные ауторозетки, преобладают нейтрофильные и реже наблюдаются моноцитарные ауторозетки. Физиологический смысл ауторозетко-образования, по-видимому, кроется в стремлении удалить из периферической крови патологически измененные (старые) эритроциты через экзоцитарный лизис последних лейкоцитами. Отмечено, что у больных ВИЧ-инфекцией существенно возрастает количество ауторозеток в крови, впервые в большом числе выявляются тромбоцитарные ауторозетки при резком уменьшении нейтрофиль-ных и моноцитарных ауторозеток. Не исключено, что это является особенностью межклеточных соотношений при ВИЧ-инфекции. Следует отметить, что наибольшее количество ауторозеток, в частности тромбоцитар-ных, выявлено у больных с вторичной инфекцией, что, по-видимому, отражает особую тяжесть этих пациентов. Кроме того, изменение соотношения числа нейтрофильных, моноцитар-ных и тромбоцитарных ауторозеток в сравнении с таковым у обследованных в КГ, возможно, свидетельствует о нарушении межклеточных соотношений в крови и системе иммунитета при ВИЧ-инфекции. Можно полагать, что ауторозетко-образование при этом заболевании имеет свои особенности. Не исключено, что тромбоциты начинают выполнять функцию лейкоцитов и удаляют из крови измененные эритроциты путем экзоцитарного лизиса. Все это отражает, видимо, серьезные сдвиги в иммунном статусе больного ВИЧ-инфекцией, свидетельствует о произошедших значительных 27 ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ, № 2, 2012 нарушениях в функциональном состоянии клеток периферической крови, что существенно изменяет межклеточные взаимодействия и соотношение числа ауторозеток, образованных нейтрофилами, моноцитами и тромбоцитами в системе гемоциркуляции. Представленные коэффициенты корреляционной связи свидетельствуют, что частота ауторозеткообра-зования тесно связана с увеличением общего числа лейкоцитов, уменьшением количества клеток СD4 и повышением числа копий РНК вируса. Под воздействием лекарственной терапии число ауторозеток в крови у больных отчетливо снижается, вероятно, отражая благоприятные сдвиги в состоянии организма. При этом наблюдается существенное уменьшение числа тромбоцитарных ауторозеток при нарастании количества нейтрофильных и моноцитарных и снижении общего числа ауторозеток с лизисом эритроцитов. Все это можно рассматривать как дополнительный признак эффективности лекарственной терапии. Таким образом, отмечено, что межклеточные соотношения в периферической крови у больных ВИЧ-инфекцией в целом отражают тяжесть заболевания и изменяются под влиянием проводимой лекарственной терапии. При этом можно полагать, что появление большого количества тромбоцитарных ауторозеток в крови при резком уменьшении нейтрофильных и моноцитарных ауторозеток указывает на существенные нарушения в иммунной системе больных ВИЧ-инфекцией, и возможно, является косвенным отражением иммунодефицита. Не исключено, что осуществление тромбоцитами экзоцитарного лизиса эритроцитов свидетельствует о функциональной недостаточности нейтрофилов и моноцитов у больных ВИЧ-инфекцией. Отчетливое уменьшение количества тромбоцитарных и увеличение нейтрофильных и моноцитарных ауторозеток в крови на фоне лечения являются, по-видимому, результатом проводимой антиретровирусной терапии. Такая динамика межклеточных соотношений в крови может служить дополнительным показателем эффективности лечения у больных ВИЧ-инфекцией. В этом направлении необходимы дальнейшие исследования. Выводы 1. У практически здоровых лиц в периферической крови выявляются единичные нейтрофильные и мо-ноцитарные ауторозетки. В 53% из них наблюдается экзоцитарный лизис эритроцитов. 2. У больных ВИЧ-инфекцией в периферической крови в большом количестве регистрируются тром-боцитарные ауторозетки при снижении числа ней-трофильных и моноцитарных ауторозеток и общем увеличении количества ауторозеток с лизисом эритроцитов. 3. Под влиянием терапии в крови у больных ВИЧ-инфекцией значительно уменьшается число тромбо-цитарных ауторозеток, увеличивается количество нейтрофильных и моноцитарных ауторозеток, впервые появляются ауторозетки, образованные эозино-филами.

About the authors

L. N. Korichkina

Federal State Budget-Financed Education Institution of Higher professional education “Tver State Medical Academy of Federal Agency in Public Health and Social Development

Email: lnkor@yandex.ru

T. S. Vinogradova

Tver Regional AIDS Center

E. L. Tofilo

State Education Institution secondary vocational education Tver Medical College

References

Supplementary files