Comparative study of antibiotic resistance of V. Cholerae non O1/ non O139 strains isolated from humans in the Rostov region in various years

Full Text

Vibrio cholerae non d/non О139 способны вызывать у людей заболевания, варьирующие по характеру клинических проявлений от диарей различной степени тяжести до системных заболеваний с внеки- шечной локализацией возбудителя, в том числе септицемии [1]. Вызванные этими микроорганизмами диареи в виде спорадических случаев или групповых вспышек токсикоинфекций зарегистрированы во многих странах мира и на территории России. Вспышки острых кишечных инфекций (ОКИ), вызванные V. cholerae non d/non О139, отмечались в Ростове-на-Дону и области более 40 лет назад (60-70-e годы ХХ века). При бактериологическом обследовании населения Ростовской области и Краснодарского края в 1966 - 1968 гг. с охватом 46 516 человек от больных ОКИ штаммы V. cholerae non О1/шп О139 выделялись в 0,6% случаев, у контактных лиц, реконвалесцентов и работников общественного питания - в 0,08-0,26% [2]. В последние годы в Ростовской области также зарегистрированы случаи ОКИ у людей, от которых были выделены культуры V. cholerae non О1/ non О139. При микробиологическом мониторинге материала от 43 764 больных ОКИ, проведенном в Астраханской, Волгоградской, Ростовской областях в 2005-2007 гг., V. cholerae non О1/шп О139 были выделены в 0,07-0,14% случаев [3]. Обнаружение генов продукции холерного токсина и других факторов патогенности среди V. cholerae non О1/шп О139 [4] свидетельствует о существовании реальной угрозы образования новых вирулентных для человека штаммов, склонных к эпидемическому распространению [5], что вызывает повышенное внимание к этой группе микроорганизмов. Многочисленные исследования свидетельствуют о широком распространении и нарастании в последние десятилетия антибиотикорезистентности среди штаммов холерных вибрионов [6]. Поэтому целью нашего исследования стало изучение антибиотикорезистентности Vcholerae non О1/шп О139, выделенных от людей в Ростовской области в разные годы. Материалы и методы Штаммы: из музея живых культур ФКУЗ «Ростовский-на-Дону противочумный институт» было взято 86 штаммов V. cholerae non О1/шп О139 (ctx-tcp-), выделенных от людей в Ростовской области: 57 штаммов в 1968 - 1975 гг. и 29 штаммов - в 2005 - 2014 гг. Антибиотикочувствительные штаммы V. cholerae О1 Р-5879 ctx+tcpA+toxR+(1972 г., г. Таганрог) и V. cholerae non О1/шп О139 Р-9741 (КМ 162) (ctx-tcp-) служили в качестве контроля. Чувствительность/устойчивость штаммов холерного вибриона к 11 антибактериальным препаратам изучали методом серийных разведений в плотной питательной среде (агар Мюллера-Хинтона, рН 7,5, HIMEDIA, Индия). Посевная доза взвесей 16-18часовых агаровых культур составляла n • 106 м.к. по отраслевому стандарту мутности ГИСК им. Л.А. Та- расевича (ОСО-42-25-59-86 П). Интерпретацию результатов проводили в соответствии с МУК 4.2.2495-09 (2009) [7]. Доверительные интервалы для частот и долей рассчитывали по методу Вальда с коррекцией по Агрести-Коуллу с вероятностью 95% [8]. Результаты и обсуждение Установлено, что среди V. cholerae non О1/шп О139, выделенных в 1968-1975 гг., 7% культур были устойчивы к ампициллину (МПК 128 мг/л), 17,8% - к кана- мицину (МПК 32 мг/л), 3,5% - к рифампицину (МПК 128 мг/л), 14% - к триметоприму/ сульфаметоксазолу (МПК 128/640 мг/л) (рис. 1). Среди культур, выделенных в 2005-2014 гг., резистентность к канамицину (МПК 32 мг/л) составила 6,9%, к ампициллину - 69% (МПК 16 мг/л), к триметоприму/ сульфаметоксазолу - 10,3% (МПК 16/80 мг/л), к стрептомицину - 27,6% (МПК 64 мг/л), к фуразо- лидону - 79% (МПК 16 мг/л) (см. рис. 1). Все изученные штаммы сохраняли чувствительность к тетрациклинам (МПК 0,5-1 мг/л), левоми- цетину (МПК 0,5-4 мг/л), ципрофлоксацину (МПК 0,01-0,05 мг/л). У штаммов, выделенных в 2005-2012 гг., в срав- % штаммов Рис. 2. Распределение штаммов V. cholerae non ОУмп О139, выделенных от людей в Ростовской области, по количеству маркеров антибиотикорезистентности. ЧШ - чувствительные штаммы; АБП - устойчивость к соответствующему числу антибактериальных препаратов; МЛУ - множественная лекарственная устойчивость. 1968-1975 гг. Ц 2005-2014 гг. Ар Sm Km Tmp/Smz Rifr Furr Cz Ц 1968-1975 гг. Ц 2005-2014 гг. Рис. 1. Распределение штаммов V. holerae non d/non О139, выделенных от людей в Ростовской области, по устойчивости к антибактериальным препаратам (АБП), %. Устойчивость: Ap - к ампициллину; Sm - к стрептомицину; Km - к ка- намицину; Rif - к рифампицину; Tmp/Smz - к триметоприму/сульфаме- токсазолу; Furr - к фуразолидону; Cz - к цефтазидиму. нении со штаммами, выделенными в 1968-1975 гг., увеличилось количество культур, устойчивых к ампициллину, появилась устойчивость к стрептомицину, фуразолидону, цефтазидиму при некотором снижении процента резистентности к триметоприму/ сульфаметоксазолу и канамицину. В 2005-2014 гг. все штаммы холерных вибрионов оказались чувствительны к рифампицину. Антибиотикорезистентные фенотипы штаммов Vcholerae non О1/поп О139, выделенных от людей в Ростовской области Годы выделения Число маркеров устойчивости Km* Ap Cz Rif Tmp/Smz Furr Sm Количество выявленных фенотипов абс. % (ДИ) 1968-1975 0 + + + + + + + 46 81,0 (68,5-89,0) 1 - + + + + + + 1 1,75 (< 0,01-10,2) 1 + - + + + + + 1 1,75 (< 0,01-10,2) 1 + + + - + + + 1 1,75 (< 0,01-10,2) 1 + + + + - + + 3 5,25 (1,2-15,0) 2 + - + - + + + 1 1,75 (< 0,01-10,2) 2 + + + - - + + 2 3,5 (0,3-12,6) 2 + - + + - + + 1 1,75 (< 0,01-10,2) 2 - + + + - + + 4 7,0 (2,3-17,2) 3 - - + + - + + 4 7,0 (2,3-17,2) 2005-2014 0 + + + + + + + 9 31 (17-49) 1 + - + + + + + 6 20,7 (9,5-38,7) 2 + - + + + - + 4 13,8 (4,9-31,2) 2 + - + + + + - 1 3,5 (< 0,01-18,6) 2 - + + + - + + 1 3,5 (< 0,01-18,6) 2 + - - + + + + 2 6,9 (0,85-23) 3 + - + + - - 5 17,2 (7,1-35) 4 - - + + - - 1 3,5 (< 0,01-18,6) 4 + - + - - - 2 6,9 (0,85-23) П р и м е ч а н и е. Устойчивость: Ap - к ампициллину; Sm - к стрептомицину; Km - к канамицину; Rif - к рифампицину; Tmp/Smz - к триметоприму/ сульфаметоксазолу; Furr - к фуразолидону; + - чувствительность; - - устойчивость к АБП; ДИ - доверительный интервал. Распределение штаммов V cholerae non Q1/non О139, выделенных от людей в Ростовской области, по количеству маркеров антибиотикорезистентно- сти представлено на рис. 2. Количество антибиотикочувствительных культур, выделенных в 2005-2014 гг., уменьшилось в 2,6 раза в сравнении с 1968-1975 гг. Произошло увеличение в 2 раза числа штаммов, имеющих устойчивость одновременно к одному, двум и трем антибактериальным препаратам, а также появились культуры, устойчивые к 4 (10,5%) антибиотикам. Множественная лекарственная устойчивость штаммов возросла с 7 до 27,8% (см. рис. 2). Анализ профилей антибиотикорезистентности штаммов V. cholerae non О1/шп О139, выделенных в Ростовской области в разные периоды времени, показал вариабельность фенотипов устойчивости к антибактериальным препаратам. Штаммы имели до 10 различных профилей антибиотикорезистентно- сти, включающие как чувствительные, так и с множественной (более 3 АБП) антибиотикоустойчиво- стью (см. таблицу). Разнообразие спектра антибиотикочувстви- тельности изученных V. cholerae non О1/шп О139 согласуется с данными ретроспективного ПЦР и VNTR-анализа этих штаммов, который выявил вариабельность серотипических и генотипических свойств и отсутствие корреляции между ними [9]. Данные, полученные В.Д. Кругликовым и соавт. [10] , указывают на высокую пластичность генома холерных вибрионов. Заключение Таким образом, у V. cholerae non О1/non О139, выделенных от людей в Ростовской области в 2005 - 2014 гг., наблюдается уменьшение количества антибиотикочувствительных культур, нарастание числа штаммов, имеющих множественную антибиотикоу- стойчивость, а также расширение спектра устойчивости к антибактериальным препаратам в сравнении со штаммами, выделенными ранее. Выбор средства для этиотропной терапии ОКИ, вызванных этими микроорганизмами, должен основываться на данных антибиотикограммы каждой выделенной культуры.

About the authors

N. A Selyanskaya

Rostov-on-Don Institute for Plague Control of Federal Agency for Consumer Rights Protection and Human Welfare Supervision

Email: ppdn@inbox.ru
117, Maksima Gorkogo, Rostov-on-Don, Russian Federation, 344002

I. M Verkina

Rostov-on-Don Institute for Plague Control of Federal Agency for Consumer Rights Protection and Human Welfare Supervision

117, Maksima Gorkogo, Rostov-on-Don, Russian Federation, 344002

E. A Bereznyak

Rostov-on-Don Institute for Plague Control of Federal Agency for Consumer Rights Protection and Human Welfare Supervision

117, Maksima Gorkogo, Rostov-on-Don, Russian Federation, 344002

S. V Titova

Rostov-on-Don Institute for Plague Control of Federal Agency for Consumer Rights Protection and Human Welfare Supervision

117, Maksima Gorkogo, Rostov-on-Don, Russian Federation, 344002

N. G Zheleznyak

Rostov-on-Don Institute for Plague Control of Federal Agency for Consumer Rights Protection and Human Welfare Supervision

117, Maksima Gorkogo, Rostov-on-Don, Russian Federation, 344002

I. V Arkhangelskaya

Rostov-on-Don Institute for Plague Control of Federal Agency for Consumer Rights Protection and Human Welfare Supervision

117, Maksima Gorkogo, Rostov-on-Don, Russian Federation, 344002

References

Supplementary files