Peculiarities of cellular immunity in acute Epstein-Barr virus infection

Full Text

Введение В настоящее время не ослабевает внимание исследователей к оппортунистическим инфекциям, способным индуцировать вторичные дефекты в иммунной системе [1]. В этом отношении интерес представляет Эпштейн-Барр вирусная инфекция (ЭБВИ) как одно из распространенных заболеваний человека. Так, по данным ВОЗ, вирусом Эпштейн-Барр (ВЭБ) инфицировано около 5560% детей раннего возраста (до 3-х лет), подавляющее большинство взрослого населения планеты (90-98%) имеют специфические сывороточные антитела к ВЭБ, а заболеваемость различными формами ЭБВИ в разных странах мира колеблет- ся от 3-5 до 45 случаев на 100 тыс. населения [2]. Уровень заболеваемости ЭБВИ во многом связан с тем, что данный вид инфекции относится к группе неуправляемых, при которых отсутствует специфическая профилактика, а развивающаяся при патологии иммуносупрессия (специфическая ингибиция апоптоза лимфоцитов) вносит существенный вклад в течение патологического процесса при суперинфекции другими инфекционными агентами [3-5]. Отсутствие настороженности врачей в отношении атипичного течения острой ВЭБ-инфекции, а зачастую и типичного течения приводит к частым (до 60%) диагностическим ошибкам при первичном обращении за медицинской помощью [6]. Таким образом, распространенность, изменчивость клинических проявлений и высокий процент ошибочных диагнозов требует оптимизации дифференциальной диагностики и прогноза течения острой ВЭБ-инфекции. Целью нашего исследования явилась оптимизация дифференциальной диагностики инфекционного мононуклеоза, ассоциированного с острой ЭБВИ у взрослых, на основе использования в комплексном лабораторном обследовании параметров клеточного иммунитета. Материалы и методы Проведено комплексное обследование больных инфекционным мононуклеозом, проходивших лечение в специализированной клинической инфекционной больнице Краснодара в 2013-2014 гг. В группу обследования вошли 22 больных инфекционным мононуклеозом (ИМ), ассоциированным с ВЭБ. Среди них мужчин 41%, женщин 59%, возраст пациентов колебался от 18 до 25 лет, заболевание в 64% случаев имело тяжелое течение. Группу сравнения составило 19 больных острым бактериальным тонзиллитом (ОБТ), из них мужчин 68,4%, среднетяжелое течение наблюдалось в 79% случаев, возраст составил от 18 до 42 лет, в группу контроля вошли относительно здоровые лица в количестве 19 человек (12 женщин и 7 мужчин) в возрасте 21-22 лет. Диагноз ИМ установлен на основании клиниколабораторных данных и подтвержден с помощью определения антител к антигенам ВЭБ методом им- муноферментного анализа и методом ПЦР. Исследования проводились в разгаре заболевания при поступлении в ГБУЗ СКИБ на стационарное лечение. Таблица 1 Изменение показателей лимфоцитарного иммунитета у пациентов с острой вирусной и острой бактериальной инфекцией (M±m, p) Показатель Группа инфекционный мононуклеоз острый тонзиллит контрольная (здоровые) Лимфоциты, % 52,40±3,90# 22,6±3,6* 43,7±4,5 Лимфоциты, абс. 3,50±0,50# 1,7±0,2* 3,2±0,5 CD3(+), % 87,10±1,80*# 73,4±2,5 73,2±2,5 CD3(+), абс. 2,70±0,30# 1,30±0,21 2,3±0,4 CD4(+), % 22,60±2,00*# 44,1±1,9 42,1±1,8 CD4(+), абс. 0,70±0,10* 0,8±0,10* 1,3±0,2 CD8(+), % 63,30±2,80*# 31,90±1,80 33,7±1,6 CD8(+), абс. 2,00±0,20*# 0,60±0,10* 1,1±0,2 CD4(+)/CD8(+), усл. ед. 0,40±0,02*# 1,40±0,10 1,3±0,1 CD19(+), % 2,60±0,60*# 12,10±1,10 10,00±1,32 CD19(+), абс. 0,10±0,01*# 0,20±0,01* 0,30±0,10 CD16(+), % 9,40±1,70*# 14,30±2,80 16,20±2,40 CD16(+), абс. 0,30±0,10* 0,20±0,01* 0,50±0,10 П р и м е ч а н и е. * - достоверность отличий от группы контроля (р < 0,01); # - достоверные различия в клинических группах. Методом лазерной проточной цитофлюориме- трии (Сytomics FC-500, ВеckmanCoulter, США) проведена оценка состояния клеточного звена иммунитета с применением моноклональных антител к CD3-, CD4-, CD8-, CD16-, СБ19-рецепторам лимфоцитов, а также определен уровень содержания В-лимфоцитов, одномоментно экспрессирующих CD19-, CD21-, €Б81-рецепторы) и интенсивность их свечения (MFI), соответствующая плотности экспрессии указанных рецепторов. Для расчета статистических показателей с определением Т-критерия Стъюдента использовались программы «Microsoft Excel» и пакет прикладных программ STATISTICA 6.0. Результаты и обсуждение При оценке показателей клеточного иммунитета у больных с острой вирусной и острой бактериальной инфекцией был выявлен целый ряд изменений относительно возрастной нормы с достоверными межгрупповыми различиями, позволяющими определить дифференциально-диагностические критерии инфекционного процесса определенной этиологии (табл. 1). Типичными для вирусного процесса изменениями были повышение процентного и абсолютного содержания лимфоцитов, в то время как при остром тонзилите наблюдалась достоверная лимфопения (p < 0,01). Что же касается популяционного и субпопу- ляционного состава лимфоцитов, то наибольшие изменения были выявлены при острой вирусной инфекции. Так, общее содержание Т-лимфоцитов (CD3+) и доли среди них CD8(+)-клеток достоверно возрастало у больных ВЭБИ, тогда как при ОБТ данные показатели находились в пределах возрастной нормы. Сходный разнонаправленный характер изменений в виде снижения показателей при острой вирусной инфекции и сохранения нормального уровня реагирования при ОБТ был выявлен в отношении CD4(+)-лимфоцитов, их соотношения с содержанием Т-цитотоксических (CD8+), В-лимфоцитов (CD8+) и относительного содержания NK-клеток (см. табл. 1). Несмотря на ВЭБ-ИМ [g| ОБТ |_j Контроль Субпопуляционный состав В-лимфоцитов при остром инфекционном процессе различной этиологии (M±m, p) Таблица 2 Показатель Группа инфекционный мононуклеоз острый тонзиллит контрольная (CD21+CD81+CD19+)-лимфоциты 1,52±0,27* 6,13±0,88* 3,65±1,06 MFI 21 8,23±4,55* 2,95±0,48 2,52±0,34 MFI 81 4,55±0,73* 3,74±0,52 3,10±0,31 MFI 19 8,82±0,84* 7,02±0,34 6,59±0,33 (CD19+СD21+CD81 >лимфоциты 0,75±0,37* 2,68±0,64 2,15±0,57 MFI 21 4,05±0,46* 2,28±0,14 2,22±0,20 MFI 19 8,82±0,84* 7,02±0,34 6,59±0,33 (CD19+CD81+CD21 >лимфоциты 0,35±0,05* 2,46±0,28* 1,31±0,32 MFI 81 11,18±2,07* 5,45±0,91 4,70±0,84 MFI 19 8,82±0,84* 7,02±0,34 6,59±0,33 Примечание. * - достоверность отличий от контроля (р < 0,01). Уровень популяций В-лимфоцитов, одномоментно несущих CD19-, CD81- и CD21-антигены при инфекционном процессе вирусной и бактериальной патологии. то что NK-клетки врожденного иммунитета также принимают активное участие в противовирусной защите, выявленный факт их достоверного снижения у больных ИМ свидетельствует о ведущей роли Т-киллеров в уничтожении ВЭБ. Тем не менее с точки зрения иммунопатогенеза острой вирусной инфекции, наиболее диагностически значимыми показателями следует считать двукратное увеличение цитотоксических Т-клеток и резкое снижение содержания (в 4,5 раза) В-лимфоцитов, что может быть обусловлено биологическими особенностями ВЭБ, к которому на В-лимфоцитах имеются специфические рецепторы - CD21. Учитывая последнее, была проанализирована структура В-лимфоцитарной популяции с учетом клеток, одновременно несущих мембранные рецепторы - CD19, CD21, CD81, как у здоровых лиц, так и у больных ИМ и ОБТ. Исследованиями показано, что среди В-лимфоцитов содержание лимфоцитов с фенотипом “CD19+CD21+CD81+” достоверно превышает уровень нормы только при острой бактериальной инфекции, тогда как при ВЭБИ имеет место достоверное его снижение (табл. 2). Нарядусэтим в общейпопуляцииВ-лимфоцитов, экспрессирующих CD19-антигены, обнаружены две субпопуляции, отличающиеся редукцией одного из функционально значимых рецепторов: “CD19+CD21+CD81-” и “CD19+CD2TCD81+”. При анализе содержания редуцированной по CD21- антигену субпопуляции В-клеток выявлено ее достоверное и выраженное снижение при острой вирусной инфекции (ИМ), тогда как при ОБТ содержание (CD19+CD2ГCD81+)-В-лимфоцитов было достоверно повышено (см. рисунок). Похожая динамика наблюдалась и по содержанию редуцированной по CD81-антигену субпопуляции В-клеток: достоверное снижение уровня “CD19+CD21+CD81-” при ИМ и сохранение показателя в пределах нормальных значений при ОБТ (см. рисунок). При исследовании величины MFI, отражающей плотность экспрессии рецепторов на поверхности клетки, выявлено, что исключительно при острой вирусной инфекции наблюдается достоверное ее увеличение в отношении всех видов рецепторов на трех субпопуляциях В-лимфоцитов, а сравнительная оценка величины MFI при острой вирусной и острой бактериальной инфекциях позволяет получить дополнительные дифференциально-диагностические критерии (см. табл. 2). Таким образом, анализируя полученные данные в целом, следует заключить, что особенностями клеточного иммунитета при острой вирусной инфекции на примере ВЭБ-ассоциированного ИМ являются: 1. Увеличение цитотоксических CD8(+)-Т-клеток. 2. Количественный дефицит CD19(+)-В-лим- фоцитов, включая субпопуляции с фенотипом “CD19+CD21+CD81+”, “CD19+CD21-CD81+” и “CD19+CD21+CD81-”. 3. Достоверное увеличение плотности (MFI) экспрессии CD19-, CD21-, CD81-рецепторов в различных субпопуляциях В-лимфоцитов. Выявленные закономерности изменения клеточного иммунитета при ИМ обусловлены биологическими особенностями возбудителя острой ВЭБ-инфекции и могут быть использованы для оптимизации клинико-лабораторной диагностики заболевания.

About the authors

A. A Trisko

Specialized Clinical Infectious Diseases Hospital

204, Sedina Str., Krasnodar, Russian Federation, 350901

N. V Kolesnikova

Kuban State Medical University

4, Sedina Str., Krasnodar, Russian Federation, 350063

M. G Avdeeva

Kuban State Medical University

Email: avdeevam@mail.ru
4, Sedina Str., Krasnodar, Russian Federation, 350063

G. A Chudilova

Kuban State Medical University

4, Sedina Str., Krasnodar, Russian Federation, 350063

L. V Lomtatidze

Kuban State Medical University

4, Sedina Str., Krasnodar, Russian Federation, 350063

References

Supplementary files