ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ И ФЕРМЕНТНЫЙ ПРОФИЛЬ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ У ЧАСТО БОЛЕЮЩИХ ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА

Полный текст

В структуре инфекционной заболеваемости на долю острых респираторных инфекций приходится от 60 до 80% всей детской инфекционной заболеваемости [5, 6]. Необходимо отметить, что проблема инфекций дыхательных путей остается ведущей в педиатрической практике. Детей с частыми респираторными инфекциями условно называют «часто болеющие дети» (ЧБД) и относят в группу диспансерного учета [3]. Последствиями рецидивирования респираторных заболеваний может быть снижение функциональной активности иммунной системы. Одним из перспективных направлений, позволяющих оценить функциональное состояние лимфоцитов - основного структурно-функционального элемента иммунной системы, является изучение их метаболических показателей. Действительно, все модуляторы функциональной активности прежде всего изменяют метаболизм клетки, переключая субстратный поток с одного метаболического пути Для корреспонденции: Куртасова Людмила Михайловна, д-р мед. наук, проф., каф. клинической иммунологии, e-mail: aids@ktk.ru на другой, влияя на энергетику клетки и синтетические процессы. В то же время именно в клетке начинается формирование ответных реакций на внешнее воздействие (в том числе и инфекционной природы), что позволяет составить представление об иммунологической стратегии, избранной организмом. Кроме того, в настоящее время доказано, что функциональные проявления лимфоцитов происходят только при соответствующем изменении их метаболизма [8, 13, 17]. Следовательно, изменения иммунореактивности не могут не иметь метаболической основы. Особенно актуальным представляется изучение метаболизма иммунокомпетентных клеток у детей раннего возраста. Именно у них можно ожидать наиболее значимые динамические изменения в клетке, связанные с бурными темпами процессов роста и дифферен-цировки, с одной стороны, и быстротой возникновения обменных нарушений на клеточном уровне вследствие воздействия патогенных факторов - с другой. В связи с чем целью исследования явилось изучение иммунологических параметров и показателей НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ лимфоцитов периферической крови у детей раннего возраста с частыми острыми респираторными инфекциями. 22 Материалы и методы Проведены наблюдения за 84 детьми в возрасте от одного года до трех лет, часто болеющими острыми респираторными инфекциями, в периоде клинического благополучия. Для включения ребенка в группу ЧБД использовали критерии, разработанные В.Ю. Альбицким и А.А. Барановым [1]. Контрольную группу составили 20 практически здоровых детей аналогичного возраста. Лимфоциты выделяли из цельной гепаринизи-рованной крови центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографина [9]. Затем осуществляли биолюминесцентное определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ), глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г-3-ФДГ), лактат-дегидрогеназы (ЛДГ), малатдегидрогеназы (МДГ), НАД- и НАДФ-зависимых глутаматдегидрогеназ (НАДГДГ и НАДФГДГ соответственно), малатде-гидрогеназы декарбоксилирующей (НАДфМДГ), НАД- и НАДФ-зависимых изоцитратдегидрогеназ (НАДИЦДГ и НАДФИЦДГ соответственно) и глу-татионредуктазы (ГР) [4]. Активность ЛДГ, МДГ, НАДГДГ и НАДФГДГ определяли как по прямым реакциям (по восстановлению НАД (Ф) до НАД(Ф) Н, так и по обратным (по окислению НАД(Ф)Н до НАД(Ф). Активность исследуемых оксидоредук-таз выражали в ферментативных единицах (1 E = 1 мкмоль/мин) на 104 клеток. Исследование проводили на ферментативном препарате NAD (Р): FMN оксидоредуктаза-люцифераза из Photobacterium leiognathi (полученном в Институте биофизики СО РАН, Красноярск). Измерение уровня биолюминесценции осуществляли на биолюминометре БЛМ 8801 (Россия). Методом непрямой иммунофлюоресценции, используя FITC-меченые моноклональные антитела серии С” фирмы «ДАКО», изучали содержание С”3+-, С”4+-, С”«+-, С” 19+-клеток в периферической крови. Концентрацию иммуноглобулинов классов A, М, G в сыворотке крови оценивали методом радиальной иммунодиффузии в геле [14]. Содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови определяли методом селективной преципитации [12]. Фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови изучали в реакции с частицами латекса. Рассчитывали процент фагоцитирующих ней-трофилов и фагоцитарное число, т. е. среднее число поглощенных одним нейтрофилом частиц. Статистическая обработка полученных данных проводилась с помощью пакета прикладных программ Statistica v. 6.0 («StatSoft, Inc.», США). Производили расчет средней арифметической величины (М) и ошибки средней арифметической (± m). Оценка достоверности различий средних величин производилась с использованием t- критерия Стьюдента. Критический уровень значимости (р) при проверке статистических гипотез принимали равным 0,05. Результаты и обсуждение Анализ полученных данных выявил увеличение абсолютного числа лимфоцитов периферической крови в группе ЧБД по сравнению с показателями контрольной группы (табл. 1). Исследование им-мунофенотипического спектра лимфоцитов крови установило статистически значимое снижение процентного содержания С”4+-клеток в группе ЧБД относительно контрольных величин. Кроме того, обнаружено повышение относительного и абсолютного количества С”8+-лимфоцитов крови в группе ЧБД по сравнению с параметрами контрольной группы (см. табл. 1). Изменения процентного соотношения С”4+-, С”«+ -клеток периферической крови в группе ЧБД приводили к статистически значимому снижению индекса дифференцировки относительно показателей контрольной группы (см. табл. 1). Изучение показателей концентрации IgA, IgM и IgG в сыворотке крови выявило понижение уровня IgA и тенденцию к увеличению продукции IgM в группе ЧБД по сравнению с параметрами контрольной группы (см. табл. 1). Следует отметить в группе ЧБД увеличение концентрации ЦИК в сыворотке крови относительно значений контрольной группы (см. табл. 1). Оценка фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови показала, что в группе ЧБД снижено количество «активно работающих» клеток на фоне сохраненной ими поглотительной способности (см. табл. 1). Анализ показателей НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ лимфоцитов периферической крови выявил изменения активности исследуемых ме- Таблица 1 Иммунологические показатели у ЧБД (М ± m) Показатель Контрольная группа (П = 20) а 4) 5 П 00 “й Il рЧ р Лейкоциты, · 109/л 8,42 ± 0,15 9,35 ± 0,54 Лимфоциты, % 45,1 ± 1,49 47,40 ± 1,82 Лимфоциты, · 109/л 3,43 ± 0,10 4,42 ± 0,33 < 0,01 С”з+, % 61,9 ± 2,11 60,43 ± 1,78 С”з+, · 109/л 2,10 ± 0,05 2,60 ± 0,17 СО +, % 4 ’ 44,7 ± 1,73 36,07 ± 1,94 < 0,001 СО +, · 109/л 4 1,52 ± 0,07 1,52 ± 0,11 С”8+, % 16,2 ± 1,35 20,87 ± 1,44 < 0,02 С”8+ · 109/л 0,54 ± 0,04 0,92 ± 0,09 < 0,001 С”4+/С”8+ 2,92 ± 0,19 2,12 ± 0,25 < 0,01 С”и+, % 11,45 ± 1,23 13,60 ± 1,59 С”19+ · 109/л 0,38 ± 0,04 0,41 ± 0,04 ФИ, % 58,75 ± 2,71 49,27 ± 2,46 < 0,001 ФЧ, усл. ед. 6,09 ± 0,29 6,55 ± 0,25 IgA, г/л 0,97 ± 0,06 0,66 ± 0,10 < 0,01 IgM, г/л 0,9 ± 0,07 1,15 ± 0,13 0,1 > р > 0,05 IgG, г/л 7,95 ± 0,39 9,18 ± 0,72 ЦИК, усл. ед. 42,05 ± 3,32 53,70 ± 3,88 < 0,02 Примечание: Здесь и в табл. 2: р казателями. достоверность различий с по 23 ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ, № 5, 2012 таблица 2 показатели активности НАД(ф)-зависимых дегидрогеназ (в мкЕ) лимфоцитов крови у ЧБД (М ± m) Показатель Контрольная группа (n = 20) Группа ЧБД (n = 84) р Г-6-ФДГ 2,09 ± 0,36 13,86 ± 0,88 < 0,001 Г-3-ФДГ 2,56 ± 0,59 4,06 ± 0,22 < 0,05 ЛДГ 41,37 ± 4,07 18,80 ± 1,42 < 0,001 МДГ 20,14 ± 1,26 26,88 ± 1,94 < 0,01 НАДФМДГ 5,16 ± 0,77 7,56 ± 0,42 < 0,01 НАДФГДГ 1,92 ± 0,16 0,05 ± 0,002 < 0,001 НАДГДГ 6,22 ± 0,63 6,87 ± 0,85 НАДИЦДГ 1,25 ± 0,10 4,17 ± 0,10 < 0,001 НАДФИЦДГ 10,22 ± 1,04 16,04 ± 1,78 < 0,01 НАДН- ЛДГ 66,20 ± 6,41 24,75 ± 1,81 < 0,001 НАДН- МДГ 123,04 ± 9,47 57,36 ± 5,92 < 0,001 ГР 12,37 ± 1,23 9,39 ± 0,93 0,1 > р > 0,05 НАДН- ГДГ 174,52 ± 14,29 17,41 ± 1,67 < 0,001 НАДФН- ГДГ 151,94 ± 11,68 44,78 ± 4,30 < 0,001 Примечание: Здесь и в табл. 2: р - достоверность различий с показателями. таболических ферментов в группе ЧБД (табл. 2). так, установлено увеличение в 6,6 раза (р < 0,001) активности Г-6-ФДГ-ключевого фермента пенто-зофосфатного цикла, продукты которого используются в реакциях макромолекулярного синтеза [16]. Кроме того, отмечалось повышение уровня Г-3-ФДГ-энзима, участвующего в передаче продуктов липидного катаболизма на гликолиз, что свидетельствует о возможном увеличении субстратного питания за счет продуктов липидного обмена, обычно происходящего при необходимости быстрой мобилизации энергии в клетке [15]. В то же время повышенный уровень активности Г-3-ФДГ в лимфоцитах крови предполагает и более активную работу в них глицерофосфатного шунта, обеспечивающего цикл Кребса водородом [11]. Следует отметить в группе ЧБД увеличение в лимфоцитах крови активности МДГ, НАДФМДГ, НАДИЦДГ, НАДФИЦДГ относительно показателей контрольной группы (см. табл. 2). Это определяет повышение субстратного потока по циклу трикарбо-новых кислот, вносящего наибольший вклад в процессы внутриклеточного энергообразования. Наряду с этим отмечается недостаточная активность обратной реакции МДГ, что может отрицательно сказываться на работе малатаспартатного шунта. Снижение его работы отражается не только на энергетической функции митохондрий (через понижение поступления водорода в митохондрии), но и на состоянии окислительно-восстановительного потенциала цитоплазмы [7, 10]. Исследование активности прямой и обратной реакций ЛДГ в лимфоцитах крови выявило статистически значимое снижение уровня ЛДГ как по прямой, так и по обратной реакции в группе ЧБД по сравнению с контрольными величинами (см. табл. 2). Необ ходимо отметить в данной группе детей тенденцию к понижению уровня активности глутатионредуктазы в лимфоцитах крови относительно параметров группы контроля (см. табл. 2). Полученные данные установили, что в группе ЧБД показатели активности НАДФГДГ, обр. НАДГДГ, обр. НАДФГДГ в лимфоцитах крови были ниже, чем у детей контрольной группы (см. табл. 2). таким образом, ферментный профиль лимфоцитов периферической крови у часто болеющих острыми респираторными инфекциями детей раннего возраста характеризуется активацией аэробного дыхания, высокой наработкой рибозо-5-фосфат и НАДФН-зависимых реакций макромолекулярного синтеза, снижением анаэробной реакции ЛДГ, что отражает понижение субстратного потока по гликолизу. Вероятно, компенсаторно увеличивается активность Г-3-ФДГ, способствующая более насыщенному поступлению продуктов метаболизма липидов и жиров на гликолиз, снижается роль малатаспартатного шунта в энергетике клетки, понижается через НАДФГДГ окисление продуктов аминокислотного обмена в реакциях цикла Кребса. Наблюдается ингибирование оттока интермедиатов через обр. НАДГДГ и обр. НАДФГДГ с цикла трикарбоновых кислот на реакции аминокислотного обмена. Кроме того, отмечается тенденция к понижению уровня глутатионредуктазы - фермента, который входит в систему антиоксидантной защиты клетки и в определенной мере модулирует пролиферативную активность лимфоцитов [2]. Заключение Результаты проведенных исследований установили, что у детей раннего возраста, часто болеющих острыми респираторными инфекциями, в период клинического благополучия отмечаются изменения иммунофенотипического спектра лимфоцитов периферической крови, снижение уровня IgA и тенденция к повышению концентрации IgM, а также увеличение содержания ЦИК в сыворотке крови. Кроме того, наблюдается уменьшение количества «активно работающих» нейтрофилов периферической крови. Следует отметить, что изменения иммунологических показателей сочетаются с изменениями энзиматической активности лимфоцитов крови. Ферментный статус лимфоцитов крови характеризуется повышением активности пластических процессов и напряженностью внутриклеточного энергетического обмена. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости проведения у часто болеющих острыми респираторными инфекциями детей раннего возраста иммунореабилитации. Учитывая высокую значимость метаболических реакций для функциональной клеточной активности и согласно полученным нами результатам исследования, можно предположить о возможности включения в комплекс иммунореа-билитационных мероприятий у данной категории детей метаболической коррекции, направленной на восстановление внутриклеточного обмена иммуно-компетентных клеток.

Об авторах

Л. М Куртасова

Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого

Email: aids@ktk.ru
д-р мед. наук, проф., каф. клинической иммунологии 660022, Красноярск, ул. Партизана Железняка, 1

Т. В Лубнина

Краевой центр по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными заболеваниями

врач-педиатр лечебноконсультативного отд-ния Красноярского краевого центра по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями. 660049, Красноярск, ул. Карла Маркса,45

Список литературы

Дополнительные файлы