Разработка и изучение эффективности набора реагентов для идентификации Vibrio cholerae и Vibrio parahaemolyticus методом мультилокусной аллель-специфической полимеразной цепной реакции при проведении клинических испытаний

Обоснование. Холера относится к группе инфекций, борьба с которыми регламентируется Международными медико-санитарными правилами ВОЗ (2005). На сегодняшний день разработано большое число тест-систем для ПЦР-детекции штаммов Vibrio cholerae. Однако зарегистрированные тест-системы ПЦР для выявления ДНК V. parahaemolyticus в клиническом материале в России отсутствуют.

Цель исследования — разработка, проведение клинических испытаний и оценка эффективности набора реагентов для идентификации V. cholerae и V. parahaemolyticus методом мультилокусной аллель-специфической ПЦР (набор реагентов «Vibrio-скрин FL») в рамках процедуры государственной регистрации указанного медицинского изделия.

Материалы и методы. В статье публикуются результаты клинических испытаний набора реагентов для идентификации V. cholerae и V. parahaemolyticus методом мультилокусной аллель-специфической ПЦР, разработанного с целью оптимизации средств и методов идентификации и дифференциации возбудителей инфекционных заболеваний на основе данных о разнообразии геномов. Клинические испытания проводились на базе Головного центра гигиены и эпидемиологии ФМБА (лицензия от 02.12.2013 № ФС-99-01-008342; разрешение Минздрава РФ от 16.05.2013 № 300н) в соответствии с программой клинических испытаний от 23.09.2020 № 20.ПМКИ-042/10.20 (акт клинических испытаний от 12.10.2020 № 01.АК-042/10.20). Для проведения клинических испытаний разработанного набора реагентов «Vibrio-скрин FL» в качестве целевых аналитов были использованы клинические штаммы микроорганизмов рода Vibrio, а также ряд гетерологичных микроорганизмов. Методы исследования — бактериологический метод и мультилокусная ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.

Результаты. В ходе испытаний образцы испытуемого набора реагентов «Vibrio-скрин FL» показали надёжность и удобство обращения в условиях практической лаборатории. Аналитическая чувствительность набора реагентов составила при определении принадлежности к роду Vibrio не менее 10⁶ копий гена SecY; к виду V. cholerae — не менее 10⁶ копий гена hlyA, к виду V. parahaemolyticus — не менее 10⁶ копий гена vppC. При определении аналитической специфичности отсутствовали неспецифические реакции с образцами ДНК гетерологичных микроорганизмов. Медицинское изделие для диагностики in vitro «Набор реагентов для идентификации V. cholerae и V. parahaemolyticus методом мультилокусной аллель-специфической ПЦР (Vibrio-скрин FL)» соответствует предлагаемым методам использования, что позволяет применять его для дифференциации штаммов V. cholerae и V. parahaemolyticus, выделенных из клинического образца после культивирования методом мультилокусной аллель-специфической ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией. Получено регистрационное удостоверение от 08.02.2021 № РЗН 2021/13360. Приказом Росздравнадзора от 08.02.2021 № 1041 набор реагентов «Vibrio-скрин FL» (ФКУЗ «Ростовский-на-Дону противочумный институт» Роспотребнадзора) допущен к обращению на территории Российской Федерации.

Выводы. Набор реагентов «Vibrio-скрин FL» является качественным, эффективным и безопасным диагностическим медицинским изделием для диагностики in vitro с достаточной диагностической чувствительностью и специфичностью для выявления специфических участков нуклеиновых кислот Vibrio spp., V. cholerae и V. parahaemolyticus, что позволяет использовать его в клинической лабораторной диагностике для решения эпидемиологических задач и выявления случаев заболеваний, вызванных патогенными вибрионами.