Опыт применения ИФА тест-систем для серологической диагностики лихорадки Западного Нила

Полный текст

Серологическая диагностика арбовирус-ных инфекций проводилась в Астраханской области с 1997 по 2013 г. в вирусологической лаборатории Центра гигиены и эпидемиологии (ЦГиЭ). В 1997-2011 гг. для этой цели использовали иммуноферментные (ИФА) тест-системы производства НИИ вирусологии им.Д.И.Ивановского (Москва), предназначенные для выявления специфических IgM в сыворотках крови больных [1]. В 2013 г. вирусологическая лаборатория ЦГиЭ перешла на применение ИФА-IgM системы ЗАО БТК «Биосервис» (РУ № ФСР 2012/13840 от 10.09.12), которая является коммерческим аналогом тест-системы НИИ вирусологии. В период с 1997 по 2013 г. в лаборатории было обследовано 13 863 сыворотки (а также пробы СМЖ) от 8464 больных с острыми сезонными лихорадочными заболеваниями с предварительными диагнозами: ОРВИ, серозный менингит, Крымская геморрагическая лихорадка, Астраханская риккетсиозная лихорадка, ВИНЭ, лихорадка Ку и др. В результате этой работы было верифицировано 544 случая лихорадки Западного Нила (ЛЗН), включая 95 случаев в 1999 г. Тест-системы ИФА-IgM НИИ вирусологии (до 2012 г.) и ЗАО «Биосервис» (в 2012 и 2013 гг.) были апробированы и с успехом применялись также в вирусологических лабораториях ЦГиЭ в Волгограде, Ростове-на-Дону и Краснодаре. При использовании этих диагностикумов предусматриваются обязательные положительные (К+) и отрицательные (К-) контроли, а также параллельное обследование сывороток со специфическим и нормальным антигенами. Учет реакции осуществляется на спектрофотометре при длине волны 450 нм. Положительными считаются пробы сывороток со следующими параметрами: оптическая плотность (ОП) в лунках со специфическим антигеном выше 0,350 о. е.; ОП в лунках со специфическим антигеном превышает ОП с нормальным антигеном в 3 раза и более. Все сыворотки, положительные при первичном скрининге в разведении 1:100, тестируются повторно для определения титра антител. Диагностическим считается титр IgM > 1:800 (согласно МУ 3.1.3.2600 - 10 «Мероприятия по борьбе с лихорадкой Западного Нила (ЛЗН) на территории Российской Федерации»). Выявление специфических IgM возможно в первые дни заболевания, что позволяет проводить экспресс-диагностику ЛЗН сразу после госпитализации больных. При обследовании парных сывороток регулярно обнаруживается диагностически значимая сероконверсия IgM [1, 3]. Результаты тестирования в ИФА-IgM полностью подтверждаются Для корреспонденции: Алла Рудольфовна Азарян, зав. вирусологической лаб. ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Астраханской области», e-mail: marineazaryan@mail.ru Таблица 1 Результаты обследования сывороток крови 5 больных из ОИКБ в ИФА-тест-системах Euroimmun и Биосервис на антитела к вирусу ЗН Диагностические лаборатории Номер сыво Больные День обсле дования от ОИКБ, Астрахань ЦгиЭ, Астра ханской области Волгоградский НИПЧИ ротки начала заболе- тест-системы ИФА вания Euroimmun Биосервис Euroimmun IgM IgM IgM IgG 127 Х.М. 14 +* (R±2,18) 0** 0 0 159 31 н/о *** 0 0 0 128 К. 3 + (R-2,56) 0 0 0 221 31 н/о 0 0 0 129 Я. 5 + (R-1,8) 1:800 ± (R-1,04) +(R-2,02) 133 10 +(R-1,84) 1:800 + (R-1,28) (R-1,92) 130 Х.А. 14 +(R-2,4) Отр. +(R-1,75) 0 180 28 н/о Отр. н/о н/о 131 Р.Н. 4 +(R-1,83) Отр. Погранич. ± (R-0,99) 0 Контроль IgM+ н/о н/о + н/о н/о Примечание. Здесь и в табл. 2: R - Ratio; * + - положительный результат; ** 0 отрицательный результат; *** н/о - не обследованы. данными ИФА-IgG [3]. При учете результатов реакции рассчитывается отношение (Ratio) ОП в лунках с сыворотками больных к ОП в лунке с калибратором. Результат считается положительным при Ratio > 1,1, отрицательным при Ratio < 0,8, пограничным (сомнительным) в интервале от 0,8 до 1,1. В период с 17 мая по 3 июля 2013 г. в лаборатории ОИКБ с использованием наборов Anti-West Nile virus (IgM) фирмы Euroimmun AG были обследованы сыворотки 535 госпитализированных больных. 16 проб от 15 больных с положительным результатом ИФА на IgM-антитела к вирусу ЗН были направлены в вирусологическую лабораторию ЦГиЭ для подтверждения диагноза (согласно МУ 4.2.3009 - 12 «Порядок организации и проведения лабораторной диагностики ЛЗН для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней»). Первые 6 сывороток от 5 больных поступили 29 мая. Раннее появление больных в мае-середине июня вызвало настороженность, так как предшествующими многолетними исследованиями было установлено, что первые случаи ЛЗН в Астраханской области появляются в конце июня и регистрируются до октября месяца, а пик заболеваемости приходится на август-сентябрь [1, 2]. При проверке в лаборатории ЦГиЭ из 6 сывороток, положительных в тест-системе Euroimmun AG, позитивными в тест-системе ЗАО «Биосервис» оказались только две (№ 129 и 133), взятые у больной Я. на 5-й и 10-й дни заболевания. При этом титр IgM антител в обеих пробах составил 1:800. Результаты обследования четырех сывороток (№ 127, 128, 130, 131), а также 60 Таблица 2 Результаты обследования сывороток 11 больных из ОИКБ в ИФА-тест-системах Euroimmun и Биосервис на IgM антитела к вирусу ЗН Номер сыворотки Боль ные День обследования от начала заболевания Диагностические лаборатории ОИКБ, Астрахань ЦгиЭ, Астраханской области 174 К. 1 +* (R-7,84) 0** 215 11 н/о*** 0 175 Г. 7 + (R-2,5) 0 182 12 н/о 0 176 И. 1 + (R-2,4) 0 184 8 н/о 0 177 Л. 11 + (R-1,9) 0 178 Ч. 4 + (R-7,0) 0 198 А.А. 9 + (R-2,19) 0 275 25 н/о 0 199 д.д. 8 + (R-7,0) 0 213 12 н/о 0 245 А.Д. 3 + (R-9,5) 0 244 7 н/о 0 247 С. 6 + (R-3,5) 0 258 11 н/о 0 248 Н. 9 + (R-1,6) 0 181 Д.Е. 7 + (R-1,7) 0 249 18 н/о 0 Контроль н/о + IgM+ проб, полученных от больных Х.М., К. и Х.А. в более поздние сроки (через 31, 31 и 28 дней от начала болезни) были отрицательными (табл. 1). В связи с расхождением полученных данных 04.06.13 г. 6 образцов сывороток были направлены в Волгоградский противочумный институт (являющийся Референс-центром Роспотребнадзора по мониторингу за возбудителем ЛЗН) для проведения дополнительного обследования на IgM- и IgG-антитела к вирусу ЗН, выполненного с использованием тест-систем Euroimmun. В этом случае положительными оказались сыворотки № 133 (на IgM- и IgG-антитела) и № 130 (на IgM при отсутствии IgG), сомнительными на IgM - № 129 и 131 (при отрицательном результате обследования на IgG) (см. табл. 1). Таким образом, с применением наборов Euroimmun диагноз ЛЗН был установлен в 5 случаях в лаборатории ОИКБ Астрахани и в 2 случаях в лаборатории Волгоградского НИПЧИ, а с использованием тест-системы «Биосервис» (в лаборатории ЦГиЭ) только в одном случае. Эти данные свидетельствуют о ложноположительном характере выявления IgM-антител в сыворотках № 127, 128, 130, и 131 с помощью диагностикума Euroimmun. В июне 2013 г. из ОИКБ в вирусологическую лабораторию ЦГиЭ поступили еще 11 сывороток от 11 больных, позитивных на IgM-антитела к вирусу ЗН (по данным обследования в тест-системе Euroimmun). Все эти пробы, так же как и 8 других, взятых у больных той же группы в более поздние сроки (на 8-25-й день от начала заболевания), оказались отрицательными в тест-системе ЗАО «Биосервис» (табл. 2). Таким образом, на первом этапе нашей работы серологически было обследовано 16 больных, госпитализированных в ОИКБ Астрахани. Даты их заболевания приходились на период с 6 мая по 29 июня 2013 г. Диагнозы при госпитализации: вирусный менингит и менингит в 5 случаях, вирусная инфекция неясной этиологии в 4 случаях, Астраханская риккетсиозная лихорадка у 3, ОРВИ у 3, аденовирусная инфекция в 1 случае. Возрастное распределение: 1-8 лет - 11; 17 лет - 2; 48-51 год - 3. Дети в возрасте от 1 года до 5 лет были госпитализированы с диагнозами: менингит (4), ВИНЭ (1), ОРВИ (1). Совпадение результатов обследования этой группы пациентов с применением ИФА-тест-систем производства Euroimmun AG и ЗАО Биосервис для выявления IgM-антител к вирусу ЗН составило всего 6,2%. С учетом этих данных ОИКБ в июле 2013 г. приобрела тест-системы БиоСкрин-ВЗН производства компании ЗАО Биосервис, с помощью которых было обследовано 1109 пациентов, при этом IgM-антитела к вирусу ЗН выявлены у 33. При обследовании сывороток крови этих больных в вирусологической лаборатории ЦГиЭ этот результат подтвердился в 32 (97%) случаях. На основании полученных данных можно сделать заключение, что использованные в работе тест-системы Anti-West Nile virus ELISA-IgM производства фирмы Euroimmun AG не отвечают требованиям специфичности и они не должны применяться для диагностики ЛЗН.

Об авторах

Алла Рудольфовна Азарян

ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Астраханской области»

Email: marineazaryan@mail.ru
зав. вирусологической лаб.

А. П Гришанова

ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Астраханской области»

врач-вирусолог вирусологической лаб.

Е. И Иващенко

ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Астраханской области»

биолог вирусологической лаб.

Г. Л Шендо

ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Астраханской области»

гл. врач

А. И Ковтунов

Управление Роспотребнадзора по Астраханской области

руководитель Управления Роспотребнадзора по Астраханской области, гл. государственный санитарный врач Астраханской области, канд. мед. наук, засл. врач РФ

С. Ж Неталиева

ГБУЗ АО «Областная инфекционная клиническая больница им. А.М. Ничоги»

М. А Бабаева

ГБУЗ АО «Областная инфекционная клиническая больница им. А.М. Ничоги»

зав. лаб. Астрахань

А. В Буркин

ГБУЗ АО «Областная инфекционная клиническая больница им. А.М. Ничоги»

гл. врач ГБУЗ АО «Областной инфекционной клинической больницы им. А.М. Ничоги», проф., д-р мед. наук Астрахань

Т. Е Аршба

ГБУЗ АО «Областная инфекционная клиническая больница им. А.М. Ничоги»

зам. гл. врача ГБУЗ АО «Областной инфекционной клинической больницы им. А.М. Ничоги», засл. врач РФ Астрахань

В. Ф Ларичев

ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздрава России

вед. науч. сотр. лаб. биологии и индикации арбовирусов

А. М Бутенко

ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздрава России

зав. отделом арбовирусов и лаб. биологии и индикации арбовирусов

Список литературы

Дополнительные файлы