Изучение биоплёночной формы холерных вибрионов методом ПЦР-РВ

Обоснование. Холерные вибрионы могут существовать в планктонной и биоплёночной формах. Унифицированных методов, регистрирующих образование биоплёнки и количественное определение микроорганизмов, нет, а известные методы трудоёмки и не позволяют объективно оценить концентрацию холерных вибрионов в биоплёнках.

Цель исследования — оценить метод количественного определения холерных вибрионов в биоплёночной и планктонной формах на основе ПЦР-РВ.

Материалы и методы. Бактериологическим методом концентрацию Vibrio сholerae в планктоне определяли по числу колониеобразующих единиц в 1 мл, в биоплёнках применяли метод истощения отпечатков на пластинах агара. ПЦР-РВ проводили с использованием описанных в литературе праймеров и зондов для выявления генов hlyA и ctx. Холерные вибрионы определяли количественно с использованием встроенного программного обеспечения и стандартных препаратов с известной концентрацией бактериальных клеток. Обработку полученных результатов осуществляли в электронных таблицах Microsoft Office Excel 2016, используя десятичный логарифм, статистический анализ проводили с использованием программы Statistica 13.3.

Результаты. В течение срока наблюдения концентрация холерных вибрионов в биоплёнках на хитине и пластике нарастает по мере увеличения сроков инкубации. Количество V. cholerae в составе биоплёнок и планктона на хитине или над ним превосходило аналогичные показатели при использовании в качестве субстрата пластика. На 30-е сутки разница составила два и более порядка. Результаты двух методов были воспроизводимы, сопоставимы. На одинаковых этапах концентрация V. cholerae варьировала в пределах одного порядка, что свидетельствовало о достоверности результатов ПЦР-РВ.

Заключение. Бактериологический метод информативен при качественной оценке биоплёнок в определении жизнеспособности холерных вибрионов. Однако из-за его трудоёмкости, невозможности быстро определить концентрацию холерных вибрионов в биоплёнке на хитине предпочтительнее использование ПЦР-РВ, которая позволяет оценить концентрацию холерных вибрионов в планктоне и биоплёнке точно и быстро.