МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОСНОВА АУТОИММУННЫХ ПРОЯВЛЕНИЙ ПРИ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТАХ

Полный текст

В настоящее время является общепризнанным факт, что течение хронических вирусных гепатитов В и С зачастую протекает на фоне системных (внепе- Для корреспонденции: Умбетова Карина Туракбаевна, д-р мед. наук, проф. каф. инфекционных болезней медикопрофилактического фак. Первого МГМУ, e-mail: karmasara@m-box.ru 4 ченочных) проявлений в сочетании с широким спектром аутоантител [1, 5]. В то же время установлено, что природа развития внепеченочных поражений обусловлена иммунными реакциями, возникающими в ответ на репликацию вирусов в печени и вне ее [11], но морфологическая основа внепеченочных поражений и аутоиммунных проявлений при хронических вирусных гепатитах В и С на фоне репликативной активности гепатотропных вирусов остается недостаточно изученной. Известно, что прогрессирование вирусных инфекций ассоциируется со специфическими дефектами и дисбалансом в системе Th1- и Th2- типа [3, 9]. При формировании иммунного ответа по 2-му типу развивается персистенция вирусной инфекции с обязательным присутствием аутоиммунного компонента независимо от возбудителя [10]. Причиной развития аутоиммунных реакций может служить нарушение баланса цитокинов за счет активации аутореактивных Т-клеток антигенпредставляю-щими клетками. Ведущую роль в формировании аутоиммунных реакций играют нарушения диф-ференцировки Т-клеточного звена. Т-лимфоцитам отводится ключевая роль в развитии аутоиммунных гепатитов (АИГ), так как установлено участие Т-лимфоцитов в иммунных реакциях in situ, что находит отражение в образовании в ткани печени лимфоидных скоплений [4]. В 2005 г. выявлена особая субпопуляция Т-клеток - комплекс T-регуляторных клеток CD4+/CD25+, которые обладают способностью угнетать активацию и ингибировать секрецию цитокинов CD4/CD25+ T-хелперами и CD8+, что в конечном итоге препятствует развитию реакций, направленных на элиминацию чужеродного антигена [7]. Одновременно T-регуляторные клетки CD4/CD25+ сдерживают активацию аутореактивных Т- и В-лимфоцитов [2] и тем самым препятствуют развитию аутоиммунных реакций. Распределение данных клеток в организме человека, помимо кровотока, остается неизученным, как и остается неясной их роль в инициации иммунологических реакций при различных инфекционных заболеваниях. Исследования, посвященные изучению наличия и локализации Т-регуляторных лимфоцитов в паренхиме печени при хронических вирусных гепатитах, в отечественной литературе отсутствуют. В связи с вышеизложенным представляло интерес определить наличие аутоантител (ASMA, AMA, ANA) в сыворотке крови у больных хроническими вирусными гепатитами и изучить в органе-мишени (печени) морфологическую основу формирования аутоиммунных проявлений, проанализировав популяционный состав лимфоцитов в гепатобиоптате. Материалы и методы Обследовано 144 пациента с хроническими вирусными гепатитами - ХВГ (13 с хВгВ и 131 с ХВГС). Диагноз ХВГ установлен на основании клиниколабораторных данных. В исследование вошли больные, не имеющие аутоиммунной патологии, хронических заболеваний эндокринной системы, крови. У всех больных определяли маркеры вирусных гепатитов в сыворотке крови (HBsAg, anti-HBcor IgM, anti-HBcor IgG, anti-HAV IgM, anti-HCV IgM, anti-HCV IgG, anti-HDV IgM, anti-HDV IgG) методом ИФА на базе клинической инфекционной больницы № 2 в иммунологической лаборатории. С целью подтверждения активной репликации вируса всем больным проведена по-луколичественная ПЦР для выявления HBV-ДНК и HCV-РНК в сыворотке крови с определением генотипа вируса гепатита C. ASMA, AMA, ANA выявляли методом непрямой иммунофлюоресценции (набор реагентов ATS COMVI-I IMMCO DiagMstic, СШЛ), ай^^^ определяли методом ИФА (набор реагентов ImmuLisa anti-Liver-Kindey Microcomal (а^^КЖ^) Antibody ELAISA IMMCO Diagnostic, СШ^). Криоглобулины (КГ) выявлены качественным визуализа-ционным методом, ревматоидный фактор (РФ) определялся в сыворотке полуколичественным методом латекс-агглютинации на слайде производства фирмы «HUMAN» (Германия) в соответствии с рекомендациями фирм-производителей. Всем больным выполнена пункционная биопсия печени по Менгини с последующим морфологическим исследованием биоптатов печени общепринятым методом полуколичественной оценки гистологической активности и фиброза по R. Knodell, адаптированной в отношении гепатитов В и С (К. Ishak). Иммунофенотип клеток печени определяли методом иммуногистохимии на криосрезах и иммуноцитохимии на мононуклеарных клетках, выделенных из биоптатов в лаборатории клеточного иммунитета ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. Мазки из моно-нуклеарных лейкоцитов гепатобиоптатов окрашивались эозином и азуром по Романовскому-Гимзе и по Браше с контрольной обработкой РНКазой, световую микроскопию и фотографирование иммунных клеток печени в окрашенных мазках проводили с помощью фотовидеосистемы Ax^lan 2 (фирмы «Carl Zeiss», Германия). Результаты и обсуждение Установлено, что у больных ХВГВ в сыворотке крови выявлены ASMA у 36,4%, АМА у 54,5%, ANA у 18,2% больных и anti-LKM-1 - у 9%. РФ в концентрации 200 МЕ/мл определен у 18,2% больных. Полученные нами результаты даже на небольшой выборке больных свидетельствуют, что длительная персистенция HBV приводит к развитию аутоиммунных проявлений. Во всех группах больных ХВГС установлено наличие ASMA, АМА и anti-LKM-1, причем наибольшее количество больных с ASMA (66,7%) и АМА(48,5%) было в группе с низкой степенью активности, частота anti-LKM-1 во всех группах колебалась от 11,5 до 14,3%, наибольшая частота встречаемости ANA зарегистрирована у больных с циррозом печени (15,4%). Среди больных ХВГС наиболее высокая частота встречаемости КГ выявлена у больных с низкой (35,7%) и умеренной (44%) степенью гистологической активности, а у больных с минимальной степенью активности КГ диагностированы у 14,3%, с циррозом - у 16,7%. Наиболее высокая частота встречаемости РФ выявлена среди больных ХВГС с умеренной (40%) и минимальной (38,1%) степенью активности, а у больных с низкой степенью актив 5 ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ, № 5, 2012 ности РФ диагностирован у 28,5%, с циррозом - у 33,3 %. Достоверной разницы в частоте встречаемости РФ среди больных ХВГС различной степени активности выявлено не было, что свидетельствует об отсутствии прямой зависимости наличия РФ у больных ХВГС от гистологической активности. В биоптате печени у обследованных больных нами выявлена выраженная лейкоцитарная инфильтрация печени, которая возникала, а затем распространялась внутрь печеночных долек. В лейкоцитарных инфильтратах преобладали клетки лимфоидного ряда, при активизации процесса в этих инфильтратах появлялись в большем количестве активированные лимфоциты и макрофаги. Количество мононуклеарных лейкоцитов, достаточное для иммуноцитологического анализа, удалось выделить только из гепатобиоптатов пациентов с выраженной лимфоидной инфильтрацией, что в основном наблюдалось у больных ХГВ и ХГС с умеренной и высокой гистологической активностью гепатита (рис. 1 см. на 3-й полосе обложки). При изучении фенотипа мононуклеарных лейкоцитов в области лимфоидных инфильтратов нами обнаружены участки клеток, экспрессирующие маркеры CD4+ и CD25+. Зеленое мембранное свечение дают Т-хелперы (CD4+), красное - клетки, несущие рецепторы к ИЛ-2 (CD25) (рис. 2, 3 см. на 3-й полосе обложки). При двойном окрашивании в области лимфоидного инфильтрата печени наряду с CD4- (зеленое свечение) и CD25+-клетками (красное свечение) нами определены двойные позитивные клетки, экспрессирующие одновременно маркеры CD4+ и CD25+ (CD4+/CD25+-клетки - желтое свечение). Выявленная в паренхиме печени популяция комплекса Т-регуляторных клеток (CD4+CD25) вызывает супрессию клеточного иммунного ответа при элиминации вируса из поврежденных тканей и обеспечивает развитие персистирующей вирусной инфекции с аутоиммунным компонентом [9]. В нормальных условиях Т-регуляторные клетки анергич-ны, но способны к распознаванию и прямой пролиферации в ответ на антигенемию. Из источников литературы известно, что при HBV-инфекции регуляторные T-лимфоциты являются одним из медиаторов супрессии Th1 в ответ на HBcAg, так как вызывают увеличение ИЛ-10-секретирующих CD4+CD25+-клеток, в свою очередь HBsAg стимулирует Th2 [9], обеспечивая развитие персистирующей вирусной инфекции с аутоиммунным компонентом. Следовательно, выделенный нами в лейкоцитарном инфильтрате печени комплекс Т-регуляторных клеток (CD4+CD25) свидетельствует о развитии аутоиммунных реакций в печеночной ткани. Согласно данным литературы, у пациентов с ХВГС индуцированные комплекс Т-регуляторных лимфоцитов и CD8+-лимфоциты вызывают локальное воспаление в печени [6]. У обследованных нами больных мы выявили в гепатобиоптате лимфоидное воспаление и не выявили признаков некроза. Данную морфологическую картину можно объяснить присутствием в печеночной ткани комплекса Т-регуляторных клеток (CD4+CD25+). Заключение Полученные нами данные свидетельствуют, что выявленный нами в гепатобиоптате у больных хроническими вирусными гепатитами комплекс Т-регуляторных лимфоцитов (CD4+CD25) является морфофункциональной основой для формирования аутоиммунных проявлений на фоне персистирующей вирусной инфекции у больных вирусными гепатитами. Для всесторонней оценки клинического течения и прогноза у больных хроническим вирусным гепатитом необходимо наряду с определением показателей гистологической активности и фиброза оценивать выраженность, распространенность и субпопуляци-онный состав лейкоцитарных инфильтратов печени.

Об авторах

К. Т Умбетова

ТБОУ ВПО Первый Московский государственный университет им. И.М. Сеченова

Email: karmasara@m-box.ru
д-р мед. наук, проф. каф. инфекционных болезней медикопрофилактического фак. Первого МГМУ 119991, Москва, ул. Трубецкая, 8, стр. 2

Е. В Волчкова

ТБОУ ВПО Первый Московский государственный университет им. И.М. Сеченова

Email: antononina@rambler.ru
д-р мед. наук, проф., зав. каф. инфекционных болезней медико-профилактического фак. Первого МГМУ им. И.М. Сеченова 119991, Москва, ул. Трубецкая, 8, стр. 2

М. В Киселевский

ГУ Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН

д-р мед. наук, проф., член-кор. РАМН, зав. лаб. клеточного иммунитета РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН 115478,Москва, Каширское шоссе, 24, стр. 1

Ю. Г Пархоменко

клиническая инфекционная больница № 2

д-р мед. наук, проф., зав. патологоанатомическим отд-нием ИКБ № 2 105275, Москва, 8-я ул. Соколиной горы, 15

Л. И Шуба

ТБОУ ВПО Первый Московский государственный университет им. И.М. Сеченова

канд. мед. наук, доцент каф. инфекционных болезней медико-профилактического фак. Первого МГМУ им. И.М. Сеченова 119991, Москва, ул. Трубецкая, 8, стр. 2

С. Г Пак

ТБОУ ВПО Первый Московский государственный университет им. И.М. Сеченова

д-р мед. наук, проф., член-кор. РАМН, почетный зав. каф. инфекционных болезней медико-профилактического фак. Первого МГМУ им. И.М. Сеченова. 119991, Москва, ул. Трубецкая, 8, стр. 2

Список литературы

Дополнительные файлы