Обследование реконвалесцентов, перенесших лихорадку Западного Нила, на специфические IgM, IgG и нейтрализующие антитела

Полный текст

Диагностика большинства арбовирусных инфекций, включая лихорадку Западного Нила (ЛЗН), основана на результатах вирусологического, молекулярно-генетического и серологического обследования больных. В случае ЛЗН по причине короткого периода вирусемии методы выделения вируса, а также обнаружения вирусной РНК в крови или ликворе обладают ограниченной эффективностью. Основное диагностическое значение имеют методы иммуноферментного анализа (прежде всего MAC-ELISA), позволяющие выявлять специфические антитела IgM, которые появляются в крови, как правило, на 2-5-й день болезни и достигают очень высокого уровня через 1,5-2 нед. Опыт многолетнего использования метода MAC-ELISA в научных и практических лабораториях России лег в основу ряда методических указаний и рекомендаций, основанных на применении главным образом сертифицированных наборов производства ЗАО “Биосервис” (Москва) и ЗАО “Вектор-Бест” (Новосибирск) [1-3]. Важным критерием для дифференциации острой инфекции ЛЗН от предшествующей - перенесенной в предыдущий год или ранее, - является продолжительность персистенции специфических IgM антител у реконвалесцентов, перенесших это заболевание. Обнаружение у пациентов IgM антител к вирусу ЛЗН обычно рассматривается как свидетельство недавно приобретенного заболевания ЛЗН. Однако сведения по этому вопросу весьма противоречивы. В статье G. Tardei и соавт. [4], опубликованной по материалам изучения вспышки ЛЗН в Румынии, говорится о том, что IgM антитела к вирусу ЛЗН через 2-3 мес заболевания обнаруживались у 50% реконвалесцентов. По данным В.Ф. Ларичева и соавт. [5], специфические IgM антитела не выявлялись методом MAC-ELISA ни у одного из 40 реконвалесцентов через 6-7 мес после заболевания ЛЗН, перенесенного в 1999 г. в Волгоградской области (даже при минимальном разведении сывороток крови 1:50). При этом IgG антитела присутствовали у 35 (87,5%) из них. J. Roehring и соавт. [6] сообщили о результатах обследования сывороток крови 29 реконвалесцен- тов, перенесших ЛЗН в США в 1999 г. При учете результатов анализов методом MAC-ELISA авторы расценивали показатели (ratio) оптической плотности сывороток (P/N) следующим образом: более 3,0 - как положительные, более 2,0 и менее 3,0 - как сомнительные и менее 2,0 - как отрицательные. В периоды примерно 200, 200-400 и более 500 дней от начала заболевания были обследованы соответственно 22 (1-я группа), 21 (2-я группа) и 12 (3-я группа) сывороток. В 1-й группе достоверные показатели наличия антител IgM были обнаружены в 14 (64%) пробах, а с учетом сомнительных результатов - в 18 (82%). Во 2-й и 3-й группах частота выявления IgM составляла 43 и 42% соответственно, а с учетом сомнительных результатов - 62 и 58%. При обследовании 39 сывороток крови, взятых у 38 реконвалесцентов через 8 и более месяцев после заболевания ЛЗН в Канаде, 28 (71,8%) проб содержали специфические IgM антитела, 5 (12,8%) оказались сомнительными и 6 (15,4%) отрицательными [7]. По наблюдениям H. Prince и соавт. [8]. в США у доноров с установленным присутствием РНК вируса ЛЗН в крови (и серологически подтвержденной инаппарантной формой ЛЗН) IgM антитела к вирусу ЛЗН в 32% случаев обнаруживались примерно в течение 200 дней, а через год после инфицирования в 13-17% (в предельно низкой концентрации). На этом основании авторы пришли к выводу, что детекция IgM к вирусу ЛЗН остается полезным диагностическим критерием для идентификации недавней инфекции ЛЗН. Л.С. Карань и соавт. на конференции Проблемной комиссии “Арбовирусы и другие вирусы зоонозов” [9] сообщили об обнаружении IgM к вирусу ЛЗН у 50 из 87 (57,5%) обследованных реконвалес- центов с лабораторно подтвержденным диагнозом ЛЗН через 264-283 дня после начала заболевания. У 22 (25,3%) из них титры IgM достигали значений, более либо равных 1:800. По данным A. Papa и соавт. [10], в Греции при обследовании 26 реконвалес- центов время обнаружения IgM антител составляло примерно 164 дня после появления симптомов заболевания ЛЗН, хотя у 3 (12%) из них специфические IgM сохранялись на низком уровне в течение 180-270 дней. Сыворотки тех же трех реконвалес- центов оказались положительными на IgM через 3 года после заболевания, но с предельно низкими показателями оптической плотности. Материалы и методы Учитывая значительные отличия данных о продолжительности персистенции IgM антител ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Результаты анализа сывороток крови реконвалесцентов, перенесших лихорадку Западного Нила в Астраханской области в 2013 r. Больные Обследование в 2013 г Обследование в 2014 г. день IgM IgM IgG день от IgM IgG PH ЛЗН болезни Аст Мск начала заболевания Аст. Влг Мск Аст. Влг Мск Мск 1 4 3200 6400 отр. 281 отр. отр. отр. + + 1600 160 2 5 > 3200 25.600 400 287 400 отр. 400 + + 400 80 3 11 1600 3200 80 243 отр. отр. отр. + + 200 40 4 8 > 3200 >3200 отр. 265 отр. отр. отр. + + 800 00 о 05 о 5 10 6400 12800 1600 299 отр. отр. отр. + + 1600 160-320 6 4 3200 3200 отр. 289 отр. отр. отр. + + > 400 40-80 9 + 6400 1600 7 11 > 3200 12.800 отр. 289 отр. ± отр. + + 320 320 8 4 > 3200 12.800 отр. 284 400 отр. 400 + + 400 80 9 11 > 3200 12.800 80 281 отр. отр. отр. отр. отр. отр. отр. 10 6 6400 25.600 800 299 отр. отр. отр. + отр. 800 00 о 05 о 11 3 3200 6400 отр. 277 отр. ± отр. + отр. 200 н/о 12 4 3200 12,800 отр. 262 отр. отр. отр. отр. отр. отр. н/о 5 + 25.600 отр. 13 5 6400 25.600 отр. 334 отр. отр. отр. + + 200 80 14 5 1600 н/о н/о 355 отр. отр. отр. + + 800 160-320 15 7 1600 1600 отр. 349 отр. отр. отр. + + 200 40 16 4 1600 6400 отр. 349 отр. отр. отр. + + 400 80-160 17 18 6400 25.600 отр. 342 отр. отр. отр. + + 800 320 18 8 1600 1600 3200 358 отр. отр. отр. + + > 400 80 19 10 > 3200 51.200 отр. 321 отр. отр. отр. + + 80 40 20 17 > 800 25.600 800 321 отр. отр. отр. + + > 400 40 21 7 1600 1600 отр. 323 отр. отр. отр. + + > 400 160 22 8 3200 6400 отр. 319 отр. отр. отр. отр. отр. 200 отр. 23 9 3200 6400 800 328 отр. отр. отр. + + 800 80 24 4 отр. отр. отр. 306 отр. отр. отр. + + 400 40 11 1600 3200 отр. 25 5 > 3200 51.200 200 322 отр. отр. отр. + + 200 80 26 9 1600 800 200 338 отр. отр. отр. + + 200 40 Примечание. У больных № 1-5, 9, 10, 12 наблюдалась нейроинвазивная форма ЛЗН, у остальных - лихорадочная форма. 3200 - обратная величина титра антител; отр. - отрицательный; ± - сомнительный; + - положительный результат при разведении сыворотки 1:100; н/о - сыворотка не обследована; Аст. - Астрахань; Влг - Волгоград; Мск - Москва. у реконвалесцентов, перенесших ЛЗН, и важное значение этого критерия для ее серологической диагностики, в 2013-2014 гг. с участием трех лабораторий (ЦГиЭ в Астраханской области, Волгоградского ПЧИ и НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского) было проведено обследование сывороток крови, взятых в Астраханской области у 26 реконвалесцентов с серологически подтвержденным диагнозом ЛЗН. Сыворотки собраны через 243-358 дней (8,1-11,9 мес), в среднем через 308 дня (10,2 мес) после начала заболевания. Обследование сывороток больных и реконвалесцентов в вирусологической лаборатории ЦГиЭ (Астрахань) и лаборатории биологии и индикации арбо- вирусов НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского было выполнено с использованием ИФА-IgM и ИФА-IgG тест-систем “Биоскрин” (ЗАО “Биосервис”, Москва) и экспериментальных наборов НИИ вирусологии. Для обследования сывороток реконвалесцентов в Волгоградском ПЧИ применяли тест-системы ИФА-IgM “Биоскрин” и ИФА-IgG “Euroimmun” (Германия) в соответствии с инструкциями производителей. Кроме того, сыворотки реконвалесцентов обследовали в НИИ вирусологии в реакции нейтрализации в культуре клеток Vero E6. Результаты и обсуждение Результаты исследования сывороток 24 (92,3%) из 26 реконвалесцентов на IgM антитела к вирусу ЛЗН оказались отрицательными. У реконвалесцентов № 2 и 8, по данным лабораторий в Астрахани и Москве, наблюдались низкие титры IgM (1:400) при незначительных показателях оптической плотности сывороток (0,3-0,4) и отрицательных результатах обследования в Волгоградском ПЧИ. Результаты анализа сывороток реконвалесцентов № 5 и 7 были слабоположительными или сомнительными при постановке в Волгоградском ПЧИ и оказались отрицательными при повторном обследовании в НИИ вирусологии. Специфические IgG антитела были обнаружены у 23 (88,5%) из 26 реконвалесцентов, вируснейтрализую- щие - у 22 (91,7%) из 24 (см. таблицу). По результатам суммарных исследований, выполненных нами в лабораториях Москвы, Волгограда и Астрахани в 1999-2000 [5] и 2013-2014 гг., из 66 реконвалесцентов, обследованных менее чем через год после заболевания лихорадкой ЗН, у 64 (97,0%) человек специфические IgM антитела отсутствовали, у 2 обнаружены (в лабораториях Астрахани и Москвы) в низких титрах (не достигающих диагностического уровня 1:800) при отрицательных результатах тестирования в Волгоградском ПЧИ. Эти данные подтверждают адекватность принятых в России критериев и тактики серологической диагностики ЛЗН, основанной на применении метода MAC-ELISA (ИФА-IgM). Расхождение данных разных авторов о длительности персистенции специфических IgM у реконвалесцентов, перенесших ЛЗН, можно объяснить несколькими причинами: 1) использование неравнозначных по характеристикам ИФА-IgM тест-систем разных производителей; 2) отсутствием в большинстве из них контроля “позитивных” сывороток с нормальным антигеном (что может привести к учету ложноположительных результатов); 3) возможным занижением фирмами-произ- водителями тест-систем пороговых уровней оптических плотностей, являющихся основой дифференциации положительных, сомнительных и отрицательных результатов обследования сывороток; 4) различиями в продолжительности сезона заболеваемости ЛЗН на территориях эндемичных стран, определяющими возможность повторного инфицирования в течение одного года; 5) различиями в числе обследованных больных ЛЗН с разными клиническими формами заболевания (нейроинфекционная, лихорадочная, инаппа- рантная); 6) возможностью перекрестных реакций антигенов вируса ЛЗН с сыворотками, содержащими антитела к гетерологичным флавивирусам. ORIGINAL INVESTIGATIONS Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки. Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Об авторах

Алла Рудольфовна Азарян

ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Астраханской области»

Email: tu_rpn@astrakhan.ru
414057, г. Астрахань, ул. Н. Островского/ Кирова, д. 122/89

А. А Козлова

ФГБУ ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава России

«Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского» 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, д. 18

А. П Гришанова

ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Астраханской области»

414057, г. Астрахань, ул. Н. Островского/ Кирова, д. 122/89

Е. И Иващенко

ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Астраханской области»

414057, г. Астрахань, ул. Н. Островского/ Кирова, д. 122/89

Г. Л Шендо

ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Астраханской области»

414057, г. Астрахань, ул. Н. Островского/ Кирова, д. 122/89

А. И Ковтунов

Управление Роспотребнадзора по Астраханской области

414057, г. Астрахань, ул. Н. Островского, д. 138

В. А Антонов

ФКУЗ «Волгоградский научноисследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора

Референс-центр по мониторингу за возбудителями лихорадки Западного Нила 400131, г. Волгоград, Голубинская, д. 7

Д. В Викторов

ФКУЗ «Волгоградский научноисследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора

Референс-центр по мониторингу за возбудителями лихорадки Западного Нила 400131, г. Волгоград, Голубинская, д. 7

В. П Смелянский

ФКУЗ «Волгоградский научноисследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора

Референс-центр по мониторингу за возбудителями лихорадки Западного Нила 400131, г. Волгоград, Голубинская, д. 7

Е. А Снатенков

ФКУЗ «Волгоградский научноисследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора

Референс-центр по мониторингу за возбудителями лихорадки Западного Нила 400131, г. Волгоград, Голубинская, д. 7

И. А Баркова

ФКУЗ «Волгоградский научноисследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора

Референс-центр по мониторингу за возбудителями лихорадки Западного Нила 400131, г. Волгоград, Голубинская, д. 7

В. Ф Ларичев

ФГБУ ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава России

«Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского» 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, д. 18

А. М Бутенко

ФГБУ ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи Минздрава России

«Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского» 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, д. 18

Список литературы

Дополнительные файлы