Влияние экспрессии киназы фокальных контактов и винкулина на параметры миграции нормальных и опухолевых эпителиоцитов

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Фокальные контакты (ФК) – это механосенсорные структуры, которые способны преобразовывать физические стимулы в химические сигналы, управляющие миграцией клеток. Существует корреляция между параметрами ФК и показателями клеточной подвижности для отдельных мигрирующих клеток. Однако какие именно параметры ФК являются критическими для движения эпителиальных клеток в составе монослоя, остаётся неизвестным. Мы использовали прижизненную съёмку клеток для описания взаимосвязи между параметрами ФК и миграцией иммортализованных эпителиальных кератиноцитов (HaCaT) и клеток карциномы лёгкого (A549) в условиях ингибирования или подавления транскрипции белков ФК винкулина и киназы фокальной адгезии (FAK). Чтобы оценить взаимосвязь между морфологией ФК и миграцией клеток, мы использовали субстраты разной эластичности в модели зарастания экспериментальной раны. ФК с максимальной площадью и максимальная скорость миграции в рану, а также высокий уровень экспрессии мРНК FAK и винкулина были показаны для клеток на фибронектине, тогда как минимальная площадь ФК и замедление скорости миграции в рану были характерны для клеток на стекле. Как в нормальных, так и в опухолевых клетках подавление экспрессии винкулина приводило к уменьшению размера ФК и интенсивности их флуоресценции, однако не влияло на скорость миграции клеток внутрь раны. Подавление экспрессии или ингибирование активности FAK не влияло на размер ФК, однако снижало время жизни ФК и значительно замедляло скорость миграции клеток внутрь раны как в клетках HaCaT, так и в A549. Наши данные показывают, что определяющим параметром для миграции эпителиальных клеток в составе монослоя является время жизни ФК. Показанное влияние киназы FAK на скорость миграции клеток в составе монослоя делает FAK многообещающей мишенью для противоопухолевой терапии аденокарциномы лёгких.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Е. С. Соломатина

Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова; Институт молекулярной биологии им. Энгельгардта РАН

Email: aleena.saidova@gmail.com
Россия, Москва; Москва

А. В. Ковалева

Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова; Институт молекулярной биологии им. Энгельгардта РАН

Email: aleena.saidova@gmail.com
Россия, Москва; Москва

А. В. Творогова

Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова

Email: aleena.saidova@gmail.com
Россия, Москва

И. А. Воробьев

Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова

Email: aleena.saidova@gmail.com
Россия, Москва

А. А. Саидова

Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова; Институт молекулярной биологии им. Энгельгардта РАН

Автор, ответственный за переписку.
Email: aleena.saidova@gmail.com
Россия, Москва; Москва

Список литературы

  1. Winograd-Katz, S. E., Fässler, R., Geiger, B., and Legate, K. R. (2014) The integrin adhesome: from genes and proteins to human disease, Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 15, 273-288, https://doi.org/10.1038/nrm3769.
  2. Chastney, M. R., Lawless, C., Humphries, J. D., Warwood, S., Jones, M. C., Knight, D., Jorgensen, C., and Humphries, M. J. (2020) Topological features of integrin adhesion complexes revealed by multiplexed proximity biotinylation, J. Cell. Biol., 219, e202003038, https://doi.org/10.1083/jcb.202003038.
  3. Paszek, M. J., DuFort, C. C., Rubashkin, M. G., Davidson, M. W., Thorn, K. S., Liphardt, J. T., and Weaver, V. M. (2012) Scanning angle interference microscopy reveals cell dynamics at the nanoscale, Nat. Methods, 9, 825-827, https://doi.org/10.1038/nmeth.2077.
  4. Stubb, A., Guzmán, C., Närvä, E., Aaron, J., Chew, T.-L., Saari, M., Miihkinen, M., Jacquemet, G., and Ivaska, J. (2019) Superresolution architecture of cornerstone focal adhesions in human pluripotent stem cells, Nat. Commun., 10, 4756, https://doi.org/10.1038/s41467-019-12611-w.
  5. Kleinschmidt, E. G., and Schlaepfer, D. D. (2017) Focal adhesion kinase signaling in unexpected places, Curr. Opin. Cell. Biol., 45, 24-30, https://doi.org/10.1016/j.ceb.2017.01.003.
  6. Schaller, M. D., and Parsons, J. T. (1995) pp125FAK-dependent tyrosine phosphorylation of paxillin creates a high-affinity binding site for Crk, Mol. Cell. Biol., 15, 2635-2645, https://doi.org/10.1128/MCB.15.5.2635.
  7. López-Colomé, A. M., Lee-Rivera, I., Benavides-Hidalgo, R., and López, E. (2017) Paxillin: a crossroad in pathological cell migration, J. Hematol. Oncol., 10, 50, https://doi.org/10.1186/s13045-017-0418-y.
  8. Richardson, A., Malik, R. K., Hildebrand, J. D., and Parsons, J. T. (1997) Inhibition of cell spreading by expression of the C-terminal domain of focal adhesion kinase (FAK) is rescued by coexpression of Src or catalytically inactive FAK: a role for paxillin tyrosine phosphorylation, Mol. Cell. Biol., 17, 6906-6914, https://doi.org/10.1128/MCB.17.12.6906.
  9. Fan, T., Chen, J., Zhang, L., Gao, P., Hui, Y., Xu, P., Zhang, X., and Liu, H. (2016) Bit1 knockdown contributes to growth suppression as well as the decreases of migration and invasion abilities in esophageal squamous cell carcinoma via suppressing FAK-paxillin pathway, Mol. Cancer, 15, 23, https://doi.org/10.1186/s12943-016-0507-5.
  10. Schlaepfer, D. D., Mitra, S. K., and Ilic, D. (2004) Control of motile and invasive cell phenotypes by focal adhesion kinase, Biochim. Biophys. Acta, 1692, 77-102, https://doi.org/10.1016/j.bbamcr.2004.04.008.
  11. Wang, S., Hwang, E. E., Guha, R., O’Neill, A. F., Melong, N., Veinotte, C. J., Conway Saur, A., Wuerthele, K., Shen, M., McKnight, C., Alexe, G., Lemieux, M. E., Wang, A., Hughes, E., Xu, X., Boxer, M. B., Hall, M. D., Kung, A., Berman, J. N., Davis, M. I., Stegmaier, K., and Crompton, B. D. (2019) High-throughput chemical screening identifies focal adhesion kinase and Aurora kinase B inhibition as a synergistic treatment combination in Ewing sarcoma, Clin. Cancer Res., 25, 4552-4566, https://doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-17-0375.
  12. Demircioglu, F., Wang, J., Candido, J., Costa, A. S. H., Casado, P., De Luxan Delgado, B., Reynolds, L. E., Gomez-Escudero, J., Newport, E., Rajeeve, V., Baker, A.-M., Roy-Luzarraga, M., Graham, T. A., Foster, J., Wang, Y., Campbell, J. J., Singh, R., Zhang, P., Schall, T. J., Balkwill, F. R., Sosabowski, J., Cutillas, P. R., Frezza, C., Sancho, P., and Hodivala-Dilke, K. (2020) Cancer associated fibroblast FAK regulates malignant cell metabolism, Nat. Commun., 11, 1290, https://doi.org/10.1038/s41467-020-15104-3.
  13. Serrels, A., Lund, T., Serrels, B., Byron, A., McPherson, R. C., von Kriegsheim, A., Gómez-Cuadrado, L., Canel, M., Muir, M., Ring, J. E., Maniati, E., Sims, A. H., Pachter, J. A., Brunton, V. G., Gilbert, N., Anderton, S. M., Nibbs, R. J. B., and Frame, M. C. (2015) Nuclear FAK controls chemokine transcription, Tregs, and evasion of anti-tumor immunity, Cell, 163, 160-173, https://doi.org/10.1016/j.cell.2015.09.001.
  14. Tavora, B., Reynolds, L. E., Batista, S., Demircioglu, F., Fernandez, I., Lechertier, T., Lees, D. M., Wong, P.-P., Alexopoulou, A., Elia, G., Clear, A., Ledoux, A., Hunter, J., Perkins, N., Gribben, J. G., and Hodivala-Dilke, K. M. (2014) Endothelial-cell FAK targeting sensitizes tumours to DNA-damaging therapy, Nature, 514, 112-116, https://doi.org/ 10.1038/nature13541.
  15. You, D., Xin, J., Volk, A., Wei, W., Schmidt, R., Scurti, G., Nand, S., Breuer, E.-K., Kuo, P. C., Breslin, P., Kini, A. R., Nishimura, M. I., Zeleznik-Le, N. J., and Zhang, J. (2015) FAK mediates a compensatory survival signal parallel to PI3K-AKT in PTEN-Null T-all cells, Cell Rep., 10, 2055-2068, https://doi.org/10.1016/j.celrep.2015.02.056.
  16. Adutler-Lieber, S., Zaretsky, I., Platzman, I., Deeg, J., Friedman, N., Spatz, J. P., and Geiger, B. (2014) Engineering of synthetic cellular microenvironments: implications for immunity, J. Autoimmun., 54, 100-111, https://doi.org/ 10.1016/j.jaut.2014.05.003.
  17. Cavalcanti-Adam, E. A., Volberg, T., Micoulet, A., Kessler, H., Geiger, B., and Spatz, J. P. (2007) Cell spreading and focal adhesion dynamics are regulated by spacing of integrin ligands, Biophys. J., 92, 2964-2974, https://doi.org/10.1529/biophysj.106.089730.
  18. Chiu, C.-L., Aguilar, J. S., Tsai, C. Y., Wu, G., Gratton, E., and Digman, M. A. (2014) Nanoimaging of focal adhesion dynamics in 3D, PLoS One, 9, e99896, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0099896.
  19. Engler, A. J., Sen, S., Sweeney, H. L., and Discher, D. E. (2006) Matrix elasticity directs stem cell lineage specification, Cell, 126, 677-689, https://doi.org/10.1016/j.cell.2006.06.044.
  20. Doyle, A. D., Carvajal, N., Jin, A., Matsumoto, K., and Yamada, K. M. (2015) Local 3D matrix microenvironment regulates cell migration through spatiotemporal dynamics of contractility-dependent adhesions, Nat. Commun., 6, 8720, https://doi.org/10.1038/ncomms9720.
  21. Yue, J., Zhang, Y., Liang, W. G., Gou, X., Lee, P., Liu, H., Lyu, W., Tang, W.-J., Chen, S.-Y., Yang, F., Liang, H., and Wu, X. (2016) In vivo epidermal migration requires focal adhesion targeting of ACF7, Nat. Commun., 7, 11692, https:// doi.org/10.1038/ncomms11692.
  22. Kim, D., and Wirtz, D. (2013) Focal adhesion size uniquely predicts cell migration, FASEB J., 27, 1351-1361, https://doi.org/10.1096/fj.12-220160.
  23. Thompson, O., Moore, C. J., Hussain, S.-A., Kleino, I., Peckham, M., Hohenester, E., Ayscough, K. R., Saksela, K., and Winder, S. J. (2010) Modulation of cell spreading and cell-substrate adhesion dynamics by dystroglycan, J. Cell. Sci., 123, 118-127, https://doi.org/10.1242/jcs.047902.
  24. Kauanova, S., Urazbayev, A., and Vorobjev, I. (2021) The frequent sampling of Wound scratch assay reveals the “opportunity” window for quantitative evaluation of cell motility-impeding drugs, Front. Cell Dev. Biol., 9, 640972, https://doi.org/10.3389/fcell.2021.640972.
  25. Vandesompele, J., Preter, K. D., Roy, N. V., and Paepe, A. D. (2002) Accurate normalization of real-time quantitative RT-PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes, Genome Biol., 3, research0034.1, https:// doi.org/10.1186/gb-2002-3-7-research0034.
  26. Abramoff, M. D., Magalhaes, P. J., and Ram, S. J. (2004) Image processing with ImageJ, Biophotonics Int., 11, 36-42.
  27. Gladkikh, A., Kovaleva, A., Tvorogova, A., and Vorobjev, I. A. (2018) Heterogeneity of focal adhesions and focal contacts in motile fibroblasts, Methods Mol. Biol., 1745, 205-218, https://doi.org/10.1007/978-1-4939-7680-5_12.
  28. Guan, J. L., Trevithick, J. E., and Hynes, R. O. (1991) Fibronectin/integrin interaction induces tyrosine phosphorylation of a 120-kDa protein, Cell. Regul., 2, 951-964, https://doi.org/10.1091/mbc.2.11.951.
  29. Kornberg, L., Earp, H. S., Parsons, J. T., Schaller, M., and Juliano, R. L. (1992) Cell adhesion or integrin clustering increases phosphorylation of a focal adhesion-associated tyrosine kinase, J. Biol. Chem., 267, 23439-23442, https:// doi.org/10.1016/S0021-9258(18)35853-8.
  30. Chuang, H.-H., Zhen, Y.-Y., Tsai, Y.-C., Chuang, C.-H., Hsiao, M., Huang, M.-S., and Yang, C.-J. (2022) FAK in cancer: from mechanisms to therapeutic strategies, Int. J. Mol. Sci., 23, 1726, https://doi.org/10.3390/ijms23031726.
  31. Golubovskaya, V. (2014) Targeting FAK in human cancer: from finding to first clinical trials, Front. Biosci, 19, 687, https://doi.org/10.2741/4236.
  32. Rigiracciolo, D. C., Cirillo, F., Talia, M., Muglia, L., Gutkind, J. S., Maggiolini, M., and Lappano, R. (2021) Focal adhesion kinase fine tunes multifaced signals toward breast cancer progression, Cancers, 13, 645, https://doi.org/ 10.3390/cancers13040645.
  33. Hirt, U. A., Waizenegger, I. C., Schweifer, N., Haslinger, C., Gerlach, D., Braunger, J., Weyer-Czernilofsky, U., Stadtmüller, H., Sapountzis, I., Bader, G., Zoephel, A., Bister, B., Baum, A., Quant, J., et al. (2018) Efficacy of the highly selective focal adhesion kinase inhibitor BI 853520 in adenocarcinoma xenograft models is linked to a mesenchymal tumor phenotype, Oncogenesis, 7, 21, https://doi.org/10.1038/s41389-018-0032-z.
  34. Kanteti, R., Mirzapoiazova, T., Riehm, J. J., Dhanasingh, I., Mambetsariev, B., Wang, J., Kulkarni, P., Kaushik, G., Seshacharyulu, P., Ponnusamy, M. P., Kindler, H. L., Nasser, M. W., Batra, S. K., and Salgia, R. (2018) Focal adhesion kinase a potential therapeutic target for pancreatic cancer and malignant pleural mesothelioma, Cancer Biol. Ther., 19, 316-327, https://doi.org/10.1080/15384047.2017.1416937.
  35. Slack-Davis, J. K., Martin, K. H., Tilghman, R. W., Iwanicki, M., Ung, E. J., Autry, C., Luzzio, M. J., Cooper, B., Kath, J. C., Roberts, W. G., and Parsons, J. T. (2007) Cellular characterization of a novel focal adhesion kinase inhibitor, J. Biol. Chem., 282, 14845-14852, https://doi.org/10.1074/jbc.M606695200.
  36. Tiede, S., Meyer-Schaller, N., Kalathur, R. K. R., Ivanek, R., Fagiani, E., Schmassmann, P., Stillhard, P., Häfliger, S., Kraut, N., Schweifer, N., Waizenegger, I. C., Bill, R., and Christofori, G. (2018) The FAK inhibitor BI 853520 exerts anti-tumor effects in breast cancer, Oncogenesis, 7, 73, https://doi.org/10.1038/s41389-018-0083-1.
  37. Zhang, J., He, D.-H., Zajac-Kaye, M., and Hochwald, S. N. (2014) A small molecule FAK kinase inhibitor, GSK2256098, inhibits growth and survival of pancreatic ductal adenocarcinoma cells, Cell Cycle, 13, 3143-3149, https:// doi.org/10.4161/15384101.2014.949550.
  38. Katoh, K. (2020) FAK-dependent cell motility and cell elongation, Cells, 9, 192, https://doi.org/10.3390/cells9010192.
  39. Murphy, J. M., Rodriguez, Y. A. R., Jeong, K., Ahn, E.-Y. E., and Lim, S.-T. S. (2020) Targeting focal adhesion kinase in cancer cells and the tumor microenvironment, Exp. Mol. Med., 52, 877-886, https://doi.org/10.1038/s12276- 020-0447-4.
  40. Horton, E. R., Humphries, J. D., Stutchbury, B., Jacquemet, G., Ballestrem, C., Barry, S. T., and Humphries, M. J. (2016) Modulation of FAK and Src adhesion signaling occurs independently of adhesion complex composition, J. Cell. Biol., 212, 349-364, https://doi.org/10.1083/jcb.201508080.
  41. Lawson, C., Lim, S.-T., Uryu, S., Chen, X. L., Calderwood, D. A., and Schlaepfer, D. D. (2012) FAK promotes recruitment of talin to nascent adhesions to control cell motility, J. Cell. Biol., 196, 223-232, https://doi.org/10.1083/jcb.201108078.
  42. Huveneers, S., and Danen, E. H. J. (2009) Adhesion signaling – crosstalk between integrins, Src and Rho, J. Cell. Sci., 122, 1059-1069, https://doi.org/10.1242/jcs.039446.
  43. Kallergi, G., Agelaki, S., Markomanolaki, H., Georgoulias, V., and Stournaras, C. (2007) Activation of FAK/PI3K/Rac1 signaling controls actin reorganization and inhibits cell motility in human cancer cells, Cell. Physiol. Biochem., 20, 977-986, https://doi.org/10.1159/000110458.
  44. Bell, S., and Terentjev, E. M. (2017) Focal adhesion kinase: the reversible molecular mechanosensor, Biophys. J., 1 12, 2439-2450, https://doi.org/10.1016/j.bpj.2017.04.048.
  45. Zhou, D. W., Lee, T. T., Weng, S., Fu, J., and García, A. J. (2017) Effects of substrate stiffness and actomyosin contractility on coupling between force transmission and vinculin-paxillin recruitment at single focal adhesions, Mol. Biol. Cell, 28, 1901-1911, https://doi.org/10.1091/mbc.e17-02-0116.
  46. Boyd, N. F., Li, Q., Melnichouk, O., Huszti, E., Martin, L. J., Gunasekara, A., Mawdsley, G., Yaffe, M. J., and Minkin, S. (2014) Evidence that breast tissue stiffness is associated with risk of breast cancer, PLoS One, 9, e100937, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100937.
  47. Levental, K. R., Yu, H., Kass, L., Lakins, J. N., Egeblad, M., Erler, J. T., Fong, S. F. T., Csiszar, K., Giaccia, A., Weninger, W., Yamauchi, M., Gasser, D. L., and Weaver, V. M. (2009) Matrix crosslinking forces tumor progression by enhancing integrin signaling, Cell, 139, 891-906, https://doi.org/10.1016/j.cell.2009.10.027.
  48. Hamidi, H., and Ivaska, J. (2018) Every step of the way: integrins in cancer progression and metastasis, Nat. Rev. Cancer, 18, 533-548, https://doi.org/10.1038/s41568-018-0038-z.
  49. Su, C., Li, J., Zhang, L., Wang, H., Wang, F., Tao, Y., Wang, Y., Guo, Q., Li, J., Liu, Y., Yan, Y., and Zhang, J. (2020) The Biological Functions and Clinical Applications of Integrins in Cancers, Front. Pharmacol., 11, 579068, https:// doi.org/10.3389/fphar.2020.579068.
  50. Llić, D., Furuta, Y., Kanazawa, S., Takeda, N., Sobue, K., Nakatsuji, N., Nomura, S., Fujimoto, J., Okada, M., Yamamoto, T., and Aizawa, S. (1995) Reduced cell motility and enhanced focal adhesion contact formation in cells from FAK-deficient mice, Nature, 377, 539-544, https://doi.org/10.1038/377539a0.
  51. Rahman, A., Carey, S. P., Kraning-Rush, C. M., Goldblatt, Z. E., Bordeleau, F., Lampi, M. C., Lin, D. Y., García, A. J., and Reinhart-King, C. A. (2016) Vinculin regulates directionality and cell polarity in 2D, 3D matrix and 3D microtrack migration, Mol. Biol. Cell, 27, 1431-1441, https://doi.org/10.1091/mbc.E15-06-0432.
  52. Bejar-Padilla, V., Cabe, J. I., Lopez, S., Narayanan, V., Mezher, M., Maruthamuthu, V., and Conway, D. E. (2022) α-Catenin-dependent vinculin recruitment to adherens junctions is antagonistic to focal adhesions, Mol. Biol. Cell, 33, ar93, https://doi.org/10.1091/mbc.E22-02-0071.
  53. Iwanicki, M. P., Vomastek, T., Tilghman, R. W., Martin, K. H., Banerjee, J., Wedegaertner, P. B., and Parsons, J. T. (2008) FAK, PDZ-RhoGEF and ROCKII cooperate to regulate adhesion movement and trailing-edge retraction in fibroblasts, J. Cell. Sci., 121, 895-905, https://doi.org/10.1242/jcs.020941.
  54. Xiao, W., Jiang, M., Li, H., Li, C., Su, R., and Huang, K. (2013) Knockdown of FAK inhibits the invasion and metastasis of Tca-8113 cells in vitro, Mol. Med. Rep., 8, 703-707, https://doi.org/10.3892/mmr.2013.1555.
  55. Fraley, S. I., Feng, Y., Krishnamurthy, R., Kim, D.-H., Celedon, A., Longmore, G. D., and Wirtz, D. (2010) A distinctive role for focal adhesion proteins in three-dimensional cell motility, Nat. Cell. Biol., 12, 598-604, https:// doi.org/10.1038/ncb2062.
  56. Giannone, G., Rondé, P., Gaire, M., Beaudouin, J., Haiech, J., Ellenberg, J., and Takeda, K. (2004) Calcium rises locally trigger focal adhesion disassembly and enhance residency of focal adhesion kinase at focal adhesions, J. Biol. Chem., 279, 28715-28723, https://doi.org/10.1074/jbc.M404054200.
  57. Webb, D. J., Donais, K., Whitmore, L. A., Thomas, S. M., Turner, C. E., Parsons, J. T., and Horwitz, A. F. (2004) FAK-Src signalling through paxillin, ERK and MLCK regulates adhesion disassembly, Nat. Cell. Biol., 6, 154-161, https:// doi.org/10.1038/ncb1094.
  58. Von Wichert, G. (2003) Force-dependent integrin-cytoskeleton linkage formation requires downregulation of focal complex dynamics by Shp2, EMBO J., 22, 5023-5035, https://doi.org/10.1093/emboj/cdg492.
  59. Horikiri, Y., Shimo, T., Kurio, N., Okui, T., Matsumoto, K., Iwamoto, M., and Sasaki, A. (2013) Sonic hedgehog regulates osteoblast function by focal adhesion kinase signaling in the process of fracture healing, PLoS One, 8, e76785, https://doi.org/10.1371/journal.pone.0076785.
  60. Mayor, R., and Etienne-Manneville, S. (2016) The front and rear of collective cell migration, Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 17, 97-109, https://doi.org/10.1038/nrm.2015.14.
  61. Szabó, B., Szöllösi, G. J., Gönci, B., Jurányi, Zs., Selmeczi, D., and Vicsek, T. (2006) Phase transition in the collective migration of tissue cells: experiment and model, Phys. Rev. E, 74, 061908, https://doi.org/10.1103/PhysRevE.74.061908.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Морфология ФК коррелирует со скоростью зарастания раны на субстратах различной жёсткости. а – Морфология ФК в клетках A549 и HaCaT со стабильной экспрессией винкулина-RFP, размерный отрезок 10 мкм, С – стекло, ФН – фибронектин, приведены фотографии краевых клеток в составе монослоя. б – Медианная площадь ФК в клетках A549 на субстратах различной жёсткости, центральная горизонтальная линия – медиана. **** Достоверное отличие от контроля, р < 0,001. в – Степень зарастания экспериментальной раны в % от площади на первом кадре съёмки для клеток A549 на стекле (1), поли-D-лизине (2), витронектине (3) и фибронектине (4)

Скачать (433KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Нормализованная экспрессия мРНК винкулина (а, в) и FAK (б, д) в клетках A549 и HaCaT в контроле и после подавления в клетках экспрессии мРНК винкулина или FAK. Все измерения проводили в трипликате, данные нормализовали по генам UBC и HPRT1. Обозначения: (1) контрольные клетки на стекле, (2) контрольные клетки на фибронектине, (3) клетки с миРНК к винкулину на стекле, (4) клетки с миРНК к винкулину на фибронектине, (5) клетки с миРНК к FAK на стекле, (6) клетки с миРНК к FAK на фибронектине, (7) клетки с миРНК к GFP. ** Достоверное отличие от контроля, р < 0,01;*** достоверное отличие от контроля, р < 0,001

Скачать (362KB)
Метаданные
4. Рис. 3. Параметры ФК и скорость зарастания раны клетками линии A549 после подавления экспрессии мРНК FAK или винкулина. а – Морфология ФК на стекле и фибронектине в контроле и после нокдауна винкулина (KD vin), размерный отрезок 10 мкм. б – Окрашивание фиксированных клеток A549 со стабильной экспрессией винкулина-RFP антителами к паксиллину. Обозначения: 1 – контроль, 2 – клетки с миРНК к винкулину, 3 – клетки с миРНК к FAK, I – окраска антителами к винкулину, II – окраска антителами к паксиллину, III – наложение. в – Время жизни ФК в клетках А549, жирные горизонтальные линии представляют собой медианы. Обозначения: 1 – контрольные клетки на фибронектине, 2 – контрольные клетки на стекле, 3 – клетки с миРНК к винкулину на фибронектине, 4 – клетки с миРНК к винкулину на стекле, 5 – клетки с миРНК к FAK на фибронектине, 6 – клетки с миРНК к FAK на стекле. ** Достоверное отличие от контроля, р < 0,01. г – Морфология зарастания экспериментальной раны клетками А549 на фибронектине и на стекле в контроле (1) и после нокдауна винкулина (2). д – Степень зарастания экспериментальной раны в % от площади на первом кадре съёмки для клеток A549 на фибронектине в контроле (1), на фибронектине в клетках с миРНК к винкулину (2), на стекле в контроле (3) и на стекле в клетках с миРНК к винкулину (4). е – Степень зарастания экспериментальной раны в % от площади на первом кадре съёмки для клеток A549 на фибронектине в контроле (1), на фибронектине в клетках с миРНК к FAK(2), на стекле в контроле (3) и на стекле в клетках с миРНК к FAK (4). ж – Морфология зарастания экспериментальной раны клетками А549 на фибронектине и на стекле в контроле (1) и после нокдауна FAK (2). Количество экспериментов для каждого анализа зарастания раны приведено в табл. S3 Приложения

Скачать (932KB)
Метаданные
5. Рис. 4. Параметры ФК и скорость зарастания раны клетками линии HaCaT после подавления экспрессии мРНК FAK или винкулина. а – Морфология ФК на стекле и фибронектине в контроле и после нокдауна винкулина (KD vin), размерный отрезок 10 мкм. б – Окрашивание фиксированных клеток HaCaT со стабильной экспрессией винкулина RFP антителами к паксиллину, 1 – контроль, 2 – клетки с миРНК к винкулину, 3 – клетки с миРНК к FAK, I – окраска антителами к винкулину, II – окраска антителами к паксиллину, III – наложение. в – Время жизни ФК в клетках HaCaT, жирные горизонтальные линии представляют собой медианы. Обозначения: (1) контрольные клетки на фибронектине, (2) контрольные клетки на стекле, (3) клетки с миРНК к FAK на фибронектине, (4) клетки с миРНК к FAK на стекле. ** Достоверное отличие от контроля, р < 0,01; **** достоверное отличие от контроля, р < 0,0001. г – Морфология зарастания экспериментальной раны клетками HaCaT на стекле в контроле (1), после нокдауна винкулина (2) и после нокдауна FAK (3). д – Степень зарастания экспериментальной раны в % от площади на первом кадре съёмки для клеток A549 на фибронектине в контроле (1), на фибронектине в клетках с миРНК к винкулину (2), на стекле в контроле (3) и на стекле в клетках с миРНК к винкулину (4). е – Степень зарастания экспериментальной раны в % от площади на первом кадре съёмки для клеток A549 на фибронектине в контроле (1), на фибронектине в клетках с миРНК к FAK (2), на стекле в контроле (3) и на стекле в клетках с миРНК к FAK (4). ж – Морфология зарастания экспериментальной раны клетками А549 на фибронектине и на стекле в контроле (1), после нокдауна винкулина (2) и после нокдауна FAK (3). Количество экспериментов для каждого анализа зарастания раны приведено в табл. S3 Приложения

Скачать (888KB)
Метаданные
6. Рис. 5. Зарастание экспериментальной раны на фибронектине и стекле. а – Зарастание экспериментальной раны клетками A549 на фибронектине и на стекле в контроле (1) и после инкубации с 1 мкМ PF-573228 (2). б – Зарастание модельной раны клетками HaCaT на фибронектине и на стекле в контроле (1) и после инкубации с 1 мкМ PF-573228 (2). в – Степень зарастания экспериментальной раны в % от площади на первом кадре съёмки для клеток A549 на фибронектине в контроле (1), на фибронектине в клетках после инкубации с 1 мкМ PF-573228 (2), на стекле в контроле (3) и на стекле в клетках после инкубации с 1 мкМ PF-573228 (4). г – Степень зарастания экспериментальной раны в % от площади на первом кадре съёмки для клеток HaCaT на фибронектине в контроле (1), на фибронектине в клетках после инкубации с 1 мкМ PF-573228 (2), на стекле в контроле (3) и на стекле в клетках после инкубации с 1 мкМ PF-573228 (4)

Скачать (1MB)
Метаданные

© Российская академия наук, 2024