Epidemiology and Infectious DiseasesEpidemiology and Infectious DiseasesЭпидемиология и инфекционные болезни3034-20073034-2015Eco-Vector4262910.17816/EID42629ArticlesСтатьиResearch ArticleTHE INVESTIGATION OF DNA DAMAGE IN LYMPHOCYTES BY COMET ASSAY IN CHRONIC VIRAL HEPATITIS B PATIENTSИССЛЕДОВАНИЕ ПОВРЕЖДЕНИЙ ДНК ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ В МЕТОДОМ ДНК-КОМЕТMikhailovA. OМихайловАлександр Олеговичmao1991@mail.ruPopovA. FПоповАлександр ФедоровичIvanovaN. SИвановаНадежда СеменовнаSimakovaA. IСимаковаАнна ИвановнаPacific State Medical UniversityФГБОУ ВО «Тихоокеанский государственный медицинский университет» Минздрава России15042017222VOL 22, NO2 (2017)ТОМ 22, №2 (2017)646821082020Copyright ©; 2017, Eco-vectorCopyright ©; 2017, ООО "Эко-вектор"2017Eco-vectorООО "Эко-вектор"https://rjeid.com/1560-9529/article/view/42629

The investigation of the degree of the lymphocyte DNA damage in chronic viral hepatitis B (HBV) patients is of interest for several reasons. Firstly, it is possible to judge indirectly about the depth of the pathological process at the level of the whole organism, with bearing in mind features of the pathogenic replication of hepatitis B virus. Secondly, it is possible to give an estimation of the degree of genotoxic impact of the virus on blood cells that plays an essential role in the shaping of the immune response of the body. The study was executed on 50 blood samples from HBV patients, divided in 5 groups on the fibrosis grade according to METAVIR score: F0 (n = 10), F1 (N = 10), F2 (N = 10), F3 (n = 10), F4 (n = 10). The control group was consisted of 43 volunteers matched by the age and gender without concomitant diseases. From blood samples taken at the time of the admission to the hospital lymphocytes were isolated by density gradient on Ficoll-urografin. The degree of DNA damage in lymphocytes was determined by virtue of alkaline version of the DNA comet assay. There was noted the direct relationship between an increase in % DNA in the tail of comets and the grade of liver fibrosis. So in the control group, % DNA in the tail accounted for 3.75 ± 1.44. In the F0 group % of DNA in the tail was 5.07 ± 1.25, F1 - 6.79 ± 1.79, F2 - 7.65 ± 1.62, F3 - 8.05 ± 1.18, F4 - 9.84 ± 3.09. It is noteworthy that in groups F2, F3, F4 differences were statistically significant in comparison with the control group. Also there was noted the presence of apoptotic cells in F3, F4 groups: 1 and 0.88%, respectively. Identified changes are both important in the description of to molecular patterns of the pathogenesis of chronic hepatitis B associated with damage, and also can serve as an indirect indication of the stage of liver fibrosis.

Исследование степени повреждения ДНК лимфоцитов при хроническом вирусном гепатите В (ХВГВ) представляет интерес по ряду причин. Во-первых, можно косвенно судить о глубине патологического процесса на уровне всего организма, учитывая патогенетические особенности репликации вируса гепатита. Во-вторых, дать оценку степени генотоксического действия вируса на клетки крови, что играет существенную роль при формировании иммунного ответа организма. Исследование проведено на 50 образцах крови больных ХВГВ, которые в зависимости от степени выраженности фиброза по шкале METAVIR поделены на 5 групп (в каждой группе n = 10): F0, F1, F2, F3, F4. Контрольную группу составили 43 добровольца, сопоставимых по полу и возрасту, без сопутствующих заболеваний. Из образцов крови, взятых во время поступления в стационар, выделяли лимфоциты на градиенте плотности фиколл-урографин и исследовали степень повреждения ДНК в клетках щелочным вариантом метода ДНК-комет. Отмечалась прямая зависимость между % ДНК в хвосте комет и степенью фиброза печени. Так, в контрольной группе доля ДНК в хвосте кометы составила 3,75±1,44%; в группе F0 - 5,07±1,25%; F1 - 6,79±1,79%, F2 - 7,65±1,62%, F3 - 8,05±1,18%, F4 - 9,84±3,09%. Статистически значимые различия по сравнению с контрольной группой наблюдались в группах с выраженностью фиброза - F2, F3, F4. Также отмечалось наличие апоптотических клеток в группах F3 и F4 - 1 и 0,88% соответственно. Выявленные изменения важны в описании ассоциированных с повреждением молекулярных паттернов патогенеза хронического вирусного гепатита В, а также могут служить косвенным признаком стадии фиброза печени.

DNA comet assayhepatitis Bfibrosisметод ДНК-кометгепатит ВфиброзBalogh J., Victor D., Asham E.H., Burroughs S.G. Hepatocellular carcinoma: a review. J. Hepatocell. Carcinoma. 2016; 3: 41-53.Ucur A., Palanduz S., Cefle K., Ozturk S., Tutkan G., Vatansever S. et al. Sister chromatid exchange and mitotic index in patients with cirrhosis related to hepatitis B and C viruses and in chronic carriers. Hepatogastroenterology. 2003; 50 (54): 2137-40.Bhargava A., Khan S., Panwar H., Pathak N., Punde R.P. et al. Occult hepatitis B virus infection with low viremia induces DNA damage, apoptosis and oxidative stress in peripheral blood lymphocytes. Virus Res. 2010; 153 (1): 143-50.Kasai H. What causes human cancer? Approaches from the chemistry of DNA damage. Free Genes Environ. 2016; 38: 19.Bolukbas C., Bolukbas F.F., Kocyigit A., Aslan M., Selek S. et al. Relationship between levels of DNA damage in lymphocytes and histopathological severity of chronic hepatitis C and various clinical forms of hepatitis B. J. Gastroenterol. Hepatol. 2006; 21 (3): 610-6.Grossi S., Sumberaz A., Gosmar M., Mattioli F., Testino G., Martelli A. DNA damage in peripheral blood lymphocytes of patients with cirrhosis related to alcohol abuse or to hepatitis B and C viruses. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 2008; 20 (1): 22-5.Sakae P.N., Ihara S.S., Ribeiro D.A., de Carvalho L., Parise E.R. Insulin resistance is associated with DNA damage in peripheral blood cells in non-diabetic patients with genotype 1 chronic hepatitis C. Free Radic. Res. 2013; 47 (9): 750-6.Решетняк В.И., Шарафанова Т.И., Ильченко Л.Ю. Порошенко Г.Г. Исследование структуры ДНК лимфоцитов периферической крови у больных хроническими вирусными поражениями печени. Бюлл. экспер. биол. 2002; (4): 459-62.Olive P.L., Banáth J.P., Durand R.E. Detection of etoposide resistance by measuring DNA damage in individual Chinese hamster cells. J. Natl. Cancer Inst. 1990; 82 (9): 779-83.Байкова Т.А., Лопаткина Т.Н. Многообразие внепеченочных проявлений хронических вирусных гепатитов B и C, общие принципы лечения. Тер. арх. 2013; 85 (4): 106-10.Alavian S.M., Showraki A. Hepatitis B and its relationship with oxidative stress. Hepat. Mon. 2016; 16 (9): e37 973.Tarocchi M., Polvani S., Marroncini G., Galli A. Molecular mechanism of hepatitis B virus-induced hepatocarcinogenesis. World J. Gastroenterol. 2014; 20 (33): 11 630-40.Дюйзен И.В., Иванис В.А., Михайлов А.О., Менчинская Е.С. и др. Исследование содержания нейрональных маркеров при некоторых инфекционных заболеваниях. Тихоокеанский медицинский журнал. 2015; 60 (2): 27-30.Su T.H., Kao J.H., Liu C.J. Molecular mechanism and treatment of viral hepatitis-related liver fibrosis. Int. J. Mol. Sci. 2014; 15 (6): 10 578-604.