Role of extracellular vesicles in chronic opisthorchiasis

Full Text

ОБОСНОВАНИЕ

Описторхоз — биогельминтоз, поражающий преимущественно гепатобилиарную систему, поджелудочную железу, а также другие органы с нарушением их структуры и функции [1, 2]. Обь-Иртышский бассейн является крупнейшим эндемичным очагом описторхоза. Так, уровень заболеваемости данной инвазией на территории Алтайского края превышает многолетний общероссийский показатель в 2 и более раза. В 2023 году заболеваемость возросла до 58,14 случаев на 100 тысяч населения, а показатель поражённости рыбы семейства карповых составил от 70 до 90% [3, 4].

Полиморфизм и неспецифичность клинических проявлений описторхоза обусловливают необходимость междисциплинарного подхода и разработки единой стратегии оказания помощи таким больным [5–8]. Клинические проявления инвазии не ограничиваются зоной первичного обитания описторхов и сопровождаются нарушением функций различных органов и систем: печени, почек, а также иммунной, сердечно-сосудистой, дыхательной и других систем [9–11]. Клинический полиморфизм описторхозной инвазии включает кардиальную симптоматику: кардиалгию, тахикардию, выраженную аритмию, эпизоды повышения артериального давления. Данные проявления, выявленные у 33% больных хроническим описторхозом длительностью более пяти лет [12], подчёркивают актуальность проблемы прогнозирования и раннего выявления рисков кардиоваскулярных событий как одной из приоритетных задач практического здравоохранения. Проведённые исследования с применением суточного мониторирования электрокардиограммы и артериального давления, вегетативной дисфункции выявили достоверное повышение частоты сердечных сокращений (ЧСС) с преобладанием влияния симпатического отдела вегетативной нервной системы [12]. Согласно байесовской оценке, вероятность кардиоваскулярных нарушений при описторхозной инвазии составляет не менее 69% случаев, а средняя оценка достигает 88% [12]. В спектре патогенетически значимых маркёров рисков кардиоваскулярных нарушений предиктивное значение имеет повышение ЧСС, которое отмечают при хроническом описторхозе не менее чем у 79,6% пациентов (95% доверительный интервал: 79,6–97,2%; средняя оценка: 90,5%) [12].

При нарушениях липидного обмена, выявленных у 79,4% больных хроническим описторхозом, в качестве маркёра риска развития кардиоваскулярных событий регистрировали повышение индекса атерогенности [13]. Согласно исследованиям, повышение этого показателя у больных описторхозом наблюдают не менее чем в 60% случаев (в среднем в 82%). Следует отметить, что это происходит даже при нормальной концентрации общего холестерина, что позволяет считать его значимым предиктором сердечно-сосудистых заболеваний [13].

В оценке роли эндотелиальной дисфункции и воспаления как факторов риска кардиоваскулярных событий [14, 15] представляет практический интерес изучение межклеточной коммуникации. Данные процессы регулируются посредством внеклеточных везикул (ВВ), роль которых в реализации межклеточных взаимосвязей, воспалении, атерогенезе и гемостазе значительна. ВВ представляют собой частицы, ограниченные липидным бислоем, которые высвобождаются всеми типами клеток. Они не способны к самостоятельной репликации (не содержат функционального ядра), обладают молекулярной и структурной неоднородностью и несут на своей поверхности маркёрные белки родительских клеток, что делает возможным их фенотипирование [16]. Последние данные показывают, что ВВ участвуют в развитии атеросклероза и гипертензии, оказывая влияние на сердечно-сосудистую функцию, а также регулируют тромбоз, стимулируя коагуляцию [17, 18]. Соотношение ВВ отражает дисбаланс между процессами повреждения эндотелия и регенерации при патологиях, что определяет их практическую значимость в качестве маркёра диагностики, прогнозирования и оценки эффективности лечения [17–20]. Именно это положение легло в основу впервые проведённой оценки их роли при хроническом описторхозе.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Проанализировать содержание внеклеточных везикул в крови и их возможную связь с проявлениями кардиоваскулярных нарушений и показателями липидного обмена у больных хроническим описторхозом.

МЕТОДЫ

Дизайн исследования

Проведено наблюдательное проспективное выборочное контролируемое многоцентровое исследование. Дизайн исследования представлен на рис. 1.

 

Рис. 1. Дизайн исследования.

 

Критерии соответствия

Критерии включения:

• лабораторно подтверждённый хронический описторхоз;
• возраст: мужчины — 18–45 лет, женщины — 18–55 лет;
• наличие добровольного информированного согласия на участие в исследовании.

Критерии невключения:

• наличие других паразитарных инвазий;
• наличие острых и хронических заболеваний печени инфекционной и иной природы;
• наличие в анамнезе кардиоваскулярных заболеваний;
• отягощённый семейный анамнез по кардиоваскулярным заболеваниям;
• наличие факторов риска кардиоваскулярных событий: курение, злоупотребление алкоголем, метаболический синдром.

Критерии исключения:

• отказ от дальнейшего обследования.

Группу контроля сформировали из лиц, которые никогда не употребляли рыбу из семейства карповых и имели трёхкратный отрицательный результат исследования кала на яйца гельминтов.

Условия проведения

Клиническое обследование пациентов проведено на базе инфекционного отделения КГБУЗ «Городская больница № 5, г. Барнаул». Лабораторные исследования биологического материала от пациентов проводили на базе этого же учреждения, а также в лаборатории гемостаза Алтайского филиала ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Минздрава России, г. Барнаул.

Продолжительность исследования

Исследование проведено в период с августа 2021 г. по май 2024 г.

Описание медицинского вмешательства

Всем 63 больным хроническим описторхозом при поступлении в стационар до начала этиотропной терапии празиквантелом производили забор венозной крови для исследования липидного профиля и количественного анализа ВВ методом проточной цитофлуориметрии. Также оценивали кардиоваскулярные нарушения. Для этого выполняли суточное мониторирование артериального давления и электрокардиограммы по Холтеру, частотный и спектральный анализы вариабельности сердечного ритма с помощью программы «Корвег»¹.

Основной исход исследования

В качестве основного исхода исследования рассматривали корреляционные связи концентрации микровезикул воспалительного и эндотелиального происхождения с ЧСС и индексом атерогенности у больных хроническим описторхозом. Для этого анализировали изменение концентрации ВВ в крови: тромбоцитарных (CD41⁺CD31⁺), эндотелиальных (CD41⁻CD31⁺) и лейкоцитарных (CD45⁺).

Анализ в группах

В исследование включили 94 человека, из них основную группу составили 63 больных хроническим описторхозом в возрасте от 18 до 55 лет (33,01±1,12 лет). В контрольную группу вошли 31 соматически здоровый человек, сопоставимый с основной группой по полу и возрасту.

Методы регистрации исходов

Диагноз описторхозной инвазии верифицировали микроскопически при обнаружении яиц описторхов в кале (у 80,0% пациентов) и/или в дуоденальном содержимом (у 20,0% пациентов). Количественный анализ ВВ в образцах венозной крови проводили методом многоцветной проточной цитофлуориметрии на цитометре CytoFLEX (Beckman Coulter, США) с конфигурацией лазеров: красный (638 нм), синий (488 нм), фиолетовый (405 нм). Пробоподготовку образцов и настройку прибора проводили согласно рекомендациям Международного общества по изучению ВВ (International Society for Extracellular Vesicles, ISEV) [21, 22]. Для фенотипирования ВВ использовали панель моноклональных антител, конъюгированных с флуорофором: анти-CD41-PC7 (клон HIP8, BioLegend, США), анти-CD31-BV605 (клон WM-59, BioLegend, США), анти-CD45-APC-Fire750 (клон HI30, BioLegend, США), анти-CD54-APC (клон HA58, BioLegend, США) и анти-CD9-PE (клон HI9a, eBioscience, США). Целевыми субпопуляциями были ВВ тромбоцитарного (CD41⁺CD31⁺), эндотелиального (CD41⁻CD31⁺) и лейкоцитарного (CD45⁺) происхождения, а также ВВ, несущие маркёр воспаления CD54 (молекулу межклеточной адгезии-1, Inter-Cellular Adhesion Molecule 1, ICAM-1). Дополнительно оценивали экспрессию маркёра CD9, который наряду с CD63 и CD81 служит маркёром экзосомальных ВВ [23]. ВВ характеризовали по размеру (0,1–1,0 мкм) с использованием стандартных микрогранул для калибровки диаметром 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкм (Flow Cytometry Sub-micron Particle Size Reference Kit, ThermoFisherScientific, США). На основе данных калибровки устанавливали аналитический диапазон 0,1–1,0 мкм. Данный метод позволяет в одном образце детектировать CD-маркёр и иные молекулы на изучаемых объектах. Для этого используют набор антител, меченых определёнными флуорофорами против целевых молекул. Прибор анализирует каждую частицу и одномоментно регистрирует следующие характеристики: светопропускание, светоотражение, светопреломление. Также прибор измеряет интенсивность флуоресцентного сигнала от связавшихся меченых флуорофором антител. Это позволяет оценить размер частицы, прошедшей через измерительный блок прибора, и наличие маркёрных белков на её поверхности. При этом регистрацию сигнала в выбранном канале рассматривают как положительное событие для соответствующего маркёрного белка. Маркёр CD31 может присутствовать как на тромбоцитарных, так и на эндотелиальных везикулах. Именно поэтому для CD31⁺-событий оценивали, какие из них дополнительно несут на себе маркёр CD41. Соответственно, такие ВВ относили к тромбоцитарным (CD41⁺CD31⁺, рис. 2, c) и эндотелиальным (CD41⁻CD31⁺, рис. 2, d).

 

Рис. 2. Стратегия гейтирования для идентификации и фенотипирования внеклеточных везикул методом проточной цитометрии. a, b — репрезентативные точечные диаграммы рассеяния, демонстрирующие события, позитивные по маркёру CD41⁺ «a» и маркёру CD31⁺ «b». c, d — выделение субпопуляций внеклеточных везикул на основе коэкспрессии маркёров: тромбоцитарные ВВ (CD41⁺CD31⁺) «c» и эндотелиальные ВВ (CD41^–CD31⁺) «d». e, f — оценка экспрессии маркёра воспаления CD54⁺ на выделенных субпопуляциях: тромбоцитарных (CD41⁺CD31⁺CD54⁺) «e» и эндотелиальных (CD41^–CD31⁺CD54⁺) «f» внеклеточных везикулах.

 

На основе заданных характеристик определяли фенотип и соотносили ВВ со соответствующей родительской клеткой, а также считали количество таких положительных событий. Поскольку ВВ различного клеточного происхождения несут на себе одинаковые маркёрные белки, для точного определения фенотипа используют гейтирование — «просеивание» полученных результатов (см. рис. 2). На рис. 2, a и 2, b для одного образца показаны CD41⁺- и CD31⁺-события с размерами менее 1,0 мкм. Видно разделение группы CD31⁺-событий на две непересекающиеся субпопуляции: CD41⁺ и CD41⁻ (показано стрелками). Далее определяли, какая доля эндотелиальных и тромбоцитарных ВВ экспрессируют маркёр воспаления CD54, который может передаваться от родительской клетки. Для этого оценивали флуоресцентный сигнал в канале CD54⁺ для популяций с фенотипом CD41⁺CD31⁺ и CD41⁻CD31⁺ (см. рис. 2, e и рис. 2, f соответственно).

Этическая экспертиза

Исследование одобрено локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России (протокол № 3, от 25.02.2021). Все пациенты до включения в исследование добровольно подписали форму информированного согласия, утверждённую данным комитетом.

Статистические процедуры

Запланированный размер выборки:

Размер выборки предварительно не рассчитывали.

Статистические методы:

Анализ проводили с использованием пакета программ Statistica 7.0 (StatSoft, США). Количественные данные, представленные как CD-положительные события (CD⁺) в 1,0 мкл, описаны в виде Me (Q1; Q3), где Me — медиана, Q1 и Q3 — 25-й и 75-й процентиль соответственно. Для сравнения двух независимых групп использовали непараметрический U-критерий Манна–Уитни. Силу корреляционной связи определяли по шкале Чеддока с расчётом коэффициента корреляции Пирсона. Различия считали значимыми при p <0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Объекты исследования

В исследование включили 94 человека: основная группа — 63 пациента хроническим описторхозом в возрасте 18–55 лет (33,01±1,12 лет), из них 42 женщины (33,01±1,5 лет) и 21 мужчина (30,2±2,27 лет); контрольная группа — 31 соматически здоровый человек от 22 до 25 лет (24,5±1,07 лет), из них 11 женщин (24,54±1,15 лет) и 20 мужчин (24,5±1,04 лет).

Основные результаты исследования

У всех участников основной группы продолжительность инвазии составила более 5 лет. У 73,0% пациентов диагностировали кардиоваскулярные нарушения и дислипидемию. Критериями дисфункции сердечно-сосудистой системы служили клинические проявления, результаты инструментальных обследований, а именно: суточного мониторирования артериального давления и электрокардиограммы по Холтеру, частотного и спектрального анализов сердечного ритма с помощью программы «Корвег». Наиболее частые жалобы со стороны сердечно-сосудистой системы включали тахикардию (42,8%), аритмию (17,4%), боли в области сердца (12,6%).

Анализ липидного профиля выявил повышение индекса атерогенности с коэффициентом более 3 у.е. (диапазон 3,1–5,13 у.е.) у 60% больных хроническим описторхозом, что рассматривают в качестве предикторного признака. Также в малой выборке зарегистрировали повышение концентрации аполипопротеина А1 от 1,71 до 2,67 мг/мл (норма 0,73–1,7 мг/мл) у 15,9% пациентов и аполипопротеина В от 1,61 до 4,35 мг/мл (норма 0,6–1,4 мг/мл) более чем у 50% пациентов основной группы, что требует дополнительного изучения.

У больных хроническим описторхозом выявили достоверное увеличение количества ВВ, несущих маркёр: CD41⁺ (p=0,035), CD31⁺ (p=0,033), CD54⁺ (p=0,033) и CD45⁺ (панлейкоцитарные, p=0,041), по сравнению с контрольной группой (табл. 1). Поскольку тромбоцитарные ВВ несут на себе как CD41, так и CD31 маркёры, для их фенотипирования провели анализ комбинаций. Это позволило идентифицировать следующие популяции: CD41⁺CD31⁺ (тромбоцитарные ВВ) и CD41⁻CD31⁺ (эндотелиальные ВВ). Дополнительно оценивали экспрессию на лейкоцитарных и эндотелиальных ВВ маркёра воспаления CD54 (ICAM-1), который отражает адгезию лейкоцитов к эндотелию при иммунно-воспалительных реакциях (табл. 2). В основной группе установили достоверное увеличение концентрации ВВ тромбоцитарного и эндотелиального происхождения (p=0,033 и p=0,026 соответственно), а также лейкоцитарных везикул, несущих маркёр воспаления CD54⁺ (p=0,017).

 

Таблица 1. Количество внеклеточных везикул с положительной экспрессией изучаемых маркёров в 1,0 мкл бестромбоцитарной плазмы в группах исследования

Группы исследования	CD41+	CD31+	CD54+	CD45+	CD9+
Основная группа (n=63)	170*	5515*	210*	1190*	32 565
	(115; 300)	(345; 21 105)	(125; 410)	(85; 24 700)	(23 175; 51 330)
	(p=0,035)	(p=0,033)	(p=0,033)	(p=0,041)	(p=0,169)
Контрольная группа (n=31)	132,5	435,0	160,0	110,0	30 017,5
	(90; 185)	(200; 8210)	(110; 200)	(75; 12 850)	(20 750; 38 380)

* различия статистически значимы по сравнению с контрольной группой (p <0,05).

 

Таблица 2. Количество внеклеточных везикул различного происхождения и уровень коэкспрессии маркёра CD54⁺ в 1,0 мкл бестромбоцитарной плазмы в группах исследования

Группы исследования	CD41+CD31+	CD41−CD31+	CD41−CD31+CD54+	CD45+CD54+
	Тромбоцитарные	Эндотелиальные	Эндотелиальные с маркёром CD54+ (ICAM-1)	Лейкоцитарные с маркёром CD54+ (ICAM-1)
Основная группа (n=63)	115*	6080*	0	10*
	(60; 120)	(305; 18 850)	(0; 0)	(5; 90)
	(p=0,033)	(p=0,026)	(p=0,104)	(p=0,017)
Контрольная группа (n=31)	92	527	5	5
	(70; 113)	(190; 8715)	(0; 10)	(0; 15)

* различия статистически значимы по сравнению с контрольной группой (p <0,05).

 

Качественный состав ВВ (экзосомальных или эктосомальных) оценивали по наличию маркёра CD9⁺ в популяциях везикул тромбоцитарного (CD9⁺CD41⁺CD31⁺), эндотелиального (CD9⁺CD41⁻CD31⁺) и лейкоцитарного (CD9⁺CD45⁺) происхождения. Результаты показали достоверное увеличение количества CD9⁺-событий во всех указанных популяциях в основной группе по сравнению с контрольной (табл. 3).

 

Таблица 3. Количество внеклеточных везикул различного происхождения, экспрессирующих маркёр CD9⁺, в 1,0 мкл бестромбоцитарной плазмы в группах исследования

Группы исследования	CD9+CD41+CD31+	CD9+CD41−CD31+	CD9+CD45+
	Тромбоцитарные	Эндотелиальные	Лейкоцитарные
Основная группа (n=63)	115*	3279*	95*
	(75; 205)	(75; 10 510)	(15; 2200)
	(p=0,033)	(p=0,008)	(p=0,009)
Контрольная группа (n=31)	92	100	15
	(60; 120)	(35; 2955)	(5; 120)

* различия статистически значимы по сравнению с контрольной группой (p <0,05).

 

Оценка содержания CD9⁺-везикул в популяциях ВВ тромбоцитарного, эндотелиального и лейкоцитарного происхождения установила, что все CD41⁺CD31⁺-события также несли маркёр CD9 в обеих группах исследования. Для ВВ эндотелиального происхождения (CD41⁻CD31⁺) выявили не только увеличение их количества в основной группе, но и рост доли CD9⁺-везикул среди них (46,2% и 23,3% в основной и контрольной группах соответственно). Для лейкоцитарных ВВ статистически значимого изменения процентного соотношения не обнаружили (табл. 4).

 

Таблица 4. Процент внеклеточных везикул, экспрессирующих маркёр CD9⁺, в родительских популяциях тромбоцитарного, эндотелиального и лейкоцитарного происхождения

Группы исследования	CD9+CD41+CD31+	CD9+CD41−CD31+	CD9+CD45+
	Тромбоцитарные	Эндотелиальные	Лейкоцитарные
Основная группа (n=63)	100%	46,2%*	12,9%
	(100%; 100%)	(29,2%; 62,2%)	(6,6%; 20,7%)
	p=0,847	p=0,009	p=0,299
Контрольная группа (n=31)	100%	23,3%	9,9%
	(100%; 100%)	(15,5%; 31,1%)	(3,5%; 13,6%)

* статистически значимые различия основной и контрольной групп (p <0,05).

 

Дополнительный анализ количества CD9⁺-везикул во всех детектируемых популяциях подтвердил статистически значимое увеличение при хроническом описторхозе и ранее исследованных ВВ: тромбоцитарных (CD41⁺CD31⁺), лейкоцитарных (CD45⁺), а также CD9⁺-везикул эндотелиального происхождения (CD9⁺CD41⁻CD31⁺). Данные результаты указывают на активацию тромбоцитов, воспалительного процесса и эндотелиальной дисфункции.

У больных хроническим описторхозом с сердечно-сосудистыми проявлениями выявили значимые различия с группой контроля. А именно, обнаружили достоверное увеличение концентрации эндотелиальных (p=0,002) (CD41⁻CD31⁺-, CD9⁺CD41⁻CD31⁺-события) и лейкоцитарных ВВ (p=0,006). Корреляционный анализ показал умеренную положительную связь (рис. 3, табл. 5) между ЧСС и концентрацией маркёров воспаления CD54⁺ (r=0,435, p <0,05) и CD45⁺CD54⁺ (r=0,403, p <0,05). Также значимые различия в количестве ВВ во всех исследуемых фракциях (CD41⁺, CD31⁺, CD54⁺, CD45⁺, CD41⁺CD31⁺, CD41⁻CD31⁺, CD45⁺CD54⁺, CD9⁺CD41⁺CD31⁺, CD9⁺CD41⁻CD31⁺, СD9⁺CD45⁺) установили у пациентов хроническим описторхозом с преобладанием гипер- и симпатического вегетативного тонуса. Оценка взаимосвязей изучаемых ВВ с показателями липидограммы выявила значительную положительную корреляцию (рис. 4, см. табл. 5) между индексом атерогенности и количеством ВВ эндотелиального происхождения (CD31⁺, CD41⁻CD31⁺, r=0,613, p=0,047).

 

Рис. 3. Корреляционная взаимосвязь между концентрацией внеклеточных везикул, экспрессирующих маркёр воспаления CD54⁺, и частотой сердечных сокращений у пациентов с хроническим описторхозом. ЧСС — частота сердечных сокращений.

 

Таблица 5. Корреляционные взаимосвязи между количеством внеклеточных везикул и значимых маркёров риска кардиоваскулярных нарушений при описторхозной инвазии (шкала Чеддока)

Фенотип внеклеточных везикул	Индекс атерогенности	Частота сердечных сокращений
CD31+	r=0,610	r=0,029
CD45+	r=0,393	r=0,236
CD41−CD31+	r=0,613	r=0,040
CD9+CD41−CD31+	r=0,509	r=−0,019
CD9+CD45+	r=0,313	r=0,130
CD54+	r=−0,179	r=0,435
CD45+CD54+	r=−0,237	r=0,403

Примечание. Интерпретация коэффициента корреляции (r) по шкале Чеддока: менее 0,3 — слабая связь; 0,3–0,5 — умеренная; 0,5–0,7 — заметная; от 0,7–0,9 — высокая; более 0,9 — весьма высокая.

 

Рис. 4. Корреляционная взаимосвязь между концентрацией эндотелиальных внеклеточных везикул (CD31⁺) и индексом атерогенности у пациентов с хроническим описторхозом (r=0,613, p=0,047). ИА — индекс атерогенности.

 

ОБСУЖДЕНИЕ

Резюме основного результата исследования

У 63 больных хроническим описторхозом выявили значимое повышение концентрации в крови ВВ: тромбоцитарных (CD41⁺CD31⁺), эндотелиальных (CD41⁻CD31⁺) и лейкоцитарных (CD45⁺). Установили положительную корреляцию количества микровезикул воспалительного происхождения с ЧСС, а везикул эндотелиального происхождения — с индексом атерогенности. Полученные данные позволяют рассматривать микровезикулы в качестве потенциальных высокочувствительных маркёров («жидкостная биопсия») риска развития кардиоваскулярных событий при описторхозной инвазии [16, 24].

Интерпретация результатов исследования

В настоящее время ВВ, включая экзосомы, активно изучают при различных патологиях и признаются научным сообществом в качестве эффекторов, выполняющих широкий спектр биологически важных функций [18, 19, 25, 26]. В ряде публикаций показали увеличение концентрации определённых типов ВВ у пациентов с острым коронарным синдромом, атеросклерозом, ишемическим инсультом, сахарным диабетом, системной и лёгочной гипертензией, гипертриглицеридемией, а также при тромботических заболеваниях [18, 27, 28]. Это позволило рассматривать микровезикулы в качестве потенциальных маркёров и участников патологических процессов [18, 27, 28].

В проведённых нами исследованиях у пациентов хроническим описторхозом, который в 33% случаев сопровождался кардиоваскулярными нарушениями при длительности инвазии более пяти лет [12], также установили значимое повышение концентрации тромбоцитарных (CD41⁺CD31⁺, p=0,033), эндотелиальных (CD41⁻CD31⁺, p=0,026) и лейкоцитарных (CD45⁺, p=0,041) везикул. В основной группе у эндотелиальных везикул отмечено увеличение экспрессии маркёра CD9 (CD9⁺CD41⁻CD31⁺, р=0,008), что может свидетельствовать о возрастании продукции экзосом эндотелиального происхождения. Полученные результаты отражают процессы активации тромбоцитов, развития воспалительного процесса и эндотелиальной дисфункции, где в роли высокочувствительных маркёров могут выступать микровезикулы. Данные согласуются с существующими работами о роли ВВ в развитии кардиоваскулярных событий, связанных с нарушениями гемостаза и эндотелиальной дисфункцией [17–20, 23, 25]. Авторы подчёркивают специфичность профиля ВВ при различных патологиях, что определяет их практическую значимость в качестве маркёра диагностики, прогнозирования и оценки эффективности терапии [18–20].

Микровезикулы, помимо важной роли в межклеточной коммуникации и вклада в тромботические проявления, рассматривают в качестве диагностического инструмента для неинвазивной «жидкостной биопсии» [29]. Однако широкое применение данной методики в клинической практике ограничено. Это послужило основой для поиска корреляции между концентрацией ВВ и наиболее патогенетически значимыми и доступными маркёрами кардиоваскулярных нарушений при описторхозной инвазии. Повышение ЧСС на фоне выраженной симпатикотонии у обследованных больных является одним из наиболее значимых предикторов кардиоваскулярных нарушений при описторхозе. При анализе дислипидемии предикторное значение у таких больных показал также и индекс атерогенности. Его повышение наблюдали не менее чем в 60% случаев и в среднем достигало 82% даже при нормальных показателях общего холестерина [13]. Корреляционный анализ позволяет сопоставить определённые фракции ВВ с рутинными клиническими показателями. Так, наблюдали положительную корреляцию концентрации микровезикул воспалительного происхождения с ЧСС: CD54⁺ (r=0,435, p <0,05) и CD45⁺54⁺ (r=0,403, p <0,05). Также концентрация микровезикул эндотелиального происхождения ассоциирована с индексом атерогенности (CD31⁺, CD41⁻CD31⁺; r=0,613, р=0,047). Это позволяет рассматривать данные ВВ в качестве потенциально ранних и чувствительных маркёров воспаления и эндотелиальной дисфункции, концентрации которых могут быть соотнесены с доступными для широкой практики показателями ЧСС и индекса атерогенности.

Ограничения исследования

При планировании и проведении исследования размер выборки, необходимый для достижения требуемой статистической мощности результатов, не рассчитывали. В связи с этим полученная выборка участников не может считаться в достаточной степени репрезентативной, что не позволяет экстраполировать полученные результаты и их интерпретацию на генеральную совокупность аналогичных пациентов за пределами исследования.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, результаты проведённых исследований позволяют рассматривать микровезикулы как потенциальные высокочувствительные маркёры («жидкостная биопсия») развития воспаления и эндотелиальной дисфункции. Их специфичность определяет возможную роль в прогнозировании риска атерогенеза и последующих кардиоваскулярных событий в патогенезе описторхозной инвазии.

Раннее выявление пациентов, подверженных риску развития сердечно-сосудистых заболеваний на фоне хронической патологии печени, позволило бы терапевтам, гастроэнтерологам, кардиологам и инфекционистам координировать действия по прогнозированию кардиоваскулярных осложнений для направленной профилактики и терапии, в том числе дегельминтизацию при хроническом описторхозе. Для уточнения полученного результата и выявления других взаимосвязей внеклеточных везикул с доступными маркерами кардиоваскулярного риска запланированы дальнейшие исследования для внедрения в клиническую практику.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Вклад авторов. М.Э. Иванова — курация, диагностика и консервативное лечение пациентов, статистический анализ данных, сбор и анализ литературных данных, написание текста рукописи; Н.В. Карбышева — анализ литературных данных, написание и редактирование текста рукописи; А.П. Момот — разработка концепции и дизайна исследования, анализ результатов, редактирование текста рукописи; М.А. Никонорова — анализ литературных данных, написание и редактирование текста рукописи; О.В. Бесхлебова — сбор и анализ литературных данных, написание текста рукописи; А.В. Кудинов — проведение лабораторных исследований (проточная цитофлуориметрия), статистический анализ данных, анализ литературных данных, редактирование текста рукописи; И.Н. Киушкина — сбор и анализ литературных данных. Все авторы одобрили рукопись (версию для публикации), а также согласились нести ответственность за все аспекты работы, гарантируя надлежащее рассмотрение и решение вопросов, связанных с точностью и добросовестностью любой её части.

Этическая экспертиза. Исследование одобрено локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России (протокол № 3 от 25.02.2021). Все участники исследования до включения в исследование подписали добровольное информированное согласие, утверждённую в составе протокола исследования этическим комитетом.

Источник финансирования. Научное исследование выполнено в рамках государственного задания № 122021100080-5 за счёт средств федерального бюджета.

Раскрытие интересов. Авторы заявляют об отсутствии отношений, деятельности и интересов за последние три года, связанных с третьими лицами (коммерческими и некоммерческими), интересы которых могут быть затронуты содержанием статьи.

Оригинальность. При создании настоящей работы авторы не использовали ранее опубликованные сведения (текст, иллюстрации, данные).

Доступ к данным. Редакционная политика в отношении совместного использования данных к настоящей работе не применима.

Генеративный искусственный интеллект. При создании настоящей статьи технологии генеративного искусственного интеллекта не использовали.

Рассмотрение и рецензирование. Настоящая работа подана в журнал в инициативном порядке и рассмотрена по обычной процедуре. В рецензировании участвовали два внешних рецензента журнала.

ADDITIONAL INFORMATION

Author contributions: M.E. Ivanova: investigation (patient management, diagnosis, non-surgical treatment), formal analysis, data curation, writing—original draft, writing—review & editing; N.V. Karbysheva: data curation, writing—original draft, writing–review & editing; A.P. Momot: conceptualization, formal analysis, writing—review & editing; M.A. Nikonorova: formal analysis, writing—original draft, writing—review & editing; O.V. Beskhlebova: data curation, formal analysis, writing—original draft; A.V. Kudinov: investigation (flow cytometry), formal analysis, writing—review & editing; I.N. Kiushkina: data curation, formal analysis. All the authors approved the version of the manuscript to be published and agreed to be accountable for all aspects of the work, ensuring that questions related to the accuracy or integrity of any part of the work are appropriately investigated and resolved.

Ethics approval: The study was approved by the Local Ethics Committee of the Altai State Medical University of the Ministry of Health of the Russian Federation (Minutes No. 3, dated February 25, 2021). All participants provided written informed consent approved by the Ethics Committee as part of the study protocol to participate in the study.

Funding sources: This study was conducted as part of State Assignment No. 122021100080-5 funded by the federal budget.

Disclosure of interests: The authors have no relationships, activities, or interests for the last three years related to for-profit or not-for-profit third parties whose interests may be affected by the content of the article.

Statement of originality: No previously published material (text, images, or data) was used in this work.

Data availability statement: The editorial policy regarding data sharing does not apply to this work.

Generative AI: No generative artificial intelligence technologies were used to prepare this article.

Provenance and peer-review: This paper was submitted unsolicited and reviewed following the standard procedure. The peer-review process involved two external reviewers.

 

¹ Patent RUS № 2000610883/ 08.09.2000. Plotnikova EJ, Beloborodova EI, Orlova LA, Tynkevich MA. Physiological basis application of "CORVEG" program. Bulletin of the International Scientific Surgical Association. 2006;1(2);48–49. EDN: XGIXNB

About the authors

Maria E. Ivanova

Altai State Medical University

Email: ivanova.akcomd@yandex.ru
ORCID iD: 0009-0007-9413-3216
SPIN-code: 3345-9251
Russian Federation, Barnaul

Nina V. Karbysheva

Altai State Medical University

Email: nvk80@rambler.ru
ORCID iD: 0000-0001-8320-3468
SPIN-code: 7917-7849

MD, Dr. Sci. (Medicine), Professor

Russian Federation, Barnaul

Andrey P. Momot

Altai State Medical University; National Medical Research Center of Hematology

Email: xyzan@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-8413-5484
SPIN-code: 8464-9030

MD, Dr. Sci. (Medicine), Professor

Russian Federation, Barnaul; Moscow

Marina A. Nikonorova

Altai State Medical University

Author for correspondence.
Email: ma.nikulina@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-6621-9310
SPIN-code: 5396-5198

MD, Dr. Sci. (Medicine), Assistant Professor

Russian Federation, Barnaul

Olga V. Beskhlebova

Altai State Medical University

Email: olg.deriglazova@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0003-4561-1019
SPIN-code: 5033-5574

MD, Cand. Sci. (Medicine), Assistant Professor

Russian Federation, Barnaul

Alexey V. Kudinov

National Medical Research Center of Hematology

Email: kudinovalexej@gmail.ru
ORCID iD: 0000-0002-0967-6117
SPIN-code: 6231-4604
Russian Federation, Moscow

Irina N. Kiushkina

Altai State Medical University

Email: i.kiushkina@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-8106-3024
SPIN-code: 4032-8818

MD, Cand. Sci. (Medicine), Assistant Professor

Russian Federation, Barnaul

References

Supplementary files